一、实验目的
1、学习掌握放线菌所产抗生素抗菌谱的测定方法
2、掌握牛津杯法检测抗生素的原理及基本操作
3、掌握微生物实验的基本生物技术，无菌操作技术，培养基无菌化处理（高温灭菌）、菌种纯化分离技术及纯种培养技术等。 4、熟悉掌握高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、离心机等器材的使用方法。
5、熟悉各种合成培养基的制备方法，熟练掌握涂平板、在培养基接种等基本操作步骤。
二、实验原理
放线菌是重要的抗生素产生菌，放线菌所产生得抗生素，能抑制多种细菌的生长，故可用金黄葡萄球菌（G+） 和大肠杆菌（G-）作指示菌鉴别放线菌，采用牛津杯法检测其所产抗生素的抑菌活性大小。
三、实验材料及用具
1、菌种：A 放线菌，实验室老师给提供菌种
B指示菌，金黄葡萄球菌、大肠杆菌
2、用具：试管，平皿，涂棒，牛津杯，玻璃棒，高压蒸汽锅，恒温摇床，恒温培养箱，镊子，移液器，超净工作台
四、培养基
1、高氏一号培养基 ： K2HPO4﹒3H2O 0.5g，可溶性淀粉 20g，KNO4 1g, MgSO4﹒7H2O 0.5g， FeSO4﹒7H2O 0.1g，NaCl 0.5g， H2O 1000ml。
2、种子培养基：葡萄糖 5g，淀粉 1.5g，酵母粉 2.5g，CaCl2 0.1g，KNO3 1g，K2HPO4 0.5g，MgSO4发动机油封﹒7H2O 0.5g，NaCl 0.5g，FeSO4﹒7H2O 0.01g，H减温减压2O 1000ml，pH 7.2-7.4
3、发酵培养基：黄豆饼粉 10.0g，淀粉30g，葡萄糖 50g，酵母粉5g，玉米浆 15g，终端准入系统CaCl
2 3.0g，H2O 1000ml，pH 7.0
4、LB培养基（液体）：蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 10g，H钢结构运输2O 1000ml，pH 7.0
5、LB培养基（固体）：蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 10g，琼脂 16g，H2O 1000ml，pH 7.0
五、实验步骤
1、配制培养基：按培养基配方比例依次精确地称取各种药品放入烧杯中，在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀。加足所需的水，调节pH值，将配制好的培养基分装在锥形瓶和试管中，对锥形瓶及试管封口并放入高压蒸汽灭菌锅进行灭菌。
2、菌种的活化：把放线菌接种到种子培养基，37℃培养2天，同时把金黄葡萄球菌和大肠杆菌分别接到LB液体培养基置于37℃培养
3、高强钢发酵：将活化的放线菌接种到发酵培养基上，37℃培养3天
4、抑菌试验：将发酵液离心，得上清。同时，将配置好的LB固体培养基倒入平皿，待凝
adsl分离器
固后分别加入150μl金黄葡萄球菌菌悬液和大肠杆菌菌悬液，用涂棒涂布均匀。用灭过菌的镊子夹取灭过菌的牛津杯放到涂好的平板上，根据画好的区域，每个区域放一个。用移液器往牛津杯中加满离过心放线菌的发酵液，如图一所示 。37℃培养24小时。观察实验结果。
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