钓鱼网站源码一、细菌内毒素检查法的定义：
●本法是利用鲎试剂与 细菌内毒素产生凝聚反应的机理，以判断供试品中的细菌内毒素限度是否符合规定的一种方法。 二、背景介绍：
●1、细菌内毒素
●2、热原
●3、鲎
1、细菌内毒素
●细菌内毒素是一种革兰氏阴性细菌细胞壁的产物，当其死亡或菌体裂解时释放出的一类具有多种生物活性的毒性物质
特性：
●（1）.致热性：内毒素作用人体细胞，使之释放内源性热原，刺激下丘脑体温调节中枢，引起发热反应。
●（2）.耐热性：需250度干热30分钟才能彻底灭活。
●（3）.分子极性：多糖链亲水，脂肪链疏水，在水中呈不均匀分布。
●（4）.鲎反应：能与鲎试剂发生多级酶促反应，形成凝胶。
2、热原
2.1热原是指临床上引起哺乳动物发热反应的物质
2.2
细胞分裂素（ IL-1, IL-2, IL-6, IL-8 ）
内源性热原 ｛
产生细胞分裂素的物质
内毒素热原
外源性热原 ｛ 非内毒素热原（病毒、细菌、真
菌、抗体-抗原复合物、细胞分裂素）
2.3热原和内毒素的关系：
2.3.1热原是否就是内毒素？
在学术上仍有争议，热原不仅是细菌内毒素。但在药检的范畴，细菌内毒素是主要的热原物质，可以说无内毒素就无热原，控制内毒素就是控制热原。
3、鲎
3.1鲎(horseshoe crab)是一类与三叶虫 (现在只有化石)一样古老的动物。鲎的祖先出现在地质历史时期古生代的泥盆纪，当时恐龙尚未崛起，原始鱼类刚刚问世，随着时间的推移，
与它同时代的动物或者进化、或者灭绝，而惟独只有鲎从4 亿多年前问世至今仍保留其原始而古老的相貌，所以鲎有“活化石”之称。又具有很高的药用价值。
3.2鲎试剂
鲎的血液中含有铜离子，它的血液是蓝的。鲎血液颜呈蓝，是因为鲎血浆的主要成分是血蓝蛋白。这种蓝血液的提取物——“鲎试剂”。鲎试剂是由海洋生物鲎的血液提取物制成的“鲎试剂”，能够准确、快速地检测人体是否因细菌感染而致病；鲎试剂在制药行业中，用于检测细菌内毒素。目前使用的鲎试剂分为美洲鲎试剂和东方鲎鲎试剂两大类。
三、2010年版药典细菌内毒素检查法介绍
●整体结构
●1. 综述部分
–检查法的描述
–限值（L）的确定
–确定最大有效稀释倍数（MVD）
1.1细菌内毒素检查法介绍
●细菌内毒素检查包括：
限量实验 浊度法
动态浊度法
凝胶法 ｛ 光度测定法｛ 终点浊度法
半定量实验
显基质法
动态显法
终点显法
●可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
电梯门机系统
1.2试验的准备
实验所需物品
●细菌内毒素标准物质
●细菌内毒素检查用水
●凝胶法鲎试剂
●漩涡混合器
●适宜的恒温器 37± 1℃
●电热干燥箱 250 ℃
●实验器械等
1.3细菌内毒素标准物质
●a 国家标准品
以内毒素国际标准品为基准标定效价。系自大肠埃系菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
150600-200707 10000EU/支
●b 工作标准品
以内毒素国家标准品为基准标定效价。用于试验中鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
150601-200968 150EU/支
1.4细菌内毒素检查用水
●用于复溶内毒素标准品、稀释内毒素及样品、溶解鲎试剂等
●a 凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水
●b 光度测定法细菌内毒素检查用水，其内毒素含量应小于0.005EU/ml
1.5试验器械
●移液管（或刻度吸管、微量加样器及无热原吸头）、凝集管（10×75mm）、试管、试管架、洗耳球、封口膜、计时器、75%酒精棉、剪刀、砂轮。
1.6试验的准备
1.6.1试验器械的要求
–试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。常用的方法是在250℃ 干
烤至少30分钟，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。
–若使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。试验操作过程应防止微生物是污染。
–某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。
–一般要求供试品溶液的pH值在6.0～8.0的范围内。对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的pH值，可使用酸、碱溶液或鲎试剂生产厂家推荐的适宜的缓冲液调节pH值。
–缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。
1.7限值（L）的确定
1.7.1-药品、生物制品的细菌内毒素限值（L）除药典有规定的，一般按以下公式确定：
L＝K／M
–按人用剂量计算限值时，如遇特殊情况，可根据生产和临床用药实际情况做必要调整，但需说明理由。
1.7.2计算举例：注射用阿莫西林钠
–根据国家药典委员会编纂的《临床用药须知》：“肌肉注射或稀释后静脉滴注，一次0.5～1g，一日3～4次：小儿按体重每日50～100mg/kg，分3～4次静脉滴注。”
–M成人＝1000mg/h÷60kg＝16.67mg/(kg·h)
M儿童＝100mg/(kg·h)÷3＝33.3mg/(kg·h)
–L=K/M=5EU/(kg·h)÷33.3 mg/(kg·h)=0.150EU/mg
1.7.3限值计算时做必要调整的几种情况
–从严原则
–联合用药
–特殊情况等
1.8确定最大有效稀释倍数（MVD）
1.8.1最大有效稀释倍数是指供试品溶液被允许稀释的最大倍数，在不超过此稀释倍数的浓
度下进行内毒素限值的检测。
MVD＝cL／λ
L：供试品的内毒素限值
c：供试品溶液的浓度
λ：在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度(EU/ml)，
或在光度测定法中所使用的标准曲线上最
低的内毒素浓度(如标准曲线为50、5、
0.5EU/ml三个浓度组成)
1.8.2计算举例
a 当L以EU/ml表示时，则浓度C的单位为1.0ml/ml
适用于供试品为溶液状态，并且规定限值为应
小于xx EU/ml。
例：替硝唑注射液，计算限值为0.5EU/ml，使用
灵敏度为0.125EU/ml的鲎试剂进行检验，则：
MVD＝1.0ml/ml×0.5EU/ml÷0.125EU/ml＝4倍
b 当L以EU/mg表示时，则C的单位为mg/ml或U/ml适用于供试品为固体状态，如粉针；或液体但是规定限值为应小于xx EU/mg或EU/U。
例：注射用阿莫西林钠
计算限值为0.15EU/mg，使用灵敏度为0.25EU/ml的鲎试剂进行检验。
需先称取一定重量的注射用阿莫西林钠，在已除去外源性内毒素的容器中，用细菌内毒素检查用水配制成一定浓度的溶液。
如称取100mg注射用阿莫西林钠，用5ml内毒素检查用水溶解，即成为浓度为20mg/ml的阿
莫西林钠溶液。
MVD＝20mg/ml×0.15EU/mg÷0.25EU/ml＝12倍
1.8.3如果供试品为注射液无菌粉末或原料药，则MVD取1，
计算供试品的最小有效稀释浓度c=λ/L ；
适用于供试品为固体的情况。计算得到的最小有效稀释浓度即为MVD下的该供试品的浓度。
贝克曼梁法 例：注射用阿莫西林钠
计算限值为0.15EU/mg，使用灵敏度为0.125EU/ml的鲎试剂进行检验。
最小有效稀释浓度
c ＝0.125 EU/ml÷0.15EU/mg＝0.833mg/ml
2、实验部分
2.1鲎试剂灵敏度复核试验
●目的
－考察鲎试剂的灵敏度是否准确
－考察检验人员操作方法是否正确
－实验条件是否符合规定
●何时进行
－使用新批号的鲎试剂
－试验条件发生可能影响检验结果的改变时
实验操作:
●取细菌内毒素国家标准品或工作标准品一支，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟。
●然后进行稀释，制备成4个浓度的细菌内毒素标准溶液,即2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ（λ为所复核的鲎试剂的标示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟。
鲎试剂灵敏度复核试验
内毒素浓度 | 2λ | λ | 0.5λ | 0.25λ | 阴性对照 | 醇醚燃料
鲎试剂鞋帮 平行管 | ○ | ○ | ○ | ○ | ○ |
○ | ○ | ○ | ○ | ○ |
○ | ○ | ○ | ○ | |
○ | ○ | ○ | ○ | |
| | | | | |
阳极铜
●放入37℃±1℃的恒温器中，保温60分钟±2分钟
●将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；形成的凝胶不坚实、变形或从管壁滑脱者为阴性；
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议