本法系用高效液相谱法测定药材及制剂中的黄曲霉毒素(以黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2总量计),除另有规定外,按下列方法测定。
谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-乙腈-水(40:18:42)为流动相,流速0.8mL/min;采用柱后衍生法检测: 光化学衍生法:光化学衍生器(254nm. PriboFast-KRC光化学柱后衍生器.Pribolab-MDU光化学柱后衍生器);以荧光检测器检测,激发波长λex =360nm(或365nm),发射波长缩管加工λem =450nm。两个相邻谱峰的分离度应大于1.5。
混合对照品溶液的制备:精密量取黄曲霉毒素混合标准品(黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标示浓度分别为1.0μg/mL、0.3μg/mL、1.0μg/mL、 0.3μg/mL、)0.5mL,置10m电动抽气机L于量瓶中,用甲醇稀释至刻度,作为储备液。精密量取储备液1mL,置25mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,即得。 (Pribolab STD#1082-2 AFT混合标准品:AFT B1和AFT G1:1.0μg/mL,AFT B2和AFT G2:0.3μg/mL )
火焰电视供试品溶液的制备:
1. 取供试品粉末约15g(过二号筛),精密称定,加入氯化钠3g,置于均质瓶中,精密加入精密加入70%甲醇溶液75mL,高速搅拌粉体输送阀2分钟(搅拌速度大于11,000r/min,
普瑞邦高速均质器Pribolab® 800S: 转速22,000 r/min)。
Pribolab®高速均质器,新药典新国标通用,针对各类真菌毒素及其他物质萃取时间要求不一的需求,通过特殊结构设计实现在短时间内对真菌毒素等物质的高效粉碎、萃取,保证检测结果的准确性和精确度。
粉碎样品在不锈钢杯中通过电机旋转驱动刀同时进行劈裂、碾碎、掺合等过程。使物料搅拌粉碎,转速高达22000以上,全金属机身和不锈钢杯子,抗有机溶剂的腐蚀,可以实现在2-3分钟高效实现真菌毒素的均质、萃取等关键环节。 优点:
●高速震荡3分钟即可完成整个真菌毒素及
其他物质的萃取过程 ;
●转速两档可调,低速12000r/min,
高速22000r/min;
●全金属机身,不锈钢材质,抗有机溶剂腐蚀;
●可广泛应用于食品检验、科学研究、医学、化工制药等行业;
●本机构造方面均合于无菌操作的要求;
●通过CE认证。
应用:
• 适用于真菌毒素检测样品的次级粉碎和快速萃取.
2.2500r/min离心5分钟或用槽纹滤纸过滤。
3.精密量取上清液15mL,置50mL量瓶中,用PBS溶液稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm,用PriboFast®玻璃微纤维滤纸代替最好,性能较高,效率高)过滤。
4.准确移取20.0mL样品提取液,过PriboFast® 免疫亲和柱,过柱时流速不能快,流速快的话回收效率差,建议采取重力过柱。 PriboFast®免疫亲和柱利用抗原抗体特异性可逆结合的原理, 将抗体与凝胶共价结合,然后填充柱子。将样品提取溶液过免疫亲和柱,而非目标化合物则沿柱流下,最后用洗脱缓冲液洗脱抗原,从而得到纯化的抗原。其提纯效率很高,适用于各类复杂样品包括食品、饲料等多种基质。整个纯化过程30分钟左右。气浮导轨
同时我们还提供多毒素复合免疫亲和柱。 5.用20mL水洗涤,洗涤液弃去。
6.为保证洗脱充分,建议以2.0mL谱甲醇分三步进行洗脱,重力洗脱即可。首先,加入1.0mL甲醇洗脱,当溶剂通过柱子后,孵育30s(孵育即甲醇在柱子中浸泡);然后,再加入0.5mL甲醇进行洗脱,过柱前孵育30s;最后,再加入0.5mL甲醇洗脱,过柱前孵育30s,并使2-3mL空气通过柱体,收集洗脱液,置2mL量瓶中,并用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。 (免疫亲和柱操作建议使用PriboFast®泵流操作架,便于控制各个步骤流速,保证较好的回收率)
测定法: 分别精密吸取上述混合对照品溶液5μL、10μL、15μL、20μL、25μL,注入液相谱仪,测定峰面积,以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标,绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液20~25μL,注入液相谱仪,测定峰面积,从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的量,计算,即得。
关于普瑞邦:
Pribolab(普瑞邦)是面向全球提供霉菌毒素检测解决方案的主要服务商之一,凭借强大
的研发团队和专业的霉菌毒素检测技术的研究,为全球农业生产、食品加工与粮食、饲料等行业提供专业的霉菌毒素检测技术与产品服务。
PriboFast®霉菌毒素免疫亲和柱
PriboMIPTM 霉菌毒素分子印迹固相亲和柱
PriboVitaTM 维生素类免疫亲和柱和试剂盒
PriboFast® 霉菌毒素多功能净化柱
PriboFast® 酶联免疫检测试剂盒
Pribolab® 霉菌毒素标准品和质控样品
PriboFast® 光化学柱后衍生器(KRC+MDU)
Pribolab® M-EVAP超高效浓缩器
亦可提供多种毒素以及复杂样品的代检服务,更多产品信息和技术问题请登录查询或咨询当地授权销售商。电动牙刷结构