培养基和试剂配制

(1)CMC(羧甲基纤维素)分离培养基:
CMC—Na 15 g,NH4N0 3 1 g,MgSO4〃7H20 0.5 g,KH2P04 I g,H2O l 000 mL,琼脂2%,pH自然.(2)滤纸条鉴定培养基:
(NH4)2SO4 0.10%,KH2P040.10%,MgS04〃7H20 0.05%,K2HP040.20%,酵母膏0.01%。
滤纸条(1 cm×7 cm)l块,pH自然.
立方体拼图
(3)刚果红纤维素鉴定培养基t(NH4)2S04 0.20%,MgS04〃7H20 0.05%,KH2P040.10%,NaCl 0.05%,
CMC—Na 2.O%,刚果红0.02%,琼脂2.O%,pH自然.
(4)发酵产酶培养基:稻草粉90%,麸皮10%和营养液(比例为5 g固体加入15 mL营养液),pH自然,121℃灭菌
60 min.
(5)牛肉膏蛋白胨培养基:(培养细菌)
牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,琼脂15-20g,H2O 1000ml,PH 7.0—7.2121℃下灭菌20min (6)高氏一号培养基:(培养放线菌)
可溶性淀粉20g,KNO3 1g,NaCl 0.5g,K2HP04 0.5g,MgS040.5g,FeSO4 0.01g,琼脂20g,H20 1000ml,PH 7.2-7.4 ,121℃下灭菌20min
(7)查氏培养基(培养霉菌)
NaNO3 2g,K2HP04 1g,KCl 0.5g,MgS04 0.5g,FeSO40.01g,蔗糖30g,琼脂15-20g,H20 1000ml,pH自然,121℃下灭菌20min
钢副框角码
(8)LB培养基
蛋白胨10g, 酵母膏5g,NaCl 10g,H20 1000ml,pH 7.0,121℃下灭菌20min
(9)淀粉培养基
蛋白胨10g, NaCl 5g,牛肉膏5g,可溶性淀粉2g,琼脂15-20g ,H20 1000ml,121℃下灭菌20min (10)油脂培养基
蛋白胨10g, 牛肉膏5g,NaCl 5g,香油或花生油10g,1.6%中性红水溶液1ml,琼脂15-20g,H20 1000ml,PH7.2,121℃下灭菌20min。油和琼脂及水应先加热,调好PH后再加入中性红,分装时需不断搅拌,使油均匀分布于培养基中。
通讯仪
(11)石蕊牛奶培养基
牛奶粉100g,石蕊0.075g,H20 1000ml,PH 6.8,121℃下灭菌15min
(12)明胶液化培养基
牛肉膏蛋白胨液100ml,明胶12-18g,PH 7,2-7.4,在水浴锅中将上述成分溶化,不断搅拌,后调PH,121℃下灭菌30min
(13)糖发酵培养基
蛋白胨水培养基1000ml,1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1-2ml,PH 7.6,另配20%糖溶液(葡萄糖、乳糖、蔗糖等)个10ml。制法:①将已分装好的蛋白胨水和20%的各种糖溶液分别灭菌,蛋白胨水在121℃下灭菌
20min;糖溶液在112℃下灭菌30min。②灭菌后,每管以无菌操作程序分别加入20%的无菌糖溶液0.5ml,(按每10ml培养基中加入20%的糖液0.5ml,则成1%的浓度)。
(14)蛋白胨水培养基
蛋白胨10g, NaCl 5g,H20 1000ml,PH 7.6,在121℃下灭菌20min
(15)葡萄糖蛋白胨培养基
蛋白胨5g,葡萄糖5g,K2HP04 2g,H20 1000ml,上述成分溶于水中,调PH至7.0-7.2,过滤。分装,每管10ml,在112℃下灭菌30min
(16)柠檬酸钠培养基
NH4 H2P04 1g,K2HP04 1g,NaCl 5g,MgS04 0.2g,柠檬酸钠2g,琼脂15-20g,H2O 1000ml,1%溴香草酚蓝乙醇溶液10ml,成分加热溶解后,调PH 6.8,加指示剂,以黄绿为准,摇匀,脱脂棉过滤,在121℃下灭菌20min
(17)柠檬酸铁铵半固体培养基
蛋白胨2g, NaCl 0.5g,柠檬酸铁铵0.05g,Na2S2O3〃5H2O 0.05g,琼脂0.5—0.8g,H2O 100ml,PH7.2,经100Pa灭菌20min
(18)硝酸盐还原试验培养基
蛋白胨1g, NaCl 0.5g,KNO30.1—0.2g,H2O 100ml,PH7.4,经100Pa灭菌20min
(19)豆芽汁葡萄糖培养基
黄豆芽100g,葡萄糖50g,H2O 1000ml,自然PH,新豆芽于烧杯加水煮沸30min,纱布过滤。用水补足原量,加糖溶化,在121℃下灭菌20min
(20)麦芽汁培养基
433m天线新鲜麦芽汁100ml,琼脂  1.5-2g,PH 6.4,经100Pa灭菌20min
(21)马铃薯葡萄糖培养基
马铃薯浸汁100ml,葡萄糖2g,琼脂  1.5-2g,自然PH,经100Pa灭菌20min
(22)酵母蛋白胨葡萄糖培养基(YPD)
耐磨铸铁葡萄糖2g,胰蛋白胨2g,酵母提取物1g,H2O 100ml,经100Pa灭菌20min。
(23)PDA培养基(黑曲霉菌种保藏)
马铃薯200 g/L,蔗糖20 g/L,琼脂20 g/L,pH自然,用于菌种保存和斜面种子等
(24)麸曲种子培养基
250 mL三角瓶装,麸皮10 g,水11 mL,121℃灭菌30 min
常用试剂和溶液
1、甲基红(M.R.)试剂甲基红0.04g,95%乙醇60ml,蒸馏水40ml;先将甲基红溶于乙醇,然后加入蒸馏水即可。
2、吲哚试剂对二甲基氨基苯甲醛2g;95%乙醇190ml;浓盐酸40ml
3、氨试剂(奈氏试剂)A液:K2I 10.0g,蒸馏水100ml,HgI 20.0g;B液:KOH 20.0g,蒸馏水100ml。将10g K2I溶于50ml蒸馏水中,在此液中加HgI颗粒,待溶解后再加入KOH和补足蒸馏水,然后将澄清液体倒入棕瓶储存。
4、中性红指示剂中性红0.04g,95%乙醇28ml,蒸馏水72ml;中性红PH=6.8---8,颜由红变黄,常用浓度0.04%。
5、吕氏碱性染液美蓝染液A液:美蓝0.6g,95%乙醇30ml ;B液:KOH 0.01g,蒸馏水100ml;分别配制AB液,配好后混合。
6、齐氏石碳酸复红染液A液:碱性复红0.3g,95%乙醇10ml ;B液:石碳酸5.0g,蒸馏水95ml;将碱性复红在研钵中研磨后,逐渐加入乙醇,继续研磨使之溶解,配成A液;将石碳酸溶于水中,配成B液。混合AB液即成。通常将此混合液稀释5—10倍使用,稀释液易变质失效。
7、革兰氏染液①草酸结晶紫染液A液:结晶紫2g,95%乙醇20ml ;B液:草酸胺0.8g,蒸馏水80ml;混合AB液,48h后使用。
②卢戈氏碘液碘片1g,碘化钾2g,蒸馏水300ml;先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液中,待碘全溶后,加足水分。
③番红复染番红2.5g,95%乙醇100ml;取上述配好的番红乙醇溶液10ml
与80ml蒸馏水混匀即成。
8、芽孢染液①孔雀绿染液孔雀绿5g,蒸馏水100ml
②番红水溶液番红0.5g,蒸馏水100ml
③苯酚品红染液碱性品红11g,无水乙醇100ml,取上述药品所制溶液10ml与100ml5%的苯酚溶液混合,过滤备用。
④黑素溶液可溶性黑素10g,蒸馏水100ml;取黑素溶于蒸馏水中,置沸水浴中30min后过滤两次,补加水至100ml,加0.5g甲醛,备用。
染料可以按其电离后染料离子所带电荷的性质分为:酸性染料,碱性染料,中性(复合)染料,单纯染料四大类。
直插led灯珠⑴酸性染料这类染料电离后染料离子带负电,如伊红、刚果红、藻红、苯胺黑、和酸性复红等,可与碱性物质结合成盐。当培养基糖类分解产酸使PH下降时,细胞所带的正电荷增加,这时选择酸性染料易被染。
⑵碱性染料这类染料电离后染料离子带正电,可与酸性物质结合成盐,如美蓝、甲基红、结晶紫、碱性复红、中性红,孔雀绿和番红等,在一般情况下,细菌易被碱性染料染。
⑶中性染料是酸性染料和碱性染料的复合物,如瑞脱氏(Wright)染料和基姆萨氏(Gimsa)染料等,后者常用于细胞核染。
⑷单纯染料这类染料的化学亲和力低,不能和被染的物质成盐。大多数为偶氮化合物,不溶于水,但溶于脂肪溶剂,如紫丹类(Sudanb)的染料。
制片和染基本过程
制片-----自然干燥-----(热)固定-----染------脱-----复染-----水洗------干燥------镜检
①固定: 目的有三:杀死微生物,固定细胞结构;保证菌体牢固粘附于载玻片;改变细胞对染料的通透性。常利用高温,手执载玻片,标本向上,在酒精灯外焰层尽快的来回3—4次,公约2—3秒,并不时以玻片背面加热触及皮肤,不觉过烫为宜。置冷后染。
②染:染时间平均1—3min,若做复染,在媒处理时,媒染剂与染料形成不溶性的化合物,可增强染料和细菌的亲和力。一般先固定后媒染,也可以固定和染同时进行。
③脱:常用脱剂为95%乙醇和3%盐酸。

本文发布于:2024-09-24 00:27:24,感谢您对本站的认可!

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