活性炭吸附力及本底值的检验方法研究
摘要：通过鲎试剂灵敏度复核实验、凝胶法干扰实验、凝胶限度法实验研究活性炭对细菌内毒素的吸附作用以及活性炭所含内毒素本底值的检测方法。加入200 EU/ml及20 EU/ml的标准内毒素溶液，按照中国药典通则1143检测，能使内毒素溶液含量均下降2个数量级。活性炭细菌内毒素本底值的检测运用凝胶法检测供试品合格，含2λ的内毒素溶液经过过滤后，滤液能使鲎试剂（灵敏度为0.03EU/ml）凝集，无干扰。 关键词：活性炭；细菌内毒素；本底值；吸附力；漩涡混合
引言：运用凝胶限度法实验研究活性炭对细菌内毒素的吸附作用以及活性炭所含内毒素本底值的检测方法。加入200 EU/ml及20 EU/ml的标准内毒素溶液，按照中国药典通则1143检测，能使内毒素溶液含量均下降2个数量级。活性炭细菌内毒素本底值的检测运用凝胶法检测供试品合格。
正文：
1.实验材料
1.1仪器设备乙酸正丁酯的制备
设备名称 | 型号 | 厂家 |
| 磁动车 ET-96内毒素凝胶法 测定仪 | ET-96 | 天津市天大天发科技有限公司 |
电热恒温干燥箱 | DL-201BS | 天津市中环实验电炉有限公司 |
ZH-2型自动旋涡混合器电暖画 | ZH-2 | 上海安谱科学仪器有限公司 |
电子分析天平 | XA105 | 梅特勒-托利多国际贸易（上海）有限公司 |
滤膜 | 0.22um | Millex |
| | |
1.2 试剂试药
验证用试剂 | 厂家 | 批号 | 灵敏度（λ）/规格 |
鲎试剂 | 湛江安度斯生物有限公司 | 21041512 | 0.03 EU/ml |
细菌内毒素工作标准品 | 湛江安度斯生物有限公司 | 1910171 | 10EU/支 |
细菌内毒素检查用水 | 2008040 | 50ml |
细菌内毒素国家标准品（活性炭专用） | 中国食品药品检定研究院 | 150605-201501 | 10000EU/支 |
| | | |
2.方法与结果
2.1活性炭吸附力的检测
2.1.1细菌内毒素国家标准品稀释方法
准确吸取细菌内毒素检查用水lml加入细菌内毒素工作标准品的安瓿内，置旋涡混合器混匀15分钟，即得10000EU/ml内毒素标准溶液，逐级稀释到实验所需标准品的浓度。
2.1.2细菌内毒素工作标准品溶液的配制方法
取细菌内毒素工作标准品，用细菌内毒素检查用水溶解，封闭管口,在旋涡混合器上振荡15分钟后逐级稀释到2.5 EU/ml、0.625EU/ml、0.125 EU/ml、0.0625 EU/ml的标准溶液，作为混合好的标准溶液备用。以上稀释步骤在做下一步稀释前应置旋涡混合器上混合至少30秒钟。
2.1.3供试品溶液的制备
取细菌内毒素国家标准品，用细菌内毒素检查用水溶解，封闭管口,在旋涡混合器上振荡15
分钟后逐级稀释到200 EU/ml、20 EU/ml的标准溶液，作为混合好的标准溶液备用。取本品75mg两份，分别至25ml离心管中，分别加入200EU/ml和20EU/ml的细菌内毒素国家标准溶液5ml，混匀,配制成活性炭浓度为1.5%（1.5g/100ml）的混合溶液，漩涡混合9分钟，然后1500转离心5分钟，离心后避免震动，分别取上清液用0.22μm无热原滤膜过滤，取续滤液分别作为第一组样品溶液和第二组样品溶液。取第一组样品溶液1ml，至试管（17×170mm）中，加入细菌内毒素检查用水7ml,混匀, 再取1ml，至试管（15×100mm）中，加入细菌内毒素检查用水3ml,混匀，即得稀释倍数为2的供试品溶液，再取1ml，至试管（15×100mm）中，加入细菌内毒素检查用水1ml，即得供试品溶液①，做好标记。取第二组样品溶液1ml，至（15×100mm）试管中，加入细菌内毒素检查用水2.2ml,混匀, 即得稀释倍数为2的供试品溶液，再取1ml，至试管（15×100mm）中，加入细菌内毒素检查用水1ml，即得供试品溶液②，做好标记。（被测溶液或其稀释液必要时用稀盐酸或碳酸氢钠调节pH值，使供试品溶液与鲎试剂混合后溶液的pH值在6.0至8.0之间）
2.1.4 供试品内毒素溶液配制方法
分别取浓度为4.0λ的内毒素标准液，至试管（15×100mm）中，分别与稀释倍数为2的供试
品溶液①及供试品溶液②等体积混合均匀，即得含2.0λ内毒素浓度的供试品溶液①及内毒素浓度的供试品溶液②，做好标记备用。
打开0.03EU/ml鲎试剂12支，其中2支分别加入0.2ml细菌内毒素检查用水，作为阴性对照组。剩余8支分别加入0.1ml细菌内毒素检查用水进行溶解。取出2支分别加入0.1ml供试品内毒素溶液①，作为供试品阳性对照组①；再取出2支分别加入0.1ml供试品溶液①，作为供试品组①；再取出2支分别加入0.1ml供试品内毒素溶液②，作为供试品阳性对照组②；再取出2支分别加入0.1ml供试品溶液②，作为供试品组②；最后的2支分别加入0.1ml 2.0λ内毒素标准溶液，作为阳性对照组。
2.1.5 结果判断
将上述制得的12支鲎试剂垂直放入37℃±1℃内毒素凝胶测定仪中,保温60分钟±2分钟。保温60分钟±2分钟后，观察并记录结果。将鲎试剂安瓿从内毒素凝胶法测定仪中轻轻取出，避免振动，将每支拿出缓缓倒转180°观察，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）；未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）。若阴性对照溶液平行管均为阴性，供试品阳性对照溶液平行管均为阳
性，阳性对照溶液平行管均为阳性，试验有效。
产品细菌内毒素检查：3批活性炭，用λ为0.03EU/ml的不同厂家的鲎试剂，进行活性炭对200EU/ml、20EU/ml内毒素吸附力的检查，结果见表1、表2。
表1 200EU/ml内毒素吸附力
| NC | PC | NPC① | PPC① | NPC② | 美发镜台 PPC② |
A | 1 | -- | ++ | -- | ++ | -- | ++ |
2 | -- | ++ | -- | ++ | -- | ++ |
3 | -- | ++ | -- | ++ | 电磁 -- | ++ |
| | | | | | | |
表2 20EU/ml内毒素吸附力
| NC | PC | NPC① | PPC① | NPC② | neorPPC② |
A | 1 | -- | ++ | -- | ++ | -- | ++ |
2 | -- | ++ | -- | ++ | -- | ++ |
3 | -- | ++ | -- | ++ | -- | ++ |
| | | | | | | |
2.2 活性炭本底值的检测
2.2.1 细菌内毒素工作标准溶液的配制方法
方法同2.1.2
2.2.2供试品溶液的制备
取本品75mg，至25ml离心管中，加入细菌内毒素检查用水5ml，混匀,配制成活性炭浓度为1.5%（1.5g/100ml）的混合溶液，漩涡混合9分钟，然后1500转离心5分钟，离心后避免震动，取上清液用0.22μm无热原滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液，做好标记。（被测溶液或其稀释液必要时用稀盐酸或碳酸氢钠调节pH值，使供试品溶液与鲎试剂混合后溶液的pH值在6.0至8.0之间）
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议