鹿明生物技术部
蛋白组项目样品准备指南样本类型
常规动物组织（心、肝、
脾、肺、肾、肠、脑、肌
肉等）100mg PBS 洗涤去除残留血液和污染物，迅速剥去脂肪和筋皮等结缔组织，冲洗干净，用组织剪或手术刀将组织分离成1cm3左右的小块，液氮速冻，保存于-80℃软骨组织
100mg PBS 洗涤，用手术刀将软骨切成1cm3左右的小块，液氮速冻，保存于-80℃软体动物（吸虫等）
100mg PBS 洗涤去除来自宿主的污染，液氮速冻，保存于-80℃植物组织大本植物茎、叶、花等
对接焊缝等离子体处理200mg PBS 清洗，吸水纸吸去表面液体，液氮速冻，保存于-80℃大本植物树根、树皮、树
枝等琴谱架
200mg PBS 清洗，吸水纸吸去表面液体，液氮速冻，保存于-80℃种子
500mg PBS 清洗，吸水纸吸去表面液体，液氮速冻，保存于-80℃果肉
2g 去皮切成1cm3左右小块，液氮速冻，保存于-80℃草本植物、藻类、蕨类等
200mg PBS 清洗，吸水纸吸去表面液体，液氮速冻，保存于-80℃花粉
200mg 植物开花期收集花粉，解剖显微镜下检查花粉，用解剖针去除花药碎片等杂质，转入EP 管中，光学显微镜下检查花粉的形态和纯度，保存于-80℃微生物细菌类
200mg 3000rpm-5000rpm 离心5-15min ，去上清，PBS 洗涤沉淀三次，液氮速冻，保存于-80℃真菌类（菌菇）2g PBS 清洗，吸水纸吸去表面液体，液氮速冻，保存于-80℃
细胞
悬浮培养细胞10^6个400rpm-1000rpm 离心10分钟收获细胞，弃上清，用预冷的PBS 小心洗涤片状沉淀物2次，置于冰上，
去上清，液氮速冻，保存于-80℃
贴壁培养细胞10^6个 1.弃掉培养液，并将培养皿倒置于吸水纸上吸干培养液；
2.加入4℃预冷的PBS ，平放轻轻摇动1分钟洗涤细胞，然后弃去PBS ，重复以上操作两次以洗去培养液；
3.将培养皿置于冰上，向培养皿内加入4℃预冷的PBS ，用干净的细胞刮棒将细胞刮于培养皿的一侧（动
作要快），冰上斜置培养皿，使得缓冲液流向一侧，用移液管吸取溶解产物至预冷的离心管内，离心去
上清。
4.液氮速冻，保存于-80℃。
体液血清
100ul 收集好的全血室温静置两小时，3000rpm 离心10min ，取上清，液氮速冻，保存于-80℃血浆
100ul 收集好的全血加入抗凝剂，室温静止30分钟，1300rpm-2000rpm 离心10min ，取上清，液氮速冻，保存于-80℃。尿液荧光增白剂ob
10ml 5000rpm 4°C 离心30-60min ，取上清，保存于-80℃。唾液
1ml 禁食两小时以上，上午取样，1000rpm-2000rpm 离心5min ，（或使用0.22μm 滤膜过滤），取上清，保存于-80℃。脑脊液、关节液、淋巴液、
附睾腔液等
100ul 1000rpm-2000rpm 离心5min ，（或使用0.22μm 滤膜过滤），取上清，保存于-80℃。分泌蛋白
发酵液100ml 10000rpm-20000rpm 离心30-60min ，（或使用0.22μm 滤膜过滤），取上清，保存于-80℃。外泌体血液或者细胞发酵液中200ug 以上1.血液5mL，细胞培养基不等。2.用超速离心或其他方法提取外泌体，用电镜观察外泌体形态（推荐），
3.用蛋白裂解液重悬外泌体。
4.测浓度，每个样品至少100ug，200ug 以上最佳。（iTRAQ/TMT 200ug 及以上，Label-free 100ug）
5.测外泌体蛋白纯度，wb，推荐做，为了保证样品质量。
6.将蛋白冻干后的粉末或蛋白溶液，用干冰寄送。
蛋白鉴定项目样品准备指南
样本类型
最低送样量预处理及保存胶点
2D 点肉眼可见用移液头将2D 点挖下来，加入已装有超纯水的EP 管中，做好标记，常温或冰袋寄送胶条
SDS-PAGE 条带肉眼可见将需要鉴定的SDS-PAGE 条带切下，装进EP 管，常温或冰袋寄送，颜非常浅的条带可取多个重复样本放一起。蛋白
手动豆浆机
蛋白干粉100ug 冻干的蛋白粉末装入EP 管，常温寄送蛋白溶液1ug/ul*20ul 提好的蛋白溶液保存于-80℃，干冰寄送原样发酵液、组织等参考上面送样要求
注：用于质谱鉴定的2D/SDS-PAGE 样品，不宜在溶液内长期保存，寄样时保存于离心管中即可不需要在离心管中加任何介质且胶体本身不宜封膜，做好标记，常温或者冰袋运输都可。样品是蛋白时请提供处理的方法。如果是蛋白溶液时需注明溶液成分和蛋白大概浓度，样品是蛋白干粉时需注明干粉的成分和总蛋白量。
送样说明
康志坚1.在允许的条件下，实际样品准备量应适当比最低样品量多准备一些。
2.收集样品时做好分装标记，并尽快放在液氮中冻存或转移至-80度冰箱长期保存，避免反复冻融。远距离寄样时建议用顺丰运输。
3.生物学重复的样品一定要标记清楚，建议可以用：-1、-2、-3的方式来标记。
4.如果样品成分含有毒性或腐蚀性物质，必须事先声明，并在样品登记表和样品标签上注明。
5.如果样品为病原性微生物或者具有侵染性的病变组织必须严格灭活后再送样并在样品登记表和样品标签上注明。销售在接该类项目之前一定要和技术确认后方可接单。
6.客户自己提取的蛋白效果不好导致实验结果不理想时由客户自己承担责任。
7.客户需要采用特殊方法处理样品时，请在送样登记表中备注说明，并尽量提供方法或者文献。
8.蛋白质组实验，若是对检索条件和数据库有特殊要求或者自己有数据库的，需在送样登记表中备注，并将目的序列或数据库的提前告知并提供给实验室。
9.除以上所列样品之外的其它或特殊样品样品的准备要求量可视具体情况进行沟通后确认。
10.所有样品分组的编号，务必用英文字母+数字（CK-1、Control等），避免使用中文名（如：对照组、处理组、加药组等），此项是为方便后续写SCI 文章。
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