【专项冲击波】2013高考生物 讲练测系列 专题15 基因工程 克隆技术（教师版） 考点突破
考点一 基因工程
与基因工程有关的几种酶
名称 | 作用 | 参与生物过程 | 相同点 |
DNA连接酶 | 连接两个DNA片段 | 基因工程 | 化学本质均为蛋白质，合成场所均为核糖体 |
限制性核 酸内切酶 | 切割某种特定的脱氧核苷酸序列 |
DNA聚合酶 | 在脱氧核苷酸链上添 单个脱氧核苷酸 | DNA复制 |
RNA聚合酶 | 在核糖核苷酸链上添加单个核糖核苷酸 | 转录 |
解旋酶 | 使碱基间氢键断裂，形成脱氧核苷酸单链 | DNA复制及转录 |
逆转录酶 | 以RNA为模板合成DNA | 逆转录、基因工程 |
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例1、（2012上海56）已知在质粒pZHZl中，限制酶G切割位点距限制酶E切割位点0．8kb，限制酶H切割位点距限制酶F切割位点O．5kb。若分别用限制酶G和H酶切两份重组质粒pZHZ2样 品，据表4所列酶切结果判断目的基因的大小为 kb；并将目的基因内部的限制酶G和H切割位点标注在图19中。 考点二基因工程的基本操作程序
程序 | 说明 |
目的基因 的获取 | ①从自然界中已有的物种中分离出来；②用人工的方法合成；③从基因文库中获得； ④通过PCR技术获得 |
基因表达载 体的构建 | 要点:同种限制酶切割目的基因与质粒；双酶切；运载体的要求；基因表达载体的组成 |
将目的基 因导入受 | ①受体细胞种类：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞；②导入方法:显微注射法、农杆菌转化法、Ca2+处理细胞使细胞壁的通透性增大等 |
目的基因 的检测与 鉴定 | 检测对象：①检测转基因生物的染体防屏蔽DNA上是否插入了目的基因；②检测目的基因是否转录出了mRNA；③检测目的基因是否翻译成了蛋白质。 检测方法： 分子检测法——①和②都是核酸分子杂交技术，③是抗原—抗体杂交法；形态检测法——可根据目标性状的有无来判断目的基因是否表达 |
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例2、（2012江苏32）图1表示含有目的基因D机械曝气机的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓小型甘蔗榨汁机GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题
(1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由 连接。
(2)若用限制酶SmaI完全切割图1中DNA片段，产生的末端是 末端，其产物长度为 。
(3)若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，产物中共有 种不同长度的DNA片段。
(4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是 。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加 的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是 。
考点三细胞工程
1、植物组织培养、植物体细胞杂交、细胞核移植的比较：
| 植物组织培养 | 植物体细胞杂交 | 细胞核移植 |
原理 | 植物细胞的全能性 | 细胞膜的流动性、植物细胞的全能性 | 动物细胞核的全能性 |
方法 | 离体的植物器官、组织或细胞→ 愈伤组织→根、芽→植物体 | 去掉细胞壁→诱导原生质体融合→组织培养 | 核移植→胚胎移植 |
365t优点 | 快速繁殖、培育无病毒植株等 | 克服远缘杂交不亲和的障碍，培育出作物新品种 | 繁殖优良品种，用于保存濒危物种，有选择地繁殖某性别的动物 |
缺点 | 技术要求高、培养条件严格 | 技术复杂，难度大；需植物组织培养等技术支持 | 导致生物品系减少，个体生存能力下降 |
举例 | 试管苗的培育、培养转基因植物 | 培育“番茄—马铃薯”植株 | “多利”羊等克隆动物的培育 |
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2、植物组织培养流程图
3、动物细胞培养流程图
例3、(2012·全国重点中学领航冲刺卷)如图1表示利用生物技术制备抗X的单克隆抗体的过程；图2表示体外受精培育优质奶牛的过程；图3表示番茄和马铃薯植物细胞融合和再生植株的过程，请据图回答下面的问题。
(1)在图1中注射到小鼠体内的物质是__________。融合后的细胞经过多次筛选才能获得理想的细胞，此类细胞的特点是__________。该过程所用的生物技术有___________________________________________________________________
____________________________________________________________________。
(2)图2中参与体外受精的精子需要经过成熟和________的过程，才能使卵细胞受精。若要获得多头与此优质奶牛相同的小牛，可对图2中囊胚中的__________均等分割后进行胚胎移植。以上技术是在__________(填“体内”或“体外”)完成的。
(3)图3中过程①是植物细胞形成__________的阶段，该阶段所用的酶是__________。在形成再生植株的过程中与组织培养有相似之处的步骤是__________。
专项练习
1、(2011·浙江卷)将ada(腺苷酸脱氨酶基因)通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是( )。
A．每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒
B．每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点
C．每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada
D．每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子
2、(2012·浙江六校联考)下面是四种不同质粒的示意图，其中ori为复制必需的序列，amp为氨苄青霉素抗性基因，tet为四环素抗性基因，箭头表示一种限制性核酸内切酶的酶切位点。若要得到一个能在四环素培养基上生长而不能在氨苄青霉素培养基上生长的含重组DNA止水铜板的细胞，应选用的质粒是 ( )
A．催化①过程的酶是RNA聚合酶
B．④过程发生的变化是引物与单链DNA结合
C．催化②⑤过程的酶都是DNA聚合酶，都能耐高温
D．如果RNA单链中A与U之和占该链碱基含量的40%，则一个双链DNA中，A与U之和也占该DNA碱基含量的40%
4、（2012广东6）科学家用人工合成的染体片段，成功替代了酵母菌的第6号和第9号染体的部分片段，得到的重组酵母菌能存活，未见明显异常，关于该重组酵母菌的叙述，错误的是
水塔水位控制系统
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