李东至林其德林建华
关"而胎盘缺血缺氧被认为是内皮细胞功能紊乱的起因#$%&中性粒细胞激活后能释放多种蛋白酶"并引起过氧化反应产生超氧自由基"是循环中过氧化产物的重要来源"其粘附于血管内皮能造成细胞损伤&许多研究已证明"妊高征患者循环中的中性粒细胞活性较正常孕妇显著增高"但其机理目前尚不清楚&本研究在缺氧条件下培养胎盘绒毛"观察缺氧上清液对中性粒细胞表达’($$)*’($+的影响&
一*材料与方法
$，胎盘绒毛培养-胎盘取自无内科合并症及并发症"仅因产科指征行选择性剖宫产的正常足月孕妇$.例&胎盘娩出后"取其中央部位$个母体叶"无菌生理盐水彻底冲洗"剪去蜕膜组织并分离去除小叶中大的血管&然后在/0123平衡盐溶液中将绒毛组织剪碎成.45667.45667.4566块为止"/0123液洗数次&将约8..69绒毛组织接种到：孔细胞培养板"每孔加;$.培养基<6="在<>?*5@’A
8
条件下培养&8B C后"换液"分为两组-正常氧组和低氧组&低氧
组培养板置于三气培养箱"除5@’A迷宫式油封
8
外"另通氮气调氧浓度为5@&两组均分别培养8B C"吸取培养液"5...D E6F1离心56F1去沉淀物"收集上清液保存于G<.?待用"同时称绒毛组织重量&
8，中性粒细胞分离-根据/H I D J C等#8%方法从健康非孕育龄妇女外周血中分离出中性粒细胞"悬于;$.培养基"调整细胞浓度为$457$.:E6="接种到8B孔细胞培养板"每孔接种细胞数$457$.:&按加入刺激物的不同剂量分为<；组-K$L对照组-每孔加入;$.培养基85.M=N K8L常氧上清液组-每孔加入;$.培养基85.M=K含8.@胎盘绒毛常氧上清L N K<L缺氧上清液组K含8.@胎盘绒毛低氧培养上清L&三组均
于<>?*5@’A
8
条件下培养+C&
强氧化剂<，测定-用间接法测定上述培养后中性粒细胞表面’($$)*’($+表达&一抗分别为小鼠抗人’($$)单抗和小鼠抗人’($+单抗K O C0D6F19P1L"二抗为;Q R’S羊抗小鼠Q9T K华美生物工程公司L&在流式细胞仪上
分析荧光染样本中性粒细胞’($$)*’($+的平均荧光强度&用测定管和对照管的平均荧光强度的比值表示’($$)*’($+的相对表
作者单位-8....$上海第二医科大学仁济医院妇产科#李东至
K现在广州市妇婴医院妇产科L"林其德*林建华%达量&
B，统计学方法-采用UF V D I3I W J X Y V P=软件"组间行配对Z检验&
二*结果
$，两组胎盘绒毛组织重量比较-正常氧组胎盘绒毛重量为K8.8[$.L69"低氧组为K8.B[+L69"两组比较差异无显著性K\].4.5L&
8，胎盘绒毛培养上清液对中性粒细胞粘附分子表达的影响-正常氧和低氧胎盘绒毛上清液均能刺激中性粒细胞’($$)*’($+表达增加N与正常氧组比较"低氧胎盘绒毛上清液显著性增加"中性粒细胞’($$)*’($+表达升高"见表$&
表^胎盘绒毛上清液对中性粒细胞粘附分子
表达的影响K_‘[a L
组别例数’($$)’($+
对照组$.>,.[8,<$.,8[8,.
正常氧组$.$B,+[$,<b$c,$[8,8b
水炮泥
低氧组$.8c,B[5,.b d8+,B[<,5b d
与对照组比较"b\e.4.$N与正常氧组经较"d\e.4.5
三*讨论
$，妊高征患者中性粒细胞激活的证据-循环中激活的中性粒细胞能粘附到血管内皮"但细胞表面必需表达某些粘附分子&体外研究发现"中性粒细胞激活后细胞表面’($+*’($$)表达增多"其表达水平能反映中性粒细胞活性状态& f0D g P1等#<%用流式细胞技术测定了妊高征患者中性粒细胞表面粘附分子的表达"发现’($$)基础表达量明显升高"经血小板激活因子刺激后"妊高征患者中性粒细胞’($$)*’($+表达量均较正常孕妇显著增高&但至产后：周和：月再分别测定"二者中性粒细胞’($$)*’($+的表达量已不具差异&’D I V2P D等#B%观察了妊高征患者中性粒细胞产生超氧自由基的能力"结果发现在相同刺激条件下其产生活性氧的量远较正常孕妇为多&细胞内钙离子浓度是细胞激活的重要体现&细胞内流钙离子增多可激活钙依赖的蛋白酶"引起细胞对外界的反应&妊高征患者中性粒细胞基础钙离子浓度和苯丙氨酰羟
化酶K W Uh O L刺激后内流钙离子浓度均较正常孕妇升高#5%&表明妊高征孕妇中性粒细胞对外界的刺激反应性增高"活性增强&
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!中华围产医学杂志8..8年：月第5卷第8期’C F1i O P D F10J UP g"i j148..8k I=5"l I48
因此!妊高征患者循环中性粒细胞被广泛激活!释放多种蛋白溶解酶能破坏内皮细胞连接和基底膜!产生活性氧自由基可与内皮细胞膜脂质发生过氧化物反应!溶解内皮细胞!增加内皮细胞通透性和反应性"
#$妊高征患者中性粒细胞激活的机理%妊高征患者中性粒细胞激活的机理目前尚不清楚"由于胎盘是妊高征发病的关键因素!因此中性粒细胞激活可能与胎盘有关"妊高征患者胎盘床滋养细胞侵蚀能力低下!蜕膜&肌段螺旋动脉不能发生’生理性变化(!导致胎盘缺血缺氧"本研究在低氧)*+,#-条件下培养胎盘绒毛组织!用其#./培养上清液在体外刺激正常人中性粒细胞"结果发现!低氧上清液使粒细胞0122340125表
达量较正常氧培养上清液显著升高!提示胎盘缺氧能直接激活中性粒细胞!为胎盘床滋养细胞浸润能力低下导致妊高征发病的学说提供了直接证据"
我们还发现!正常氧胎盘绒毛培养上清液也能激活中性粒细胞!其0122340125表达量较对照组显著升高!但低于低氧上清液"6789:；等<=>研究发现!与非孕妇女相比!正常孕妇中性粒细胞0122340125表达显著增高!在妊高征患者进一步升高"他们认为!妊娠本身类似炎症反应!妊高征患者由于胎盘缺氧而加重"因此在正常妊娠妇女!中性粒细胞的活化也可能与胎盘分泌的某种成分有关"
:@A/<B>认为!中性粒细胞循环至绒毛间隙时!局部高浓度的脂质过氧化物使之激活"已证实!妊高征患者胎盘脂质过氧化物的产量较正常妊娠胎盘显著升高!而绒毛滋养细胞是过氧化产物的主要来源"另一种激活中性粒细胞的可能成分是胎盘分泌的C D E&F"在体外培养的胎盘组织能分泌具有生物活性的C D E&F!并且在缺氧条件下其产量升高<5>"而且妊高征胎盘中C D E&F及其96D G水平显著高于正常妊娠胎盘"这些都表明!中性粒细胞循环至绒毛间隙时被激活!可能在缺氧胎盘和血管内皮损伤间起中介和放大作用"骨刺消痛膏
参考文献
2林其德H妊高征病因学研究进展H中华妇产科杂志!2I I B!J#%J&*$ #K L M N O/6!P M;A A M;G Q!R N7O3@:8S H G6:T U897O/M8V M N T W N U V U X:& O U M;M V/W9:;Y N:;W@M X Z O7AW A U;
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2I I5!2=%I J&2_.$
5李东至!林其德!林建华H缺氧对胎盘绒毛分泌细胞因子的影响H 中华围产医学杂志!#___!J%2=&25$
)收稿日期%#__2&_J-
)本文编辑%郎素慧-
h论著摘要h
妊娠高血压综合征患者血浆血管性假血友病因子水平的测定及意义
塑料围嘴
王晨虹晋丽平陈建林
近年来血管内皮损伤及内皮功能异常在妊娠高血压综合征)简称妊高征-发病中的作用已得到普遍共识<2!#>"而血浆中血管性假血友病因子)c M;[U@@73N:;8V:X O M N!c?E-可作为血管内皮的标志物!反映血管内皮的功能<J>"为了解c?E在妊高征发病中的作用!本研究测定了妊高征患者血
数控分度头
作者单位%.2__22长沙!中南大学湘雅第二医院妇产科浆中的c?E含量!现报道如下"
一4资料与方法
2$研究对象%选择2I I B年2#月至2I I5年*月我院住院的妊高征患者J=例)妊高征组-!平均年龄为)#B i J-岁!平均孕周)J5$5i2$*-周!其中轻度22例!中度22例!重度2.例"妊高征分度标准以全国统编教材j妇产科学k<.>为准"正常妊娠25例)正常妊娠组-!为同期来我院住院分娩的晚
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中华围产医学杂志#__#年=月第*卷第#期0/U;P S7N U;:O^78!P W;H#__#R M@*!D M H#
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