一种L-苯丙氨酸的药物运用

一种l-苯丙氨酸的药物运用
技术领域
1.本发明涉及通便药物技术领域，具体为一种l-苯丙氨酸的药物运用。

背景技术：

2.l-苯丙氨酸是具有生理活性的芳香族氨基酸，是人体和动物不能靠自身自然合成的必需氨基酸之一，是复配氨基酸输液的重要成份；用于医药，是苯丙氨苄、甲酸溶肉瘤素等氨基酸类抗癌药物的中间体，也是生产肾上腺素、甲状腺素和黑素的原料；已有研究表明，l-苯丙氨酸可作为抗癌药物的载体将药物分子直接导入癌瘤区，其效果是其他氨基酸的3～5倍。这样既可以抑制癌瘤生长，又可以降低药物的毒副作用。l-苯丙氨酸是必需的氨基酸之一。常用作营养强化剂、氨基酸输液和复合氨基酸制剂的成分。
3.在食品行业中，l-苯丙氨酸与l-天冬氨酸缩合形成阿斯巴甜(asparlame，apm)，因其甜度大(为蔗糖的200倍)，发热量低，易代谢等优点，已广泛应用于调味品、功能性食品中。l-苯丙氨酸用于焙烤食品中，一方面强化了氨基酸，还可以与糖反应，发生美拉德反应，改善食品风味。在医药行业中，它是医药输液制品的必需成分，还是合成一些药物的原料或良好的载体。另外，还可以用来配制医药的培养介质。
4.便秘是一种临床常见病，指大便秘结不通，排便时间延长，排便困难。主要由于大肠传导失常，粪便在肠内停留过久，水分被吸收，致粪便干燥。病机主要为肠胃燥热，气机郁滞，津液耗伤。便秘轻者对人体影响不大，重者可致腹胀腹痛，纳差食减，肛门裂伤，血栓性痔疮，肛窦炎，便血，脱肛，以及面部起痘，面侮暗起斑，女性盆腔淤血综合症等。因此，发明人针对l-苯丙氨酸对便秘这一症状的影响进行研究与分析。

技术实现要素：

5.针对以上问题，本发明提供了一种l-苯丙氨酸的药物运用,具体为l-苯丙氨酸在便秘的运用，为便秘药物的开发提供了新思路。
6.本发明的一个技术目的是提供一种l-苯丙氨酸的药物运用，具体为l-苯丙氨酸在制备便秘的药物或食品中的运用。
7.进一步优选的，所述便秘为洛哌丁胺诱导的功能性便秘。
8.与现有技术相比，本发明的有益效果是：l-苯丙氨酸对洛哌丁胺诱导的功能性便秘有很好的效果，能显著缩短排便时间，促进小肠蠕动，具有润肠通便的作用。本发明首次公开了l-苯丙氨酸的通便功效，为便秘药物的开发提供了新思路。
附图说明
9.图1是小鼠体重、脏器指数变化情况；
10.图2是l-苯丙氨酸对便秘小鼠排便的影响；
11.图3是l-苯丙氨酸对便秘小鼠小肠蠕动的影响；
12.图4是l-苯丙氨酸对肠道便秘基因表达的影响；
13.图5是肌球蛋白轻链9(myl9)的蛋白表达情况。
具体实施方式
14.为了使本技术领域的人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。
15.一、材料与方法
16.1.1材料与试剂
17.17～20g昆明种小鼠60只，饲喂在云南农业大学食药同源资源开发与利用教育部工程研究中心动物实验室。
18.洛哌丁胺(默克生命科学公司)，配制方法：精确称量40mg洛哌丁胺，溶于50mlup水，终浓度为60mg
·
ml-1
，备用。
19.墨汁的配置：精确称量20g阿拉伯树胶和10g活性炭粉末，量取160mlup水，将阿拉伯树胶加入水中煮沸至透明。当溶液冷却后，用up水稀释至200ml。
20.1.2方法
21.1.2.1动物分组及方法
22.洛哌丁胺诱导的便秘模型主要是通过抑制肠道蠕动、影响肠道水代谢和肠神经系统而形成便秘。该方法周期短，试验效果好且稳定。实验设置空白组(con)、模型组(lop)和阳性组(pos)，同时设置低剂量l-苯丙氨酸组(lphe)和高剂量l-苯丙氨酸组(hphe),每组小鼠12只。连续7天每日经口灌胃1次，灌胃量0.1ml
·
10g-1
体重。空白组灌胃up水；模型组灌胃8mg
·
kg-1
·
d-1
洛哌丁胺；阳性组灌胃麻仁丸(900mg/kg
˙
bw)和洛哌丁胺(8mg
·
kg-1
·
d-1
)的混悬液；低剂量l-苯丙氨酸组灌胃l-苯丙氨酸(500mg/kg
˙
bw)和洛哌丁胺(8mg
·
kg-1
·
d-1
)的混悬液，高剂量l-苯丙氨酸组灌胃l-苯丙氨酸(750mg/kg
˙
bw)和洛哌丁胺(8mg
·
kg-1
·
d-1
)的混悬液，所有样品采用up水配置成所需浓度。
23.1.2.2排便试验
24.为验证l-苯丙氨酸的通便作用，进行动物的排便实验。l-苯丙氨酸干预的第6天晚上，对各组小鼠进行撤食不撤水的操作。12h后，给各组灌胃up水或相应受试物。1h后对各组小鼠进行墨汁灌胃并开始计时。将灌胃完毕的小鼠分别置于独立笼内，给予充足水源，记录每只小鼠首粒排黑便时间，收集6h内每只小鼠排出的粪便，统计其数量和粪便湿质量。试验结束后，将收集好的粪便样品置于真空干燥箱中，在80℃条件下干燥至恒重。通过公式：
25.粪便含水率(％)＝[粪便湿重(g)-粪便干重(g)]/粪便湿重(g)
×
100％，得到各剂量组小鼠的粪便含水率。
[0026]
1.2.3小肠推进试验
[0027]
为验证l-苯丙氨酸对小鼠肠道运动的促进效果，进行动物的小肠推进试验。物质在小肠内的运动速率即胃肠转运率是受试物是否具有润肠通便功效的重要参考。墨汁推进率及小肠长度可明确l-苯丙氨酸对便秘小鼠胃肠道转运率的影响。小鼠灌胃相应受试物的第7天晚上，对各组小鼠进行饥饿。12h后，各剂量组灌胃up水和相应受试物。1h后灌胃墨汁作为指示剂，20min后立即牺牲小鼠，迅速打开腹腔，剪取自幽门至回盲部的所有肠组织，置于工作台上，缓缓地将小肠平铺，在小肠松弛状态下测量其长度即为小肠全长，从幽门至墨
汁前沿为墨汁推进距离。
[0028]
墨汁推进率(％)＝墨汁的推进距离(cm)/小肠的全长(cm)
×
100％，得到各剂量组小鼠的墨汁推进率。
[0029]
1.3数据分析
[0030]
采用graphpad prism 8.0软件对试验数据进行统计分析。采用独立t检验(两尾法)分析首粒排黑便时间、墨汁推进率、6h内粪便粒数，粪便总重和粪便含水率等参数，空白组与模型组之间，模型组与各干预组之间的差异显著性。若排便重量和粪便粒数一项结果阳性(p《0.05)，同时小肠推进实验和首粒排黑便时间其中一项结果阳性(p《0.05)，即可判定该受试样品有助于通便。
[0031]
二、结果与分析
[0032]
2.1 l-苯丙氨酸对便秘小鼠体重和脏器指数的影响
[0033]
参照图1，各组小鼠的初始体重与空白对照组相比，均无显著性差异(p》0.05)，表明实验各组小鼠分配合理。经各不同处理7d后，各组之间小鼠平均体重也无显著性差异(p》0.05)，表明各受试物对小鼠体重影响微弱。与对小鼠体重的影响相似，不同受试物对实验期间小鼠平均摄食和饮水量的影响也有限，各组之间小鼠平均摄食和饮水量无显著性差异(p》0.05)，同时小鼠脏器指数也无显著变化(p》0.05)，表明各受试物均未对小鼠基础指标产生显著影响。
[0034]
2.2 l-苯丙氨酸对便秘小鼠排便参数的影响
[0035]
参照图2，在l-苯丙氨酸等相应受试物干预的第7天进行排便实验，准确记录每组小鼠的5h内粪便重量、首粒排黑便时间、粪便含水率以及粪便粒数。模型对照组较空白对照组5h内粪便重量减少0.25g，首粒黑便平均时间比空白对照组增加116min，差异均显著(p《0.05)，表明慢性传输型便秘小鼠模型建立成功。
[0036]
l-苯丙氨酸低剂量组小鼠比模型对照组小鼠5h粪便重量增加0.04g，首粒黑便时间缩短105min，高剂量组缩短84min，差异性均达显著水平(p《0.05)。结果表明，低剂量和高剂量l-苯丙氨酸均对慢性传输型便秘有较好的改善作用。
[0037]
2.3 l-苯丙氨酸对便秘小鼠小肠蠕动的影响
[0038]
参照图3，各组小鼠小肠长度均在相似水平(p》0.05)。与空白对照相比，模型对照组小鼠的墨汁推进率显著降低40％，两组间差异性显著(p《0.001)，表明成功建立便秘模型。与模型对照组相比，低、高剂量l-苯丙氨酸均分别提升小鼠墨汁推进率，差异性均达显著水平(p《0.05)，表明l-苯丙氨酸可促进便秘小鼠小肠蠕动。
[0039]
三、l-苯丙氨酸对肠道便秘基因表达的影响
[0040]
使用rt-qpcr方法在回肠组织中测定了其可能与便秘相关的基因：速激肽受体1(tacr1)、肾上腺素受体α1a(adra1a)、肾上腺素受体α2a(adra2a)、肾上腺素受体α2b(adra2b)、钙调蛋白(calm)、肌球蛋白轻链9(myl9)基因表达情况，参照图4，回肠基因tacr1、adra1a、adra2a、adra2b、calm、myl9mrna表达量(a-f)。采用westernbolt技术在回肠组织中测定了肌球蛋白轻链9(myl9)的蛋白表达情况，参照图5。
[0041]
结果表明，在回肠组织中，l-苯丙氨酸模型组较空白组myl9的基因表达量显著降低(p《0.05)，calm和myl9mrna表达量均有一定程度的减小。adra1a、adra2a、adra2b的基因表达量均有一定程度的上升。
[0042]
l-苯丙氨酸低剂量组较模型组adra1a、calm、myl9的基因表达量均有显著升高(p《0.05、p《0.05、p《0.05)，tacr1的基因表达量亦有一定程度的增加。adra2a、adra2bmrna表达量降低。高剂量组较模型组tacr1、calm、myl9的基因表达量均有显著增加(p《0.05、p《0.01、p《0.01)，adra2a、adra2b的基因表达量均显著减小(p《0.05、p《0.05)。
[0043]
肌球蛋白轻链9(myl9)是肌球蛋白轻链(mlc)的重要一种。速激肽受体1(tacr1)通过激活信号通路中的靶点肌球蛋白轻链9(myl9，mlc)促进肠道平滑肌收缩，从而促进小肠蠕动。肾上腺素受体α1a(adra2a)、肾上腺素受体α2b(adra2b)则通过减少细胞内游离的钙离子含量，增加钙离子释放进而抑制效应靶点myl9的基因表达，导致肠道平滑肌舒张，抑制小肠蠕动。
[0044]
由此推测，l-苯丙氨酸可能通过增加肠道组织中tacr1基因，减小adra2a，adra2b基因的表达，进而促进相关信号通路中calm及效应靶点myl9的基因表达，同时增加myl9的蛋白表达，增加肠道蠕动，达到润肠通便的作用。
[0045]
发现l-苯丙氨酸对慢性传输型便秘小鼠在首粒黑便时间、粪便含水率、小肠运动等方面均有缓解作用(p《0.05)，l-苯丙氨酸可能通过增强p物质受体(tacr1)表达水平，激活calm进而提高myl9mrna的表达(p《0.05)，达到增强肠道蠕动、润肠通便的作用。
[0046]
上述实施例仅仅只是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域的技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。

技术特征：

1.一种l-苯丙氨酸的药物运用，其特征在于：具体为l-苯丙氨酸在制备便秘的药物或食品中的运用。2.根据权利要求1所述的一种l-苯丙氨酸的药物运用，其特征在于：所述便秘为洛哌丁胺诱导的功能性便秘。

技术总结

本发明公开了一种L-苯丙氨酸的药物运用。本发明公开了L-苯丙氨酸在制备便秘的药物或食品中的运用。L-苯丙氨酸对洛哌丁胺诱导的功能性便秘有很好的效果，能显著缩短排便时间，促进小肠蠕动，具有润肠通便的作用，为便秘药物的开发提供了新思路。便秘药物的开发提供了新思路。便秘药物的开发提供了新思路。

技术研发人员：

高晓余 盛军 田洋 李思锦 郭凯峰 白忠彬 赵艳 范源洪

受保护的技术使用者：

云南农业大学

技术研发日：

2022.10.12

技术公布日：

2022/12/9