实验所需用品：
400μm膜；
培养皿：60mm ；100mm ；离心管：1.5ml；15ml；50ml；头：200μl；1ml；5ml； pll(多聚赖氨酸)；H-DMEM（高糖）；P培（plating medium）；PBS液；10%水合氯醛；木瓜蛋白酶；台盼蓝染液（自配）；75%酒精; ARAC液(工作时浓度为0.0625mmol/L)
大镊子；大剪刀；眼科镊；尿垫；解剖镊；1ml注射器
前一天的准备
1.pll(多聚赖氨酸)：10mg/ml,用时稀释20倍
加pll 2ml 至60mm 皿中，3h后吸出液体，用PBS洗两次，每次2ml（放入孵箱）
2.准备400μm膜（用于过滤细胞，除去大颗粒组织块） 3.解剖用的100mm皿；大镊子；大剪刀；眼科镊；尿垫
选亲
4.H-DMEM配制木瓜蛋白酶2mg/ml
实验第一天：
1.大鼠肌肉注射（大腿内侧）10%水合氯醛2ml ，两侧各1ml
2.待麻醉后，放至尿垫，腹部及用具喷洒酒精
3.打开腹腔，剪去脂肪层，取出子宫放入皿中，喷洒酒精，移至细胞房宿主化
客房预定4.准备4个60mm皿（每个皿加4ml P培）；1个100mm皿（每个皿加6ml P培）；2个100mm皿（每个皿加6ml H-DMEM）
碎片文件将子宫剪开，剪去胎鼠头部放入100mm H-DMEM皿中洗一遍再放入另一个100mm H-DMEM皿中洗一遍；洗完后放至100 mm P培皿中取脑；取出的脑分别放至60mm P培皿中（放冰上）。
取脑步骤：左手插眼固定，右手撕皮，去脑壳，取脑（使用眼科镊）
5.放至解剖镜下，分离皮层与海马，步骤如下：
6.去嗅球，小脑 脑一分为二 掏出部分内容物
平口处撕去血管膜 取出海马 去除剩余内容物
每取完一个脑即将皮层放至10ml P培的50ml离心管中，海马至有1ml P培的1.5ml离心管中。
7.海马：3支管（1.5ml离心管），每管800μl H-DMEM，洗3次（1ml头吸）
皮层：2支管（50ml离心管），每管5~10ml H-DMEM，洗2次（5ml头吸）
8.海马：1ml木瓜蛋白酶加至1.5ml离心管；15min,5min/振摇，水浴（新洁尔灭一盖），37℃。
皮层：6ml木管蛋白酶加至60mm皿；25min,5min/振摇，放至孵箱，37℃。
9.海马：800μl P培洗两遍，第三遍吹打6次（用1ml头），加排头吹打4次（200μl）（6+4），轻 皮层：800r/min,4min.至20ml P培中洗一遍，再移至5ml P培中，吹打4次（5ml头），加1ml头吹打6次，再加排头吹打4次（200μl），（4+6+4）轻
10.静置5min（大颗粒沉降）（吸取细胞液）
海马：取200~400μl（无大颗粒）至15ml离心管中。剩余用P培补足，继续吹打5+3次，静置。
皮层：取1~2ml（无大颗粒）至15ml离心管中。剩余用P培补足，继续吹打1+5+3次，静置。
11.海马：吸取无大颗粒液体至15ml离心管中，将15ml离心管用P培补足。
皮层：800r/min,4min,吸取无大颗粒液体至15ml离心管中，将15ml离心管用P培补足。
12.分别将离心后的上层液体吸走，再将管内加5ml P培，吹打分散（5ml+1ml头）
13.过膜：皮层过膜（400μm）后，加P培至20ml，振摇。
14.40μ陶瓷饰品l台盼蓝+10μl细胞液
取1033链μl用于细胞计数
ARA-C液：第一次换液的第二天加（24h）(用于抑制胶质细胞的生长)
离心两次：第一次为消化完加P培后
第二次为取完所有消化细胞后
L-谷氨酰胺是细胞培养中细胞进行能量生成以及蛋白质和核酸合成所必需的一种营养素。 细胞培养基中的L-谷氨酰胺可自发降解，生成的副产物是氨和焦谷氨酸。 GlutaMAX™-I是一种高级细胞培养添加剂，可直接替代细胞培养基中的L-谷氨酰胺。
GlutaMAX™-I是一种二肽——L-丙氨酰-L-谷氨酰胺——在水溶液中更稳定，不会自发降解。 GlutaMAX™培养基及添加GlutaMAX™-I添加剂的培养基适用于贴壁和悬浮哺乳动物细胞的培养，几乎无需适应。在含有GlutaMAX™-I的培养基中培养细胞时，细胞可逐渐释放氨肽酶，水解二肽，缓慢释放L-谷氨酰胺和L-丙氨酸至培养基中。 随后，L-谷氨酰胺和L-丙氨酸可被细胞吸收，用于蛋白质生成或TCA循环。 这好比是流加培养的策略，将L-谷
氨酰胺连续加入培养基中，但是始终维持较低的浓度水平。 结果获得有效的能量代谢和较高的生长量，且不会生成多余的氨。
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