实验十二 中药化学成分预试验
（一）目的要求
1．掌握常见中药化学成分的鉴别原理及实验技术。
2．能根据实验结果，判断检品中所含化学成分的类型。
3．认真做好预试验记录，正确书写实验报告。
（二）试验材料
本实验中的供试液（品），可根据各类成分鉴别实验的具体需要，选择有代表性的各类成分或含相应成分的药材提取物，根据实验的具体要求进行准备。需要鉴别的主要药物成分的类型有：生物碱、糖、苷、氨基酸、蛋白质、鞣质、黄酮、蒽醌、香豆素、强心苷、皂苷、挥发油、油脂、有机酸等。
（三）实验原理内河航标灯
中药中所含的化学成分很多，在提取分离某种有效成分之前，一般可先通过简单的预试验，初步了解药材中可能含有哪些类型的化学成分，以便选用适当的方法对其中有效成分进行提取、分离。 预试验通常分为二类：系统预试验和单项预试验。其基本原理是利用中药中各类化学成分在不同溶剂中溶解度不同，分成数个部分，如水溶性、醇溶性及石油醚溶性等部分，再分别进行各种定性反应。各成分的检识反应可在试管或滤纸片上进行，也可用谱法，然后根据各化学反应的现象进行分析判断，以了解试样中可能含有哪些类型的化学成分。 （四）实验内容
1．水溶性成分的检识
取中药粗粉5g，加50ml蒸馏水，浸泡过夜，或于50～60℃水浴中温浸1小时，滤过，滤液供检识下列各类成分：
（1）糖、多糖和苷类
1）Molish反应：取1ml供试液于试管中，加入1～2滴10％α-萘酚乙醇试剂摇匀，倾斜试管45°，沿管壁滴加1ml浓硫酸，分成两层。如在两液层交界面出现紫红环，表明可能含有糖、多糖或苷类。 2）斐林反应：取1ml供试液于试管中，加入新配制的4～5滴斐林试剂，在沸水浴中加热数分钟，如产生砖红氧化亚铜沉淀，表明可能含有还原糖。
将上述溶液中沉淀滤过除去，滤液加1ml 10％盐酸溶液，置沸水浴中加热水解数分钟，放冷后，滴加10％氢氧化钠溶液调pH至中性，重复上述斐林反应，如仍产生砖红氧化亚铜沉淀，表明可能含有多糖或苷类。
（2）氨基酸、多肽和蛋白质类
1）茚三酮反应：取供试液点于滤纸片上，喷雾茚三酮试剂后，吹热风数分钟，如呈紫红或蓝，表明可能含氨基酸、多肽或蛋白质。
2）双缩脲反应：取1ml供试液于试管中，加1滴10％氢氧化钠试剂，摇匀，再加0.5％硫酸铜溶液，边加边摇匀，如溶液呈现紫、红紫或蓝紫，表明可能含有多肽或蛋白质。
3）酸性蒽醌紫反应：取供试液点于滤纸片上，喷洒酸性蒽醌紫试剂，如呈现紫，表明可能含有蛋白质。
芯棒
（3）酚类、鞣质类化合物
1）三氯化铁反应：取1ml供试液于试管中，加醋酸酸化后，加数滴1％三氯化铁试剂，溶液如呈显绿、蓝绿、蓝黑或紫，表明可能含有酚性成分或鞣质。
2）三氯化铁-铁反应：取供试液点于滤纸片上，干燥后，喷洒三氯化铁-铁试剂，如立即呈现蓝，表明可能含有鞣质。喷试剂后应立即观察，若放置一段时间，背景也能逐渐呈蓝。如欲使纸上的斑点保存下来，在纸片仍湿润时，用稀盐酸洗涤，再用水洗至中性，置室温干燥即可。
3）香草醛-盐酸反应：取供试液点于滤纸片上，干燥后，喷洒香草醛-盐酸试剂，如立即呈不同程度的红，表明含有间苯二酚和间苯三酚结构的化合物。
4）明胶-氯化钠反应：取1ml供试液于试管中，加入1～2滴明胶-氯化钠试剂，如产生白混浊或沉淀，表明可能含有鞣质。
5）反应：取1ml供试液于试管中，加入数滴0.1％溶液，如产生棕沉淀，表明可能含有鞣质。
（4）有机酸类
1）pH试纸反应：取供试液，以广泛pH试纸测试，如呈酸性，表明可能含有有机酸或酚类成分。
2）溴酚蓝反应：取供试液点于滤纸片上，喷洒0.1％溴酚蓝试剂的70％乙醇溶液，如在蓝背景上产生黄斑点，表明可能含有有机酸。如显不明显，可再喷雾氨水，然后暴露于盐酸蒸气中，背景逐渐由蓝变成黄，而有机酸的斑点仍为蓝。
（5）皂苷类
1）泡沫反应：取2ml供试液于试管中，剧烈振摇2分钟，如产生大量持久性泡沫，再把溶液加热至沸或加入乙醇，再振摇，如仍能产生多量持久性泡沫，表明可能含有皂苷。
2）溶血反应：取供试液点于滤纸片上，干燥后，加1滴2％红细胞试液，数分钟后，如在红背景中出现白或淡黄斑点，表明可能含有皂苷。本实验也可在试管中进行。
2.醇溶性成分的检识
溢水杯取10g中药粗粉，加100ml乙醇，沸水浴中回流提取1小时，滤过。滤液回收乙醇至无醇味，取1/2量浓缩液，加10ml乙醇溶解，供甲项检识。剩余的浓缩液加10ml 5％盐酸，充分搅拌，滤过，滤液部分供乙项检识。酸水不溶部分，加10ml醋酸乙酯溶解，醋酸乙酯液用5％氢氧化钠溶液振摇洗涤2次（每次2～3ml），弃去碱水层。醋酸乙酯层再用蒸馏水洗1～2次，至水洗液呈中性，弃去水洗液，置于水浴上蒸发除去醋酸乙酯，残留物用15ml乙醇溶解，供丙项检识。
甲项检识
（1）鞣质类：同水溶性成分检识
（2）有机酸类：同水溶性成分检识
高频整流器（3）黄酮类
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1）盐酸-镁粉反应：取1ml供试液于试管中，加镁粉适量，摇匀，加2～5滴浓盐酸，即产生剧烈反应，如溶液呈红或紫红，表明可能含有黄酮类。
2）三氯化铝反应：取供试液点于滤纸上，晾干，喷雾三氯化铝试剂，干燥后，斑点呈鲜黄，如在紫外灯下观察，斑点有明显的黄绿荧光，表明可能含有黄酮类。
3）氨熏反应：取供试液滴于滤纸片上或硅胶谱板上，置氨气中熏片刻，斑点呈亮黄，在紫外灯下观察，斑点呈黄荧光，表明可能含有黄酮类。
（4）蒽醌类化合物
1）碱液反应：取1ml供试液于试管中，加10％苛性碱试剂呈红，如加酸使成酸性，则红褪去，表明可能含有蒽醌类。
2）醋酸镁反应：取1ml供试液于试管中，加数滴1％醋酸镁甲醇溶液，如溶液呈橙红、紫等颜，表明可能含有蒽醌类。
（5）甾体和三萜类
1）醋酐-浓硫酸反应：取1ml供试液，置蒸发皿中水浴蒸干，加1ml冰醋酸使残渣溶解，再加1ml醋酐，最后加1滴浓硫酸，如溶液颜由黄→红→紫→蓝→墨绿，表明可能含有甾体类成分。如溶液最终呈现红或紫，表明含有三萜类成分。
2）三氯醋酸反应：取供试液滴于滤纸片上，滴三氯醋酸试剂，加热至60℃，产生红，渐变为紫，表明含甾体类成分。加热至100℃才显红、红紫，表明含有三萜类成分。
3）氯仿-浓硫酸反应：取1ml供试液，置于蒸发皿中水浴蒸干，加1ml氯仿使残渣溶解，将氯仿液转入试管中，加1ml浓硫酸使其分层，如氯仿层显红或青，硫酸层有绿荧光，表明可能含有甾体或三萜。
乙项检识
（1）生物碱类
1）碘化铋钾反应：取1ml供试液于试管中，加1～2滴碘化铋钾试剂，如立即有棕黄至棕红沉淀产生，表明可能含有生物碱。
2）钾反应：取1ml供试液于试管中，加2～3滴钾试剂，如产生白或类白沉淀，表明可能含有生物碱。
3）碘-碘化钾反应：取1ml供试液于试管中，加2～3滴碘-碘化钾试剂，如产生褐或暗褐沉淀，表明可能含有生物碱。
4）硅钨酸反应：取1ml供试液于试管中，加1～2滴硅钨酸试剂，如产生黄沉淀或结晶，表明可能含有生物碱。
丙项检识
（1）强心苷类
隔热pc板1）碱性反应：取1ml供试液于试管中，加数滴碱性试剂，如溶液即刻或15分钟内显红或橙红，表明可能含有强心苷类。
2）间二硝基苯反应：取1ml供试液于试管中，加数滴间二硝基苯试剂，摇匀后再加数滴20％氢氧化钠，如产生紫红，表明可能含有强心苷类。
3）冰醋酸-三氯化铁反应：取1ml供试液于蒸发皿中，水浴上蒸干，残留物加0.5ml冰醋酸-三氯化铁试剂溶解后，置于试管内，沿管壁加入1ml浓硫酸，使分成二层，如上层为蓝绿，界面处为紫或红环，表明可能含有2,6-二去氧糖的强心苷类。
4） 呫吨氢醇反应：取1ml供试液于蒸发皿中，水浴上蒸干，加呫吨氢醇试剂，置水浴上加热2分钟，如溶液显红，表明可能含有2,6-二去氧糖的强心苷类。
本实验也可取强心苷固体试样少许，加入1ml呫吨氢醇试剂振摇，置水浴上加热3分钟，如呈现红，表明可能含有2,6-二去氧糖。
（2）香豆素、内酯类
1）异羟肟酸铁反应：取1ml供试液于试管中，加7％盐酸羟胺醇溶液及10％氢氧化钠溶液各2～3滴，置沸水浴上加热数分钟至反应完全，放冷，加1％盐酸调pH3～4，再加1～2滴1％三氯化铁试剂，如溶液为红或紫，表明可能含有香豆素或内酯类。
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