步骤如下:
(一)固定与修块
取组织块放入Bouin氏液中,组织块的直径应小于7mm。6小时左右后用双面
刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。
1.75%乙醇 50分钟
2.85%乙醇 50分钟
3.95%乙醇 (I) 30分钟
4.95%乙醇 (II) 30分钟
5.100%乙醇(I) 30分钟
6.100%乙醇(II) 30分钟
7 1/2 二甲苯(乙醇与二甲苯等体积) 20分钟
8.二甲苯(I) 20分钟
9.二甲苯(II) 10分钟(可依据透明效果而定)
若脱水不好,二甲苯溶液颜会变混浊。在每一步骤之后,要充分滤干组织
块,一般用筒纸吸干组织块上的液体,以免影响其他液体的浓度,但也要防止组
织块干燥。全过程约需要5h。
(三)浸蜡、包埋与修蜡块
1.浸蜡:将60℃恒温箱打开,使石蜡充分溶解,待脱水与透明结束后,将 组织块转入石蜡里,放置于60℃恒温箱120分钟。
2.包埋:将60℃的石蜡倒入纸盒内,然后用小镊子将各组织块按一定的顺
序排列好,使切面朝下。不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中,以保证切片和
染条件相同。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固,可将纸盒置于一玻璃板
上(或大培养皿内),然后将玻璃板置于80-90℃左右热水上,包埋时蜡盒底部
要放平,做蜡块的蜡要反复冻融较好。
3.修蜡块:待纸盒内蜡凝固后,用刀片将其修成梯形,组织块与蜡块边缘
之间的距离不得小于2mm。
(四)切片
在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上,用手指充分抹 匀,呈半干状为佳。切片厚约4-8μm,将切片在55℃左右水浴中展开,展开程度
以带黄颜的组织完全摊平为准。用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片,
放入37℃烘箱中过夜。每个组织块捞片2张。过夜后,将载玻片置于玻片架上,
进行下面的实验。
(五)脱蜡、染与脱水
倾斜玻片架, 将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干, 减轻对其他试剂浓
度的影响。全过程约需要60分钟。
1.脱蜡投料机
(1)二甲苯(I) 15分钟
儿童远程监控手表(2)二甲苯(II) 15分钟
(3)100%乙醇 2分钟
制作智能卡(4)95%乙醇(I) 1分钟
电火花切割机床(5)95%乙醇(II) 1分钟
(6)蒸馏水浸洗 1分钟
2.染
(7)苏木精 30秒钟
(8)自来水冲洗60秒。(显微镜下观察效果)
(9)伊红(着即可) 10秒钟
(10)蒸馏水浸洗 1分钟
3.脱水
(10)95%乙醇(I) 1分钟
(11)95%乙醇(II) 1分钟
(12)100%乙醇 2分钟
(13)二甲苯(I) 2分钟
消防支架
(14)二甲苯(II) 3-5分钟
(六)封片
将载玻片取下,滴加1~2滴中性树胶,用镊子夹住盖玻片的一角,盖上盖玻
片,之后倾斜载玻片,多余的中性树胶用筒纸吸干,室温下保存。
2.简要版:肝组织HE染切片制作过程
(1)取材与固定:取大鼠肝右叶固定部位组织块,立即投入10%甲醛中,固
定48h。
(2)脱水透明:组织修片,梯度酒精脱水,后二甲苯中透明。动物组织切
成0.2-0.5cm的薄片,依次经过70%酒精2h--*80%酒精2h一95%酒精(I、II各2h)
和无水酒精(I、II各1h)脱水,二甲苯透明(I、II各lh),以置换组织内的酒
精溶液。
(3)浸蜡包埋:将脱水透明好的组织块置入融化的石蜡内,使石蜡浸入组
织并置换出其中的二甲苯。将浸蜡的组织置于包埋器内,并滴入液化蜡进行组织
包埋,后置于冰面上待其凝固。
(4)切片与贴片:将蜡块固定于切片机上,切成5 u m厚的切片,在45"C
的水面上展平后铺在涂有防脱剂的载玻片上,置于65℃烤箱烤3h。
(5)脱蜡:切片置入二甲苯I、Ⅱ各15分钟,不同浓度酒精(100%5min
一95%5s一80%5s一70%5s)置换出其中的二甲苯,最后用PBS液洗净。
(6)HE染:将石蜡切片放入苏木精中染5min一蒸馏水洗净一1%稀盐酸
数字电视手机分化一流水中充分冲洗返蓝,约20min;伊红染5min,流水冲洗干净。
(7)脱水、透明:染好的切片经梯度酒精脱水(70%、80%、95%、100%各5min),
二甲苯透明(I、II各5min)。
(8)封固:在载玻片上加一滴中性树胶,然后覆盖一片清洁的盖玻片封片。
光学显微镜下观察组织病理变化,以i00倍放大率观察切片。【下载本文档,可以自由复制内容或自由编辑修改内容,更多精彩文章,期待你的好评和关注,我将一如既往为您服务】