caspase-glo3 7assay

1. 说明
2. G8090成分
1x2.5ml caspase 3/7 buffer,1瓶caspase 3/7底物(冻干);置于-20度,避光。4度3个月,常温4天。
96孔板  25  100ul/
384孔板声音定位  100  25 ul/
3. 试剂的准备和储存
a  caspase 3/7 buffer和caspase 3/7底物用前置于室温
b 将caspase 3/7 buffer加入caspase 3/7底物瓶,混匀,使得caspase 3/7底物溶解,成为caspase glo-3/7试剂。
c  caspase glo-3/7试剂4度可放置3天;4度放置1周可达到90%信号;4度放置4周可达到75%信号;caspase glo-3/7试剂-20度放置1周可达到75%信号;-20度放置4周可达到60%信号。
4.  检测细胞内caspase glo-3/7活性
  本实验caspase glo-3/7试剂和样品1:1混合。(96孔板100ul caspase glo-3/7试剂+100ul样品;384孔板 25ul caspase glo-3/7试剂+100ul样品。)
需要准备的仪器
a 光度计
b 96孔板振荡器
c 加样器
d 96孔板
集装箱内衬袋    4 A检测条件
    空白对照:caspase glo-3/7试剂+细胞培养液
    阴性对照:caspase glo-3/7试剂+培养细胞的细胞培养液
    实验孔:caspase glo-3/7试剂+处理后细胞的细胞培养液
    注意:a 96孔板中加入<20000细胞/孔; b 阴性对照和试验孔细胞数要一致; c 最高发光信号可能在1-2h达到,所以要在3h之内检测。
4 B 96孔板中培养的细胞caspase glo-3/7活性检测的标准方案
a 检测前,把caspase 3/7 buffercaspase 3/7二氧化氯发生器加药底物置于室温,混匀;
全自动电脑针织机b 拿出96孔板,室温放置片刻;
除冰车c caspase glo-3/7试剂100ul加入96孔板中(空白孔,阴性对照孔,试验孔)。避免交叉污染。
d 轻柔的混匀,300-500rpm 30s,然后室温孵育30min-3h。(室温尽量避免变化)
e 洗手液机用发光仪检测。
6 注意事项
a 敏感性,一定要有空白对照,并且在3h之内检测;
b 温度,光照和温度都会影响检测数据;
c 化学试剂,DMSO可用来溶解有机化学试剂;
d 混合,用细胞来检测时一定要混合以促进细胞裂解。

本文发布于:2024-09-23 02:16:15,感谢您对本站的认可!

本文链接:https://www.17tex.com/tex/1/268559.html

版权声明:本站内容均来自互联网,仅供演示用,请勿用于商业和其他非法用途。如果侵犯了您的权益请与我们联系,我们将在24小时内删除。

标签:细胞   试剂   检测   室温   底物   孔板
留言与评论(共有 0 条评论)
   
验证码:
Copyright ©2019-2024 Comsenz Inc.Powered by © 易纺专利技术学习网 豫ICP备2022007602号 豫公网安备41160202000603 站长QQ:729038198 关于我们 投诉建议