26种中草药对沙门氏菌的抑制作用研究

徐放;赵鹏宇;吴小虎;谭香玉;艾启俊

【摘要】[目的]研究26种中草药对沙门氏菌的抑制作用.[方法]用无水乙醇制备26种中草药提取液,对沙门氏菌进行抑菌试验,并筛选出抑菌效果好的中草药.[结果]在26种中草药提取液中,部分对沙门氏菌生长起抑制作用.其中,山豆根提取液和山萸肉提取液对沙门氏菌的抑菌效果最好,MIC值均为62.5 mg/ml;其次是地榆提取液,MIC值为250.0 mg/ml.[结论]地榆、山萸肉和山豆根醇提液能够有效抑制沙门氏菌生长.%[Objective] To research the inhibitory effects of 26 kinds of Chinese herbal medicines on salmonella. [Method] Extracting solutions of 26 kinds of Chinese herbal medicines were prepared by anhydrous ethanol. Bacteriostasis test on salmonella was conducted; and the Chinese herbal medicines having the optimal inhibitory effects were selected. [ Result] In the 26 extracting solutions of Chinese herbal medicines, some had inhibitory effects on the growth of salmonella. Among them, extracting solutions of Sophora tonkinenshi roots and cornus pulps showed the best inhibitory effects; and their MIC values were both 62.5 mg/ml. Extraction solution of sanguisorba took the sec

ond place, the MIC value of which was 250.0 mg/ml. [ Conclusion] Extracting solutions of Sophora tonkinensisi roots, cornus pulp and sanguisorba could effectively inhibit the growth of salmonella.

【期刊名称】《安徽农业科学》

【年(卷),期】2013(041)004

【总页数】3页(P1547-1549)

【关键词】中草药;沙门氏菌;MIC;MBC

【作者】徐放;赵鹏宇;吴小虎;谭香玉;艾启俊

【作者单位】北京农学院食品科学与工程学院,北京102206

【正文语种】中文

【中图分类】S567

无水厕所1900年Lignieres为纪念Salmon首次从病猪中分离出猪沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)而采用Salmonella命名该属。沙门菌属是一大寄生于人类和动物肠道内生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌的统称［1］。沙门氏菌引起的食物中毒有多种多样的表现，其中胃肠炎最为多见。潜伏期一般12～36 h，短者6 h，长者48～72 h。发病初期表现为恶心、寒颤、头痛和食欲不振等，随后出现呕吐、腹绞痛、腹泻甚至发热等，严重的会出现抽搐及昏迷等症状。病程一般3～7 d，愈后良好。最易感体是年幼儿童、虚弱者、年长老人和免疫缺陷者等［2］。笔者用无水乙醇制备26种中草药提取液，对沙门氏菌进行抑菌试验，筛选出抑菌效果好的中草药，以期为沙门氏菌引起的临床反应的提供理论依据。

1 材料与方法

ostasksuspend1.1 材料

1.1.1 研究对象。1号黄芩(RADIX SCUTELLARIAE)、2 号黄芪(RADIX ASTRAGALI)、3号黄柏(CORTEX PHELLODENDRI)、4 号黄连(RHIZOMA COPTIDIS)、5 号大黄(RADIX ET RHIZOMA RHEI)、6 号白术(RHIZOMA ATRACTYLODIS MACROCEPHALAE)、7号

长青叶、8号甘草(RADIX RHIZOMA GLYCYRRHIZAE)、9 号香附(RHIZOMA CYPER)、10号功劳叶(Folium Ilex)、11号地榆(Radix Sanguisorbae)、12号半边莲(Herba lobeliae chinensis)、13号瞿麦(Herba Dianthi)、14 号丁香(FLOS CARYOPHYLLI)、15 号女贞子(FRUCTUS LIGUSTRI LUCIDI)、16 号瓜蒌(FRUCTUS TRICHOSANTHIS)、17 号菟丝子(SEMEN CUSCUTAE)、18 号射干(RHIZOMA BELAMCANDAE)、19号五倍子(GALLA CHINENSIS)、20 号独活(RADIX ANGELICAE PUBESCENTIS)、21号山萸肉(FRUCTUS CORNI)、22号败酱草(Herba patriniae)、23号山豆根(RADIX ET RHIZOMA SOPHORAE TONKINENSIS)、24号连翘(FRUCTUS FORSYTHIAE)、25 号金樱子(FRUCTUS ROSAE LAEVIGATAE)、26号鹿衔草(HERBA PYROLAE)［3］，以上中草药均由北京长菁大药房提供。

ngd-0711.1.2 供试菌种。沙门氏菌(Salmonella)，由中国科学院微生物研究所提供。

1.1.3 主要仪器。DHP-9162型电热恒温培养箱，购自上海一恒科学仪器有限公司;SHZ-88A往复式水浴恒温振荡器，购自太仓市实验设备厂;DDS-307A电导率仪，购自上海精密科学仪器有限公司;TU-1810紫外可见分光光度计，购自北京普析通用仪器有限责任公司;RE-20

00B旋转蒸发仪，购自上海亚荣生化仪器厂;FW135中草药万能粉碎机，购自天津市泰斯特仪器有限公司;FA1004电子天平，购自上海天平仪器厂;KQ-500DE超声波清洗器，购自昆山市超声仪器有限公司。

1.1.4 主要试剂。肉汤培养基和琼脂培养基，均按常规方法制作［4］;无水乙醇(分析纯)，购自国药集团化学试剂有限公司;其他试剂均为分析纯，市售。

1.2 方法

1.2.1 中草药醇提液的制备。将26种中草药分别用中草药万能粉碎机粉碎成粉末状，备用。称取10.000 g药粉于具塞锥形瓶中，加入150 ml无水乙醇，摇匀，静置过夜浸泡10～12 h，将泡好的中草药过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，温度设定在50℃并回收乙醇，浓缩至10 ml(浓度为1.0 g/ml)，分装在2个5 ml的离心管中，备用。

1.2.2 沙门氏菌的活化、菌悬液与带药滤纸片的制备。(1)沙门氏菌的活化。分别配制琼脂培养基、肉汤培养基和浓度75%乙醇，灭菌后备用。先用砂轮将冻干菌种安瓶颈部挫出裂痕，再将冻干菌种管外壁用浓度75%乙醇棉擦净，待干。点燃酒精灯，将菌种管的封口一

3600s端在火焰上烧灼红热，用灭菌滴管吸取无菌水滴在灼热的菌种管封口一端，使其骤冷而炸裂。吸取少量肉汤培养基加至菌种管底部，将干菌搅动，随机吸出管内菌液接种至灭菌平板中，倒入琼脂培养基混合均匀，然后置于37℃电热恒温培养箱中培养24 h，连续接种培养3次。(2)菌悬液的制备。挑取2个活化的沙门氏菌单个菌落，接种于2 ml的肉汤试管中，于37℃电热恒温培养箱中培养12 h，取出，调节菌浓度为1×106个/ml。(3)带药滤纸片的制备。用轧孔器在定性滤纸上轧成直径为6 mm的小圆片，于120℃进行高压灭菌20 min;取4～5片灭菌滤纸片，放入装有中草药醇提液的离心管中，浸泡过夜24 h(滤纸片必须是圆形的)。

1.2.3 抑菌试验。吸取0.1 ml沙门氏菌菌悬液，加入灭菌平板中，倒入琼脂培养基混合均匀。取3片制备的带药滤纸片贴在平板上，距离不能太近，呈三角形，分别用无菌水和无水乙醇浸泡的滤纸片，进行平行试验［6］。将平板置于37℃电热恒温培养箱培养24 h，取出平板，观察是否有抑菌圈，若有即该种中草药对沙门氏菌有抑菌效果，反之无效果。测量抑菌圈直径大小，取其平均值。以抑菌圈直径为评价中草药醇提液抑菌效果的指标［7］。抑菌圈直径大于2 cm为抑菌效果好，抑菌圈直径小于2 cm为有抑菌效果。

菌落直径(mm)=测量菌落平均直径－药片直径

1.2.4 中草药提取物的制备。取抑菌圈直径排在前4位的中草药进行试验。称取50.000 g药粉，按料液比1∶15(g/ml)加入无水乙醇，浸泡3 h，过滤，再按料液比1∶10(g/ml)加入无水乙醇，过滤，收集2次滤液，合并，浓缩至50 ml，进行抑菌试验。

真空浇注1.2.5 最小抑菌浓度(MIC)的测定。取11支试管，编号为1～11，每支均装入1.0 ml的肉汤培养基。在1号试管内加1.0 ml的药液，混匀后吸取1.0 ml至2号试管，依次类推至9号试管吸取1.0 ml弃去。10号管为不含药液的1.0 ml肉汤对照，11号管为不含肉汤的1.0 ml药液对照。1号试管至9号试管药液浓度分别为 500.0、250.0、125.0、62.5、31.3、15.6、7.8 、3.9、1.9 和0.9 mg/ml，然后向每管加入 0.1 ml稀释成沙门氏菌菌悬液，置37℃摇床中，于120 r/min培养24 h，以透明的最低药物浓度计为该药物对该种细菌的最小抑菌浓度(MIC)［8］。

1.2.6 最小杀菌浓度(MBC)的测定。吸取0.1 ml透明的菌药液加入灭菌平板，倒入琼脂培养基，混合均匀，再置于37℃电热恒温培养箱中培养24 h，以没有菌生长的药物最小浓度计为该药对该种细菌的最小杀菌浓度(MBC)［9］。

>树脂吸附

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