supernatant．By using ＲNAi ，NEAT1was silenced in macrophages ，and after H37Ｒv infection ，the secretion of was detected ，and the change of bactericidal capacity agasint MTB was assessed．Ｒesults
Test results showed that
the expression of NEAT1and secretion of IL-6were both significantly increased （P ＜0.01）．By silencing NEAT1in macrophages ，there was a significant decrease in secretion of IL-6（P ＜0.01），and the ability of MTB removal was significantly decreased （P ＜0.01）．Conclusion H37Ｒv infection ＲAW264.7macrophages can promote
NEAT1expression ，silencing NEAT1can reduce the clearance of intracellular MTB by macrophages．
Key words
Mycobacterium tuberculosis ；lncＲNA NEAT1；ＲAW264.7macrophages
网络出版时间:2019－1－1114:06网络出版地址:http ://kns．cnki．net /kcms /detail /34．1065．r．20190109．1117．011．html
袁育珺1，杨秀玲2，胡志坚3
，汪
渊
3
摘要目的研究MDCK 细胞外基质对HK-2细胞的增殖和迁移的影响。方法 用氨水制备MDCK 细胞外间质，并
且作为HK-2细胞培养基础，随机分为正常对照组和细胞外基质组。用酸性磷酸酶、细胞划痕实验观察细胞的增殖和迁移状况；细胞免疫荧光和Westen blot 分析整合素α3和α6蛋白的表达变化。结果
与正常对照组比较，MDCK 细胞
一气学院外基质能明显促进HK-2细胞的体外增殖和迁移，整合素α3和α6表达增加（P ＜0.05）。结论MDCK 细胞外基质可促
裤衩裙进体外培养的HK-2细胞的增殖和迁移。关键词
细胞外基质；HK-2；整合素；增殖；迁移中图分类号
Ｒ735.7
文献标志码A 文章编号1000－1492（2019）02－0216－04doi ：10．19405/j．cnki．issn1000－1492．2019．02．011
肾小管上皮细胞生长、移行在急性肾损伤修复，
延缓糖尿病肾病（diabetic nephropathy ，
DN ）进展等过程中起重要作用，
寻促进肾小管上皮细胞增殖和迁移的因素或药物十分重要。整合素（integrin ）是一类由α亚基和β亚基组成的异源二聚体跨膜
蛋白，
属细胞黏附分子家族，研究［1］
分合闸电磁铁
表明，其能介导细胞与细胞及细胞外基质（extracellular matrix ，
2018－09－12接收
基金项目：江西省卫生计生委科技计划项目（编号：20181141）
作者单位：江西省九江学院附属医院1检验科、2
还春院感科，九江
332000
3
安徽医科大学分子生物学实验室、生物化学教研室、安徽省/省部共建教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室，合肥230032
作者简介：袁育珺，男，硕士研究生；
汪
渊，男，教授，博士生导师，责任作者，E-mail ：wan-gyuan@ahmu．edu．cn
ECM ）之间的黏附，是细胞迁移、增殖等生理活动重要的调控因素。整合素α3和α6能与细胞外间质中的层黏连蛋白（Laminin ，LN ）结合［2－3］
，影响细胞
的黏附和运动
车载卫星天线［4］
。该研究采用体外培养HK-2细
胞，
运用相关分子生物学技术（如酸性磷酸酶活性、细胞划痕实验、免疫荧光、Western blot 等）分析生长于细胞外基质上的HK-2细胞的增殖和迁移状况以及整合素α3和α6蛋白表达的变化，
并进一步探讨这些作用可能的分子调控机制，以开拓其在临床的应用前景。1材料与方法1．1
材料
犬肾小管上皮细胞株MDCK 和肾近曲
小管上皮细胞株HK-2均购自中国科学技术大学生命科学院细胞库， 于实验室液氮保存；DMEM 和原装小牛血清均购自美国Gibco 公司；酸性磷酸酶（acid phosphatase ，ACP ）活性检测试剂盒购自安徽碧云天生物试剂公司；一抗actin 、
挡风被
整合素α3和α6均购自美国Santa Cruz 公司；二抗购自美国Pierce 公司。1．2方法1．2．1
细胞培养和细胞外基质的制备液氮取出
HK-2和MDCK 细胞，迅速37ħ循环水浴解冻，及
时接种于含10%小牛血清DMEM ，
细胞培养箱（条件：37ħ、
5%CO 2、饱和湿度）培养过夜。胰酶消化传代，
备用。细胞外基质制备方法如下［5－6］
：取MD-
CK 细胞（细胞覆盖率90%），弃上清液，PBS 清洗2遍，加入氨水（浓度为20mmol /L ）处理10min ，弃氨水，
PBS 清洗基质3遍，在含或不含MDCK 细胞外基·
612·安徽医科大学学报Acta Universitatis Medicinalis Anhui 2019Feb ;54(2)
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