doi: 10. 3969/j. issn. 1005 — 1740. 2021. 01. 004
撤循环学杂志，2021,31(1):20 — 23
© 2021
CHINESE JOURNAL OF MICROCIRCULATION
赵海专1
袁明杰1
余波
2’#
[中图分类号]R543. 5 [文献标识码]A [文章编号]1005 —1740(2021)01 — 0020 — 04
【摘要】目的：分析高脂饮食致肥胖或动脉粥样硬化兔子血管内膜白细胞介素-1(KIL-1f 〇和肿瘤坏死因子-a (TN F -a )水平变化。方法：12只健康新西兰大白兔，分为普通饮食组（O D 组）和高脂饮食组（H F D 组）。依据动脉
粥样硬化造模方法，高脂饮食喂养兔8周后，获取兔子血液或颈动脉组织。检测血细胞相关参数和血液生化参数 及动脉内膜的厚度，同时用E L IS A 检测IL -邛和T N F -a 水平，W estern B lot 法检测血管内膜IL -邛和T N F -a 蛋白 的表达。比较分析两组各检测参数的差异。结果：两组兔子外周血细胞检测项目无统计学差异（P >0. 05)。HFD 组脂质检测指标甘油三酯（T G )、总胆固醇(T C )、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C )和载脂蛋白B (A P 〇B )均显著高于
O D 组（_P<0. 05，_P<0. 01)，而高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C )则显著低于O D 组（_P< 0. 05)。其它血液生化项目
在两组间的水平无显著差异（P >0.05)。E L IS A 检测O D 组血浆IL -邛和T N F -a 的水平显著低于H F D 组（_P<0.
05)。以高脂饮食喂养健康兔子发现H F D 组兔血管内膜的厚度明显高于O D 组（_P<0. 05)，且血管内膜炎性因子 IL -邛和T N F -a 蛋白表达具有同样的趋势。结论：以高脂饮食喂养健康兔子发现动脉粥样硬化模型兔子炎性因子 IL -邛和T N F -a 在血液中和血管内膜均有表达增高，或可与动脉粥样硬化相关。
【关键词】
高质饮食；炎性因子；血管内膜；兔子
High Fat Diet Up-regulated the Expreiision of Inflammatory Cytokines in Rabbit Vascular Intima and Serum
ZHAO Hai -zhuan 1 ,YUAN Min -jie 1 ,YU Bo 2^
1Renmin Hospital of Wuhan University，Wuhan 430060，China ； 2Department of Emergency，The Central Hospital of Wuhan，Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technol ogy ， Wuhan 430014，China ； # Corresponding author
【Abstract 】 Objective : T oan a lyzeth ech an gesof interleukin -1(3 (IL -1(3) andtum ornecrosisfactor-a (T N F -a)
in vascular intima of rabbits with obesity or atherosclerosis induced by high-fat diet.
Method ： 12 New Z
rabbits were divided into normal diet group (O D
group)
and
high-quality
diet
group (H FD
g
with high-quality diet for the atherosclerotic model，and at 8 weeks
the
rabbit blood or c
obtained. Blood
高温气化炉热电偶routine
广告检测parameters
and arterial intima
thickness were detected. Serum
levels
o
were tested by E LISA，and the two inflammatory factors expression in vascular intima were examined by WB method. The difference between t wo groups' data was analysed by the statistical mehod. Results ： There was no significant diference in routine
blood
test
tem s插板闸门
between the
two
groups
(P >0. 05).
T G ，T C ，鼠标笔
group were signiticantly higher than those in OD group (P <0. 05,P <0. 01)，while HDL-C was signiticantly lower than that in OD group (P <0. 05). There was no signiticant difference in other blood biochemical items between the two groups (P >0. 05). The levels of
IL-1(3
and TNF-a
in OD
group
were
signiticantly
l
* [基金项目]武汉市卫计委课题(W X20Q 21)
[作者单位]1武汉大学人民医院，武汉430060;
2华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院急诊科，武汉430014; #通讯作者，E-
m ail25900503@qq. com
本文 2020-09-05 收到，2020-11-28 修回
徽循环学杂志
2021年第31卷第1期
厘础与裒验►
高脂饮食上调兔子血管内膜与血清炎性因子表达21
group (犘〈0. 05). The intimal thickness of HFD group was significantly higher than that of OD group (犘<^0. 05),
and the protein expression of inflammatory factors IL-1(3 and TNF-a showed the same t found that the expression of IL-1(3 andTN F-a in blood and vascular intima of a which may be related to atherosclerosis.
【Keywords】High quality diet; Inflammatory factors; Vascular intima; Rabbits
高脂饮食诱导动脉粥样硬化模型通常被用来研 究心血管疾病的相关机制[1’2]。动脉粥样硬化引起 心血管疾病的死亡率逐渐增加[3]，且发病年龄有年 轻化的趋势[4]，是临床关注的热点之一，但其发病机 制还不明确。研究认为动脉粥样硬化的变化过程是 多因素作用的结果，炎症是其中一个重要原因[一7]。高脂饮食是引起肥胖的因素之一，肥胖者易发动脉 粥样硬化相关心血管疾病[8]。但高脂饮食引起血管 内皮细胞损伤或功能障碍而致炎症反应还未见明确 的报道。本实验利用高脂饮食诱导兔子动脉粥样硬 化造模，分析高脂饮食与炎症反应的关系，为预防肥 胖或动脉粥样硬化提供数据参考。
1材料与方法
1.1动物造模和分组
12只健康新西兰兔子，雌雄各半，体重2. 50士0.35kg，购于湖北省医学实验动物中心（SCXK(鄂）2019 —0004)。所有兔子购回后饲养于本院SPF级 实验动物中心。维持室温25 ± 2 ，相对湿度为45%—60%，12h光照/黑暗交替。将12只兔子平 分为两组：普通饮食组（O D组，n=6)和高脂饮食组 (H FD组，n=6)。普通饲料主要包括玉米、麦麸、豆 粕、鱼粉、壳粉、食盐和复合维生素。高脂饮食配方 在普通饲料的基础上增加了蛋黄粉、胆固醇和猪油，所有兔子饲养8周后，耳静脉逐渐注射麻 醉后抽血液，随后处死取颈动脉。
1.2实验室相关指标检测
兔子麻醉后经耳静脉采集血液8.0m t，其中2. 0m t置人EDTA-K2抗凝管中，混匀使用SYSMEX NE-9000型全自动血球分析仪及配套试剂（日本希 森美康公司）检测血细胞相关参数：包括白细胞(WBC)、红细胞（RBC)、血红蛋白（HB)、红细胞压 积（HCT)、血小板（PLT)等，另6. 0m t血置人促凝 剂管中，以3000转/m in离心10min分离血清，分别 使用ADVIA-2400型全自动血液生化分析仪（德国 西门子公司）检测血液生化参数：包括总蛋白（TP)、白蛋白（ALB)、丙氨酸转氨酶（A L T)、天冬氨酸转 氨酶(AST)、肌酸激酶（CK)、乳酸脱氢酶（LDH)、撤循邡字杂志_____________________________ 2021年第31卷第1期尿素氮（BUN)、肌酐（CREA)、血糖（GLU)、甘油三 酯（T G)、总胆固醇（TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C)、载脂蛋 白A(ApoA)、载脂蛋白B(ApoB)、载脂蛋白小a [Lp(a)]，以及ELISA法检测血清炎
性因子水平：包括白细胞介素1卩（IL-1|3)和肿瘤坏死因子a (TNF-a)浓度，试剂盒为上海通蔚生物科技有限公 司生产（IL-1(]货号：TWp027836，TNF-a 货号：TWp028087)；酶标仪为迈瑞医疗器械公司全自动 酶标仪M R-96 A，所有检测均由本院检验科按操作 手册说明书进行。
1.3组织病理学观察
兔子处死后，取颈动脉常规石蜡包埋，4p m连 续切片，用苏木精和伊红（HE)染，由专业的病理 学科医师阅片。使用A x op h ot显微镜(德国蔡司公 司）和数码相机（Leaf Systems Lumina，日本玛米亚 利图公司）拍摄图像。采用图像处理软件（Verson 6. 5，Media Cybernetics，美国 Silver Springs公司）分析血管内膜平均厚度。
1.4 W esternBlot分析蛋白表达[]
颈动脉组织用1m i裂解液充分裂解，4C、12 500g离心15min取上清。使用BCA蛋白质分析试 剂（PierceCom，Rockford，IL，USA)测定蛋白质 浓度。将每个样品的等量裂解蛋白（Opg)装载在7. 5%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶上进行电 泳，然后将条带转移到聚偏二氟乙烯膜上（八〇£；-sham Pharmacia Biotech，Piscataway，NJ，USA)。室温下用3%牛血清白蛋白在T r s缓冲盐液中阻断 与膜的非特异性结合1h。然后在4C下与不同的一 抗抗体孵育过夜，抗IL-1卩兔多克隆抗体(上海艾博 抗，编号ab2105)，抗T N F a兔多克隆抗体（深圳子 科生物科技有限公司，编号ZIKER-0078R)和
抗 GAPDH(SantaCruz，CA，美国.编号sc-25778)。辣根过氧化物酶结合山羊抗兔IgG2a二抗（Santa Cruz，C A，美国.编号sc-2061)孵育2h。通过Bio-RadGelDocXR和 Chemi-DocXRS系统（Bio-Rad，Hercules，美国Bio-R ad公司）扫描蛋白质条带，并 使用 QuantityOne—维分析软件（Version4_ 6.3，--------------------厘础与裒验卜
22赵海专，袁明杰，余波
美国Bio-Rad公司）进行分析。以目标蛋白与GAPDH蛋白条带灰度值的比值表示该目标蛋白的 相对表达量。
1.5统计学处理
采用SPSS 19.0软件进行统计分析，定量资料 以平均值士标准差（无士D表示，组间比较采用t检 验。P<0.05为差异具有统计学意义。
2结果
2.1两组兔子各项血液参数结果比较
两组血液学指标检测结果见表1。与O D组比 较，H ED组丁G、丁C、LDL-C、ApoB、IL-l p和丁NF-a
水平均升高，而HDL-C水平降低，差异均有统计 学意义（P<0.05或P<0. 01)，两组其它指标差异 无统计学意义（P>0.05)。
表1不同组血液参数检测（无士 s，n均=6)
钢套箱项目OD组HFD组t值P值WBC(109/L)7.82士1.257.12士0.741180. 626
RBC(1012/L) 6. 62士0. 29 6. 41士0.321190.871
HB(g/L)131. 72士7. 65129.36士9.260480. 252
HCT(%)41. 42士3. 0442. 32士1.55一0. 650. 863
PLT(109/L)413. 30士26. 37421.31士19. 43一0. 600. 532
TP(g/L)54.17士2. 2252.16士3.12 1.290. 681
ALB(g/L)39. 48士5.1340. 21士12. 37一 0.130. 654
ALTCIU/L)51. 43士2. 4248. 53士2. 76 1. 940. 362
ASTCIU/L)37. 59士3. 1438. 25士5.12一0270.849
CKCIU/L)83. 12士4. 4682. 38士2. 460. 360.793
LDHCIU/L)62. 78士4. 2463.17士7.26一0110.875 BUN (mmol/L)12. 73士0.7211. 81士0.26一0260. 102 CREA(xmol/L)121. 51士5.42119. 42士4. 430.730. 893 GLU(mmol/L) 6. 41士0.28 6.31士0.130.790.517
TG (mmol/L) 1.23士0.42 3.36士0.432)一8680. 001
TC (mmol/L) 1. 53士0. 63 2.58士0.411：)一3420. 023 HDL-C (mmol/L)0.48士0.180.36士0.101 2.620. 031 LDL-C (mmol/L)0. 68士0. 24 1.53士0.471一3950. 022
ApoA (g/L)0.16士0.050.17士0. 01一0480. 461
ApoB (g/L)0.04士0.010.16士0.022)一13. 150. 001 L p (a) (mg/L)186. 00士24. 20179. 00士25. 300.490. 522
I L-1J3(pg/ml)102. 57士18. 37136. 51士11. 721一3820. 017 TNF-a (pg/ml )58. 72士12. 4179.38士9. 42一3250. 025注：与〇〇组比较，1)尸〈0.05,2)尸〈0.01
2.2两组兔子血管内膜厚度比较
H FD组血管内膜厚度明显高于O D组（2. 34士
0.08mm vs 1.73士0. 11mm)，差异有统计学意义（乙=4. 93，P<0. 01)。见图 1。
2.3两组兔子血管内膜丁NF-a和IL-邛蛋白表达 比较
徴循f l字杂志 __________________________________ 2021年第31卷第1期
HFD组丁N F-a蛋白表达高于O D组（0• 51士0.03v s0.25士0. 02)。IL-邛蛋白表达亦高于OD 组（0.42士0.02vs 0.22士0.03)，差异均有统计学意 义U=6.22、6.27，P<0.01)。见图 2。
〇D组H FD组
TNF-a
IL-1 (3
GAPDH
图2 两组兔血管内膜IL-ip和TNF-a蛋白表达（WesternBlot)
图1两组兔子血管内膜厚度
3讨论
高脂饮食已经成为许多人的日常饮食常态，特 别是年轻人。但长期高脂饮食容易引发多种疾病，例如糖尿病、肥胖、心血管疾病、胆囊炎和癌症等[9’10]。高脂饮食引起肥胖和动脉粥样硬化被临床 重点关注[2]。流行病学调查研究显示高脂饮食人 肥胖和动脉粥样硬化发病率明显高于普通饮食者[8’10]。高脂饮食与肥胖和动脉粥样硬化可能存在 一定的相关性。
本研究结果揭示高脂饮食可上调兔子血管内膜 炎性因子的表达。以高脂饮食诱导动脉粥样硬化模 型为研究对象，我们发现高脂饮食不仅影响一些常------------------------量硼与蓺验
卜
高脂饮食上调兔子血管内膜与血清炎性因子表达23
规血脂指标的改变，而且上调血液炎性因子IL-1|3和TNF-a水平，且W estem blot检测显示増生的血 管内膜IL-1|3和TNF-a蛋白表达増加。提示高脂 饮食可以引起炎性因子水平的变化，或可予动脉粥 样硬化有关。
本研究高质饮食可引起血液脂质检测参数的改 变，实验结果发现高脂饮食兔子体重明显高于普通 饮食的兔子，说明了高脂饮食与引发肥胖有关，但对 于高脂饮食引起肥胖的明确机理还不清楚。
有研究表明炎性因子IL-1|3和TNF-a高表达 引起血管内膜的増生[13—15]，此与H FD实验组兔子 血管内膜増生明显高于0D组一致。TNF-a高表 达还引起细胞的凋亡或组织的坏死[15]，炎性因子水 平升高可能与动脉粥样硬化引起血管内皮的损伤、坏死或破裂相关。因此，即高脂饮食可能通过上调 炎性因子IL-1|3和TNF-a高表达引起肥胖或动脉 粥样硬化。
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本研究的结果还存在一些不足之处：1)虽然观 察到高脂饮食可上调炎性因子水平，但高脂饮食上 调炎性因子的机理未知；2)实验研究检测的仅仅是 颈总动脉内膜，其它器官组织未作检测。3)是否还 存在着其它因素影响实验结果还未明确；）炎性因 子种类多，各因子作用不一样，本研究只检测IL-1|3和TNF-a因子。
综上所述，高脂饮食影响血脂指标，可能是高脂 饮食脂质代谢紊乱相关，导致肥胖的重要原因之一。同时高脂饮食促进血液炎性因子IL-1|3和TNF-a 水平増高，且明显上调血管内膜炎性因子IL-1|3和TNF-a的表达，但高脂饮食上调炎性因子的机理尚 不清楚，有待进一步的研究。◄单眼3d
本文第一作者筒介：
赵海专(1962 —男，汉族，硕士，副主任技师，主要从事血脂代谢研究
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