实验四放线菌的形态观察

杨明轩生物111班 1102040128

一、实验目的

1、学习观察放线菌形态的基本方法。

2、观察放线菌的个体形态特征。

二、实验原理

放线菌是一类丝状原核微生物，因其菌落在固体表面长成放射状生长而得名，放线菌主要存在于土壤中，大部分腐生，少数寄生，也有的与植物共生固氮。

放线菌是最主要的抗生素产生菌，其形态特征是菌种选育和分类的重要依据。放线菌通常有分枝发达的菌丝体组成，菌丝直径为0.2-1.2μm。主要由两部分组成，一部分长在培养基内，一般没有横隔，有固定和吸收养分的作用，称为基内菌丝或营养菌丝。当基内菌丝发育到一定阶段，即可向空中伸展形成气生菌丝（有的菌种没有气生菌丝）。在显微镜下观

察时，气生菌丝颜较深，并且比基内菌丝粗两倍左右。有些种的气生菌丝发育到一定阶段，其顶端可形成孢子丝。孢子丝分直、波曲、螺旋等形状。孢子丝的着生方式分别为单生、丛生、轮生和互生。

放线菌菌落小，与培养基结合紧密，不易用接种钩挑取，因而难以直接观察。通常采用玻璃纸培养法和插片法观察。本次实验采取插片法。该方法适合进行营养菌丝、气生菌丝和孢子丝的比较观察。在接种放线菌的培养基一侧，以45°角插入无菌盖玻片，使放线菌沿培养基与盖玻片交界处生长，并附着于盖玻片上，待菌丝生长一段时间后，取下盖玻片进行染，即可直接观察。

三、实验材料

1、菌种：紫直丝链霉菌（Streptomyces violaoeorectus）、黑化链霉菌（Streptomyces nigrificans）、天蓝链霉菌（Streptomyces coelicolor）、丰加链霉菌（Streptomyces toyocaensis）

2、染剂：石炭酸复红染液

3、培养基：高氏一号培养基

4、其他：干净载玻片、盖玻片、无菌水、洗瓶、擦镜纸、吸水纸、二甲苯、香柏油、接种用具

四、实验方法

1、制备平板：将已融化的高氏一号培养基（冷却到45℃左右）倒入无菌培养皿，每皿15~20ml（厚度约为培养皿高度的一半），凝固后备用。

2、接种：用接种环从放线菌试管斜面上挑取孢子，在培养基与盖玻片之间做“之）字型密集划线。

3、插片：用无菌镊子取无菌盖玻片，以45°斜插入培养基（插入深度约占盖玻片的一半长度）。

4、培养：将培养基平板倒置于28℃培养箱中，培养7天。

5、制片：用无菌镊子小心取出盖玻片，稍微加热固定，再用石炭酸复红染液染1min，

水洗晾干。在载玻片上滴一滴香柏油，将盖玻片置于载玻片上。

6、镜检：用油镜进行观察。

五、实验结果及分析

1、填表7-1说明各链霉菌菌落特征。

表7-1 放线菌菌落特征观察

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菌名	菌落形态	正面颜	背面颜	气味	素电梯井防护门>heff
紫直丝链霉菌	圆形、边缘丝状、表面干燥	灰白	紫	土腥味	脂溶性
黑化链霉菌	假根状、中央微凹、表面干燥	灰白	深褐	土腥味	水溶性
天蓝链霉菌	假根状、边缘丝状、表面干燥	蓝灰	蓝	土腥味	水溶性
丰加链霉菌	碱土夜光材料圆形、边缘不规则、表面干燥	灰白	浅黄	土腥味	脂溶性