取材 快速取出脑组织，轴向切为两半，用于固定的组织必须新鲜，防止自溶（神经和造血组织的自溶速度非常快），力争在组织离体后1min内进行固定。 固定 迅速将半脑放入4%多聚甲醛（25mL小瓶或更大的容器，以保证固定液充分（样品50倍体积）），固定过程需在4℃完成（低温对保存样品中的酶活性有很大作用）。固定30min后换一次固定液，晚上临走时再换一次，第二天早上即可完成固定。固定应在24hr内完成，固定时间过长会降低抗原性。 脱水 荧光寿命测试
固定之后，在装有脑组织的玻璃瓶中依次更换蒸馏水（2hr）、50%乙醇（12hr）、70%乙醇（12hr）、80%乙醇（12hr）、90%乙醇（12hr）、95%乙醇（12hr），次日100%乙醇(2~4hr，半小时的时候换一次)。以上每次换液后都放回4℃，每个梯度都可以在浸入半小时后换一次液。50~80%乙醇的脱水时间不宜太短，但可延长（放2~3天没有问题），相对灵活。但90~95%乙醇的时间不可过长，一般控制在过夜或12hr。纯酒精的时间要特别注意，一般不可超过4hr，以免组织硬化。脱水不彻底将影响透明和包埋，直接导致实验失败。 透明 继续在4℃进行。更换100%乙醇/二甲苯 1:1 混合液30min，再更换为二甲苯15min，换
横孔螺母
发光模组液，继续透明15min（注意观察组织透明状态，避免时间过长导致组织变脆）。透光观察，组织的外层应呈半透明而组织的中心不透明。二甲苯易吸收空气中的水分，应使用新的试剂。触摸调光ic
浸蜡 将透明后的组织用吸水纸吸掉过多的二甲苯，放入熔化的石蜡中，在65℃测向天线温箱中放置2-3hr。此步温度最为关键：温度低时，若石蜡稍有凝固，就难以浸透，即使延长时间也不能透入；温度过高，则组织变脆，不能切片。
包埋 将熔化的石蜡倒入包埋盒中，迅速将组织放入包埋盒，原嗅球方向朝上。放入用铅笔标记的纸。将包埋盒放置在室温，待石蜡完全凝固。标记脑的方向
4%多聚甲醛配法：4g多聚甲醛加100mL PBS，磁力加热搅拌（60度左右），如果不溶，可适当加NaOH，调PH至7.2-7.4
蜡：95%硬蜡+5%蜂蜡，电磁炉煮化，冒出白烟，蜡变黄。在70度过滤。
剖分轴承浸蜡回收后可继续作浸蜡使用，重新煮化使残留的二甲苯挥发掉，过滤后使用
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