江苏农业学报(ＪｉａｎｇｓｕＪ.ｏｆＡｇｒ.Ｓｃｉ.)ꎬ２０２２ꎬ３８(１):６５￣７２ｈｔｔｐ://ｊｓｎｙｘｂ.ｊａａｓ.ａｃ.ｃｎ
杨㊀柳ꎬ况佳颖ꎬ任春梅ꎬ等.江苏省主要葫芦科作物病毒种类及分布[Ｊ].江苏农业学报ꎬ２０２２ꎬ３８(１):６５￣７２.ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１０００￣４４４０.２０２２.０１.００７ 江苏省主要葫芦科作物病毒种类及分布
杨㊀柳１ꎬ㊀况佳颖２ꎬ㊀任春梅１ꎬ㊀缪㊀倩１ꎬ㊀陆㊀芳１ꎬ㊀季英华１ꎬ㊀程兆榜１
(１.江苏省农业科学院植物保护研究所ꎬ江苏南京２１００１４ꎻ２.南京农业大学园艺学院ꎬ江苏南京２１００９５)
收稿日期:２０２１￣０５￣１７
基金项目：国家自然科学基金项目(３１５０１６１０)ꎻ公益性行业(农业)
科研专项(２０１３０３０２８)
作者简介：杨㊀柳(１９８４－)ꎬ女ꎬ江苏徐州人ꎬ博士ꎬ助理研究员ꎬ研究
方向为蔬菜病毒病ꎮ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｓｕｉｙａｎｇｙ＠１２６.ｃｏｍ
通讯作者：程兆榜ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｏｎｌｙｏｎｅ８５０１＠１２６.ｃｏｍ
㊀㊀摘要:㊀葫芦科作物在江苏省蔬菜作物生产中具有重要的地位ꎮ为明确江苏省葫芦科作物上主要病毒的种类和分布ꎬ本研究于２０１９年６月－２０２０年１１月在江苏省内７个地区的７种葫芦科作物上共采集了６９３份样品ꎬ采用分子生物学方法对样品进行了检测鉴定ꎮ结果共检出９种病毒ꎬ以马铃薯Ｙ病毒属病毒最为常见ꎬ其中小西葫芦黄花叶病毒(ＺＹＭＶ)在各地区的检出率最高ꎬ在各个物种中的检出率也较高ꎮ检测结果还显示ꎬ在各个地区的各种作物上普遍存在复合侵染现象ꎬ复合侵染中病毒种类最多达４种ꎬＺＹＭＶ和西瓜花叶病毒(ＷＭＶ)的复合侵染率最高ꎮ本研究结果有助于了解江苏省内葫芦科作物病毒病的发生情况ꎬ为有效预防和控制病毒病害的发生和传播提供理论依据ꎮ 关键词:㊀葫芦科作物ꎻ植物病毒ꎻ种类鉴定ꎻ分布
中图分类号:㊀Ｓ６４２ꎻＳ４３２.４＋１㊀㊀㊀文献标识码:㊀Ａ㊀㊀㊀文章编号:㊀１０００￣４４４０(２０２２)０１￣００６５￣０８
ＶａｒｉｅｔｙａｎｄｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｍａｊｏｒｖｉｒｕｓｅｓｉｎｆｅｃｔｉｎｇＣｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅｃｒｏｐｓｉｎ
Ｊｉａｎｇｓｕｐｒｏｖｉｎｃｅ
车位管理系统
ＹＡＮＧＬｉｕ１ꎬ㊀ＫＵＡＮＧＪｉａ￣ｙｉｎｇ２ꎬ㊀
ＲＥＮＣｈｕｎ￣ｍｅｉ１ꎬ㊀
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ＬＵＦａｎｇ１ꎬ㊀
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ＣＨＥＮＧＺｈａｏ￣ｂａｎｇ１
(１.ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎꎬＪｉａｎｇｓｕＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＮａｎｊｉｎｇ２１００１４ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅꎬＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉ￣ｖｅｒｓｉｔｙꎬＮａｎｊｉｎｇ２１００９５ꎬＣｈｉｎａ)
㊀㊀Ａｂｓｔｒａｃｔ:㊀Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅｃｒｏｐｓｐｌａｙａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔ
ｒｏｌｅｉｎｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｖｅｇｅｔａｂｌｅｓｉｎＪｉａｎｇｓｕｐｒｏｖｉｎｃｅ.ＴｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｔｙｐｅｓａｎｄｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｍａｊｏｒｖｉｒｕｓｅｓｏｎＣｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅｃｒｏｐｓꎬ６９３ｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｓｅｖｅｎｓｐｅｃｉｅｓｏｆＣｕｃｕｒ￣ｂｉｔａｃｅａｅｃｒｏｐｓｉｎｓｅｖｅｎｌｏｃａｔｉｏｎｓｉｎＪｉａｎｇｓｕｐｒｏｖｉｎｃｅｆｒｏｍＪｕｎｅ２０１９ｔｏＮｏｖｅｍｂｅｒ２０２０.Ｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄａｎｄｉ￣ｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｓ.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔａｔｏｔａｌｏｆｎｉｎｅｋｉｎｄｓｏｆｖｉｒｕｓｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄꎬａｎｄｖｉｒｕｓｅｓｆｒｏｍＰｏｔｙｖｉｒｕｓｗｅｒｅｃｏｍｍｏｎ.Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｚｕｃｃｈｉｎｉｙｅｌｌｏｗｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ(ＺＹＭＶ)ｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｉｎａｌｌｒｅｇｉｏｎｓａｎｄｗａｓｈｉｇｈｉｎａｌｌｓｐｅｃｉｅｓ.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓａｌｓｏｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｍｉｘｅｄｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓｗｅｒｅｐｒｅｖａｌｅｎｔｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔＣｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅｃｒｏｐｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｏｃａｔｉｏｎｓꎬａｎｄｕｐｔｏｆｏｕｒｖｉｒｕｓｅｓｗｅｒｅｆｏｕｎｄｉｎｍｉｘｅｄｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓｉｎｔｈｅｔｅｓｔｅｄｓａｍｐｌｅｓꎬａｍｏｎｇｗｈｉｃｈＺＹＭＶａｎｄｗａｔｅｒｍｅｌｏｎｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ(ＷＭＶ)ｃｏ￣ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｆｒｅｑｕｅｎｃｙ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｃａｎ
ｈｅｌｐｔｏｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｔｈｅｏｃｃｕｒ￣ｒｅｎｃｅｏｆｖｉｒｕｓｄｉｓｅａｓｅｓｉｎＣｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅｃｒｏｐｓｉｎＪｉａｎｇｓｕｐｒｏｖｉｎｃｅａｎｄｐｒｏｖｉｄｅａｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｅｆｆｅｃｔｉｖｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄ
ｃｏｎｔｒｏｌｏｆｖｉｒａｌｄｉｓｅａｓｅｓｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ.
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Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:㊀Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅｃｒｏｐｓꎻｐｌａｎｔｖｉｒｕｓꎻｐａｔｈｏｇｅｎｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎꎻｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ
㊀㊀葫芦科作物广泛分布于亚热带㊁热带和温带地区ꎬ具有重要的食用和药用价值ꎬ在中国也是一种广泛种植的重要经济作物ꎮ江苏省是蔬菜种植大省ꎬ葫芦科作物也有大面积分布ꎮ目前ꎬ江苏省内种植的葫芦科作物主要有西瓜㊁甜瓜㊁黄瓜㊁丝瓜㊁冬瓜㊁
５
６. All Rights Reserved.
南瓜㊁西葫芦㊁瓠瓜㊁苦瓜等ꎬ其种植方式基本可分为露地栽培和设施栽培ꎮ
葫芦科作物在栽培过程中经常会受到病毒病的危害ꎬ随着江苏省内葫芦科作物种植规模的扩大ꎬ病毒病的发生也愈加频繁ꎬ严重影响了作物的产量和质量ꎬ往往会造成重大经济损失ꎮ侵染葫芦科作物的病毒种类很多ꎬ根据古勤生等[１]的统计结果ꎬ葫芦科作物病毒种类共计３８个确定种ꎬ９个暂定种和
１种类病毒[１]ꎮ随着人们对葫芦科病毒研究的不断深入ꎬ根据林石明等[２]的统计结果ꎬ国内外报道的为害葫芦科作物的病毒种类已达到８６种ꎬ这些病毒共涉及１５个科㊁２４个属ꎮ国内报道的经常为害葫芦科作物的病毒大约有１０种ꎬ主要为烟草花叶病毒(ＴｏｂａｃｃｏｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓꎬＴＭＶ)㊁黄瓜花叶病毒(Ｃｕ￣ｃｕｍｂｅｒｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓꎬＣＭＶ)㊁西瓜花叶病毒(Ｗａｔｅｒ￣ｍｅｌｏｎｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓꎬＷＭＶ)㊁小西葫芦黄花叶病毒(ＺｕｃｃｈｉｎｉｙｅｌｌｏｗｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓꎬＺＹＭＶ)㊁黄瓜绿斑驳花叶病毒(ＣｕｃｕｍｂｅｒｇｒｅｅｎｍｏｔｔｌｅｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓꎬＣＧＭＭＶ)㊁番木瓜环斑病毒(ＰａｐａｙａｒｉｎｇｓｐｏｔｖｉｒｕｓꎬＰＲＳＶ)㊁南瓜蚜传黄化病毒(Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｐｈｉｄ￣ｂｏｒｎｅｙｅｌｌｏｗｓｖｉｒｕｓꎬＣＡＢＹＶ)㊁南瓜花叶病毒(Ｓｑｕａｓｈｍｏ￣ｓａｉｃｖｉｒｕｓꎬＳｑＭＶ)㊁甜瓜坏死斑点病毒(Ｍｅｌｏｎｎｅｃ￣ｒｏｔｉｃｓｐｏｔｖｉｒｕｓꎬＭＮＳＶ)等[３￣１０]ꎮ这些病毒通常通过媒介昆虫或者农事操作等途径传播扩散ꎬ它们一般会导致寄主发生系统性感染ꎬ并表现出各种典型症状ꎬ例如花叶㊁黄化㊁叶片褪绿㊁皱缩㊁畸形以及植株矮小或生长迟缓㊁果实畸形不可食用㊁顶端或者系统性坏死等ꎮ有些作物上还会发生病毒复合侵染现象ꎬ即多种病毒同时感染ꎬ而不只有某一种病毒侵染ꎮ
目前已有的报道大多针对特定作物上特定种类的病毒病ꎬ缺乏较为全面系统的调查鉴定ꎮ对江苏省主要葫芦科农作物病毒病的发生情况开展较为全面的普查ꎬ对病毒种类进行系统鉴定ꎬ可以明确江苏省葫芦科作物上发生的主要病毒病种类㊁分布乃至扩散趋势ꎬ也有利于制定更具有针对性的㊁更为有效的病害预警和防控策略ꎬ从而促进葫芦科作物的生产和发展ꎮ本研究于２０１９年６月－２０２０年１１月在江苏省内７个地点共采集了６９３份葫芦科作物样品ꎬ涵盖了葫芦科中较常种植的７种作物ꎬ对其进行了检测鉴定ꎬ共检测出９种病毒ꎬ其中以马铃薯Ｙ病毒属病毒最为常见ꎮ１㊀材料与方法
１.１㊀样品采集
２０１９年６月至２０２０年１１月ꎬ调查江苏南京㊁苏州㊁睢宁㊁丰县㊁洪泽㊁东台㊁姜堰共７个地区主要葫芦科作物病害情况ꎬ在调查过程中对出现斑驳花叶㊁褪绿㊁黄化㊁皱缩㊁畸形㊁坏死等疑似病毒病症状的葫芦科植物叶片进行采集ꎮ
１.２㊀总ＲＮＡ提取及反转录
按照植物多糖多酚ＲＮＡ提取试剂盒(上海浦迪生物科技有限公司产品)说明书上的步骤提取病叶样品中的总ＲＮＡꎮ提取后的总ＲＮＡ经ＮａｎｏＤｒｏｐ超微量紫外分光光度计测定浓度和质量后ꎬ置于－８０ħ超低温冰箱保存ꎮ反转录使用ＨｉＳｃｒｉｐｔⅡＱＲＴＳｕｐｅｒＭｉｘ试剂盒(南京诺唯赞生物科技股份有限公司产品)ꎬ取２μｌ上述提取的ＲＮＡꎬ按说明书步骤进行操作ꎬ获得的ｃＤＮＡ保
存于－２０ħ备用ꎮ１.３㊀ＰＣＲ检测
ＰＣＲ反应使用ＴａＫａＲａＥｘＴａｑ(宝生物工程有限公司产品)ꎬ总体积为２５ ０μｌꎬ其中２ˑＥｘＴａｑＭｉｘ１２ ５μｌꎬ上下游引物各０ ５μｌꎬ反转录后的模板ｃＤ￣ＮＡ１ ０μｌꎬ用ｄｄＨ２Ｏ补足至２５ ０μｌꎮ反应程序为:９４ħ预变性３ｍｉｎꎻ９４ħ变性３０ｓꎬ退火３０ｓꎬ退火温度根据不同引物Ｔｍ值设定ꎬ７２ħ延伸４５ｓꎬ３５个循环ꎻ７２ħ延伸５ｍｉｎꎬ４ħ保存ꎮ根据已报道的葫芦科作物常见病毒种类ꎬ设立的待检病毒有ＣＭＶ㊁ＴＭＶ㊁ＰＲＳＶ㊁ＣＡＢＹＶ㊁ＳｑＭＶ㊁ＷＭＶ㊁ＺＹＭＶ㊁ＣＧＭＭＶ㊁ＭＮＳＶ㊁甜菜伪黄化病毒(Ｂｅｅｔｐｓｅｕｄｏ￣ｙｅｌｌｏｗｓｖｉｒｕｓꎬＢＰＹＶ)㊁苦瓜黄脉病毒(Ｂｉｔｔｅｒｇｏｕｒｄｙｅｌｌｏｗｖｅｉｎｖｉ￣ｒｕｓꎬＢＧＹＶＶ)㊁菜豆黄花叶病毒(ＢｅａｎｙｅｌｌｏｗｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓꎬＢＹＭＶ)㊁小西葫芦绿斑驳病毒(ＺｕｃｃｈｉｎｉｇｒｅｅｎｍｏｔｔｌｅｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓꎬＺＧＭＭＶ)㊁小西葫芦黄点病毒(ＺｕｃｃｈｉｎｉｙｅｌｌｏｗｆｌｅｃｋｖｉｒｕｓꎬＺＹＦＶ)㊁瓜类褪绿黄化病毒(ＣｕｃｕｒｂｉｔｃｈｌｏｒｏｔｉｃｙｅｌｌｏｗｓｖｉｒｕｓꎬＣＣＹＶ)㊁酱瓜绿斑驳花叶病毒(ＫｙｕｒｉｇｒｅｅｎｍｏｔｔｌｅｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓꎬＫＧＭＭＶ)㊁甜瓜黄斑病毒(ＭｅｌｏｎｙｅｌｌｏｗｓｐｏｔｖｉｒｕｓꎬＭＹＳＶ)㊁黄瓜叶斑病毒(ＣｕｃｕｍｂｅｒｌｅａｆｓｐｏｔｖｉｒｕｓꎬＣＬＳＶ)㊁黄瓜脉黄病毒(Ｃｕｃｕｍｂｅｒｖｅｉｎｙｅｌｌｏｗｉｎｇｖｉ￣ｒｕｓꎬＣＶＹＶ)㊁南瓜脉黄病毒(ＳｑｕａｓｈｖｅｉｎｙｅｌｌｏｗｉｎｇｖｉｒｕｓꎬＳｑ
ＶＹＶ)㊁瓜类黄矮化失调病毒(ＣｕｃｕｒｂｉｔｙｅｌｌｏｗｓｔｕｎｔｉｎｇｄｉｓｏｒｄｅｒｖｉｒｕｓꎬＣＹＳＤＶ)㊁丝瓜黄花叶病毒(ＬｕｆｆａｙｅｌｌｏｗｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓꎬＬＹＭＶ)㊁甜瓜蚜传
６６江苏农业学报㊀２０２２年第３８卷第１期. All Rights Reserved.
黄化病毒(Ｍｅｌｏｎａｐｈｉｄ￣ｂｏｒｎｅｙｅｌｌｏｗｓｖｉｒｕｓꎬＭＡＢＹＶ)㊁丝瓜蚜传黄化病毒(Ｓｕａｋｗａａｐｈｉｄ￣ｂｏｒｎｅｙｅｌｌｏｗｓｖｉｒｕｓꎬＳＡＢＹＶ)㊁摩洛哥西瓜花叶病毒(Ｍｏ￣
ｒｏｃｃａｎｗａｔｅｒｍｅｌｏｎｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓꎬＭＷＭＶ)㊁番木瓜花叶病毒(ＰａｐａｙａｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓꎬＰａｐＭＶ)㊁南瓜曲叶病毒(ＳｑｕａｓｈｌｅａｆｃｕｒｌｖｉｒｕｓꎬＳＬＣＶ)㊁番茄斑萎病毒(ＴｏｍａｔｏｓｐｏｔｔｅｄｗｉｌｔｖｉｒｕｓꎬＴＳＷＶ)㊁西瓜叶斑驳病毒
(ＷａｔｅｒｍｅｌｏｎｌｅａｆｍｏｔｔｌｅｖｉｒｕｓꎬＷＬＭＶ)㊁西瓜褪绿矮化病毒(ＷａｔｅｒｍｅｌｏｎｃｈｌｏｒｏｔｉｃｓｔｕｎｔｖｉｒｕｓꎬＷｍＣＳＶ)㊁西瓜银斑驳病毒(ＷａｔｅｒｍｅｌｏｎｓｉｌｖｅｒｍｏｔｔｌｅｖｉｒｕｓꎬＷＳＭｏＶ)ꎬ共计３１种病毒ꎬ检测引物由南京擎科生
物工程股份有限公司合成ꎬ具体序列及信息见表１ꎮＰＣＲ反应产物经１％琼脂糖凝胶电泳后进行观察分析ꎮ
表１㊀侵染葫芦科作物的主要病毒检测引物
Ｔａｂｌｅ１㊀ＰｒｉｍｅｒｓｕｓｅｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｖｉｒｕｓｅｓｉｎｆｅｃｔｉｎｇＣｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅｃｒｏｐｓ病毒种类㊀㊀正向引物(５ᶄң３ᶄ)㊀㊀㊀㊀㊀㊀反向引物(５ᶄң３ᶄ)㊀㊀㊀产物长度(ｂｐ)
退火温度(ħ)ＢＧＹＶＶＧＣＣＧＡＴＧＡＡＣＡＧＡＡＡＡＣＣＣＧＣＡＴＧＣＣＡＣＴＴＣＣＧＴＡＡＧＡ４１１５６ＢＰＹＶＧＧＧＡＧＡＴＡＡＴＧＧＴＧＡＴＧＧＣＡＣＴＧＡＴＴＴＡＧＴＧＣＧＧＣＴＴＧ３５９５３ＢＹＭＶＧＧＴＧＡＡＴＧＧＡＣＡＡＴＧＡＴＧＧＡＴＧＣＣＴＣＡＣＴＡＡＣＴＧＣＴＴＡＣＣＣＴＧ５５０５５[１１]
ＣＡＢＹＶＧＡＡＡＴＣＣＧＴＣＴＡＴＧＴＧＣＴＧＡＡＧＧＴＧＡＴＡＣＴＴＣＣＴＧＴＧＧ６８１４９ＣＣＹＶＡＧＡＡＣＡＴＧＡＴＣＡＡＧＴＣＧＴＧＡＧＴＣＧＧＴＡＧＧＡＡＴＧＡＡＣＴＣＡＧＴＧＴＣＧ７９２５３[１１]
ＣＧＭＭＶ
ＣＣＡＧＡＣＴＣＡＡＧＣＧＧＧＡＡＧＡＧＴＴＣＧＡＴＴＴＡＡＧＴＧＡＡＣＧＧＧＡ４４７５７ＣＬＳＶＡＧＣＡＡＣＡＧＧＧＣＧＴＡＡＡＡＡＧＧＧＴＴＣＣＧＧＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＴ７８１５５ＣＭＶ
石灰投加系统
ＴＣＴＣＡＴＧＧＡＴＧＣＴＴＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＴＡＡＧＣＴＧＧＡＴＧＧＡＣＡＡＣＣ７６０５５[１１]ＣＶＹＶ
ＣＣＡＧＧＡＡＧＡＧＡＣＡＡＡＣＡＣＣＡＴＣＡＴＣＧＣＴＣＣＡＣＣＡＴＡＡＧ
９７３５２ＣＹＳＤＶ
ＣＡＡＴＧＡＡＧＡＡＣＧＣＣＡＡＡＣＡＣＡＡＴＴＡＣＣＡＣＡＧＣＣＡＣＣＴＧ
３９７５４ＫＧＭＭＶＣＴＧＴＴＧＧＴＴＴＣＧＧＣＣＣＡＡＧ
ＡＡＣＧＣＣＣＡＣＡＣＣＧＴＣＡＴＴＣ
３３９６１ＬＹＭＶＴＴＡＴＣＡＴＴＴＣＡＡＣＴＣＣＣＧＣ
ＡＴＡＴＴＡＡＡＡＡＣＣＴＣＣＣＣＡＡ４５１５０ＭＡＢＹＶＧＧＣＡＴＧＧＧＡＡＧＧＡＧＧＡＧＡＣＴＧＧＡＴＴＧＧＡＧＧＧＣＧＴＴＡＡＧ
３８５５８ＭＮＳＶＡＣＡＧＡＡＡＡＣＡＧＡＧＣＣＡＣＧＣＡＣＡＣＴＴＡＡＣＣＣＣＴＣＣＡＡＣＧ５５７５５ＭＷＭＶＧＴＣＣＡＡＣＡＣＣＡＧＧＧＣＡＡＣＴＴＴＣＴＣＴＴＣＴＣＣＣＣＣＡＣＣＡＡ
４９５５７ＭＹＳＶＴＧＡＣＧＴＣＡＴＡＡＴＴＴＣＡＣＴＡＧＣＡＧＧＴＣＡＡＣＴＡＣＣＴＴＴＡＣＡＣＡＴＣＴＧＡ５８８５０[１２]ＰａｐＭＶＴＴＴＡＣＡＡＧＡＣＧＣＴＧＧＡＣＧＧ
ＧＧＴＧＧＧＧＧＧＡＧＣＴＡＡＣＡＡＴ３７７５７ＰＲＳＶＧＡＣＣＴＡＣＡＡＧＣＧＴＧＡＣＴＴＴＡＣＣＡＣＣＣＡＴＧＣＣＡＴＧＣＡＴＣＴＴＴＣ７０３５２[１１]
ＳＡＢＹＶＴＧＧＡＡＡＧＡＡＡＴＣＡＡＡＧＡＧＡＡＡＣＡＧＧＡＡＡＡＴＣＡＡＧＧＴＡＡ３４１４７ＳＬＣＶＧＴＧＣＴＴＴＧＡＴＡＧＡＧＧＧＧＡＣＴＴＡＣＡＡＧＡＴＴＧＧＧＣＴＧＡＴＧ４４９５１ＳｑＭＶＡＧＧＣＡＣＡＴＴＴＣＧＣＡＧＴＴＣ
ＣＧＡＴＧＧＴＴＧＣＣＴＴＴＡＴＧＴ
３５４５４[５]ＳｑＶＹＶＴＧＡＧＣＣＴＡＡＣＧＡＡＧＧＡＧＡＧ
ＡＧＧＡＴＴＧＣＴＴＧＧＴＣＡＧＡＡＡ
５９１５２ＴＭＶ
有机光电材料
ＧＡＴＴＣＧＴＴＴＴＡＡＡＴＡＴＧＴＣＴＴＡＣＣＴＴＣＧＡＴＴＴＡＡＧＴＧＧＡＧＧＧＡ
６００４６[１１]ＴＳＷＶ
ＴＣＡＣＴＧＴＡＡＴＧＴＴＣＣＡＴＡＧＣＡＡＡＧＡＧＣＡＡＴＹＧＴＧＴＣＡＡＴＴＴＴＡＴＴＣ８６１５２[１１]ＷＬＭＶＡＴＴＴＴＡＴＧＧＡＡＧＡＣＴＧＧＧＡＡＧＣＡＴＴＧＡＴＧＴＡＴＴＧＧＴＴＧ
６７９４８ＷｍＣＳＶＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＧＧＴＣＡＣＡＡＧ
ＣＡＣＡＣＧＡＡＡＧＡＡＧＣＧＴＴＴＴ５２１５３
ＷＭＶ
ＣＡＴＴＧＡＡＡＡＴＧＧＡＧＴＧＡＣＡＣＴＧＧＣＣＡＡＡＡＣＣＴＧＣＡＴＣ(ＡＧ)ＣＡＣ６４０５１[１１]ＷＳＭｏＶＣＴＧＴＧＣＡＴＧＴＧＡＣＣＡＧＧＴＡＡＡＧＣＣＡＡＴＡＧＡＣＴＧＡＧＡＧＡＡＧＧＡ３６５５２[１２]ＺＧＭＭＶＣＡＡＡＡＡＣＡＡＧＧＡＧＧＴＧＧＡＡＣＧＣＴＧＧＴＡＧＡＧＴＡＡＧＧＣＡＴ
７６１５３ＺＹＦＶ
ＧＣＡＧＣＧＡＣＣＣＡＡＧＣＡＡＡＴＡ
ＧＣＣＡＴＣＡＡＴＣＣＣＧＡＡＣＡＡＧ
７１７５８
ＺＹＭＶ
ＣＣＡＴＡＣＡＴＡＧＣＴＧＡＧＡＣＡＧＣＡＣＣＡＴＡＣＣＴＣＧＧＣＡＴＧＴＡＴＧＧＴＧＣＣ７１７
５５[１１]
ＢＧＹＶＶ：苦瓜黄脉病毒ꎻＢＰＹＶ：甜菜伪黄化病毒ꎻＢＹＭＶ：菜豆黄花叶病毒ꎻＣＡＢＹＶ：南瓜蚜传黄化病毒ꎻＣＣＹＶ：瓜类褪绿黄化病毒ꎻＣＧＭＭＶ：黄瓜绿斑驳花叶病毒ꎻＣＬＳＶ：黄瓜叶斑病毒ꎻＣＭＶ：黄瓜花叶病毒ꎻＣＶＹＶ：黄瓜脉黄病毒ꎻＣＹＳＤＶ：瓜类黄矮化失调病毒ꎻＫＧＭＭＶ：酱瓜绿斑驳花叶病毒ꎻＬＹＭＶ：丝瓜黄花叶病毒ꎻＭＡＢＹＶ：甜瓜蚜传黄化病毒ꎻＭＷＭＶ：摩洛哥西瓜花叶病毒ꎻＭＮＳＶ：甜瓜坏死斑点病毒ꎻＭＹＳＶ：甜瓜黄斑病毒ꎻＰａｐＭＶ：番木瓜花叶病毒ꎻＰＲＳＶ：番木瓜环斑病毒ꎻＳＡＢＹＶ：丝瓜蚜传黄化病毒ꎻＳＬＣＶ：南瓜曲叶病毒ꎻＳｑＭＶ：南瓜花叶病毒ꎻＳｑＶＹＶ：南瓜脉黄病毒ꎻＴＭＶ：烟草花叶病毒ꎻＴＳＷＶ：
番茄斑萎病毒ꎻＷＬＭＶ：西瓜叶斑驳病毒ꎻＷｍＣＳＶ：西瓜褪绿矮化病毒ꎻＷＭＶ：西瓜花叶病毒ꎻＷＳＭｏＶ：西瓜银斑驳病毒ꎻＺＧＭＭＶ：小西葫芦绿斑驳病毒ꎻＺＹＦＶ：小西葫芦黄点病毒ꎻＺＹＭＶ：小西葫芦黄花叶病毒ꎮ
７
６杨㊀柳等：江苏省主要葫芦科作物病毒种类及分布. All Rights Reserved.
１.４㊀ＰＣＲ产物测序
将ＰＣＲ产物送至南京擎科生物工程股份有限公司进行纯化㊁克隆和测序ꎬ测序结果采用美国国家生物技术信息中心(ＮＣＢＩ)的ＢＬＡＳＴ工具(ｈｔｔｐ://
清洗空调现摄像头ｗｗｗ.ｎｃｂｉ.ｎｌｍ.ｎｉｈ.ｇｏｖ/ＢＬＡＳＴ/)进行比对分析ꎮ２㊀结果与分析
２.１㊀江苏葫芦科作物病毒种类
２０１９年６月－２０２０年１１月ꎬ共调查了江苏省内７个地区ꎬ涵盖苏北地区的睢宁㊁丰县ꎬ苏中地区的洪泽㊁东台和姜堰ꎬ还有苏南地区的南京和苏州ꎮ在西瓜㊁黄瓜㊁甜瓜㊁丝瓜㊁南瓜㊁冬瓜㊁瓠瓜共７种作物上采集到具有斑驳花叶㊁皱缩畸形㊁黄化㊁坏死等疑似病毒病症状的叶片样本共计６９
pfa喷涂３份ꎮ其中黄瓜样本２３８份ꎬ西瓜样本１２６份ꎬ南瓜样本１２５份ꎬ丝瓜样本７９份ꎬ甜瓜样本７６份ꎬ冬瓜样本４７份ꎬ瓠瓜样本２份(表２)ꎮ
表２㊀样品采集地点和种类统计
Ｔａｂｌｅ２㊀Ｎｕｍｂｅｒｏｆｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｒｅｇｉｏｎｓａｎｄｖａｒｉｅｔｉｅｓ
地区
样本数(份)
黄瓜西瓜南瓜丝瓜甜瓜冬瓜瓠瓜总计
丰县６４００００００６４睢宁７５１０２６２０５０２７０２８０洪泽００６００００６东台０９２０４００１５姜堰４５８５３０２２７南京４８１０８５０３０７４苏州４７０９５４９１９１７０２２７同物种样本总计２３８１２６１２５７９７６４７２６９３
㊀㊀对采集的样品提取ＲＮＡ后进行反转录ꎬ利用３１种常见的葫芦科病毒引物进行ＰＣＲ扩增检测ꎬ共检出病毒９种ꎬ分别为ＺＹＭＶ㊁ＷＭＶ㊁ＣＡＢＹＶ㊁ＰＲＳＶ㊁ＣＭＶ㊁ＣＣＹＶ㊁ＣＧＭＭ
Ｖ㊁ＳｑＭＶ和ＴＭＶꎮ其中ＺＹＭＶ的检出率明显高于其他种类病毒ꎬ其次是ＷＭＶ(表３)ꎮＴＭＶ的检出率最低ꎬ调查结果中仅有１个样本中检出ＴＭＶꎮ
表３㊀病毒种类及其检出率
Ｔａｂｌｅ３㊀Ｖｉｒｕｓｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒａｔｅｉｎｔｈｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｓａｍｐｌｅｓ病毒种类㊀㊀㊀㊀㊀检出率(％)
ＺＹＭＶ４５.８９
ＷＭＶ２５.８３
ＣＡＢＹＶ１１.５４
ＰＲＳＶ１１.２６
ＣＭＶ６.９３
ＣＣＹＶ６.６４
ＣＧＭＭＶ４.９１
ＳｑＭＶ０.７２
ＴＭＶ０.１４
ＺＹＭＶ㊁ＷＭＶ㊁ＣＡＢＹＶ㊁ＰＲＳＶ㊁ＣＭＶ㊁ＣＣＹＶ㊁ＣＧＭＭＶ㊁ＳｑＭＶ㊁ＴＭＶ见表１注ꎮ２.２㊀江苏各地区葫芦科作物病毒种类及分布在采集的样品中ꎬ睢宁地区检出８种病毒ꎬ种类最多ꎬ分别为ＺＹＭＶ㊁ＷＭＶ㊁ＣＡＢＹＶ㊁ＰＲＳＶ㊁ＣＣＹＶ㊁
ＣＧＭＭＶ㊁ＣＭＶ㊁ＴＭＶꎬ未检出ＳｑＭＶꎮ丰县和苏州均检出７种病毒ꎬ其中丰县检出了较高频率的ＣＧＭ￣ＭＶꎬ而苏州未检出ＣＧＭＭＶꎬ检出４例ＳｑＭＶꎮ此外ꎬ南京地区检出病毒６种ꎬ洪泽检出４种ꎬ东台检出３种ꎬ姜堰检出５种(图１)ꎮ在苏北睢宁和苏南的苏州采集的样品较多ꎬ检出的病毒种类也较多ꎮ洪泽㊁东台和姜堰检出的病毒种类相对较少ꎬ这可能与这２个地区的采样量较少有关ꎮ在各个采样地区均有检出ＺＹＭＶ和ＰＲＳＶꎬ其中ＺＹＭＶ也是在各地区检出率最高的病毒种类ꎮＷＭＶ和ＣＡＢＹＶ分布也较为广泛ꎬ除洪泽和东台外的其他地区均有检出ꎮＴＭＶ仅在睢宁黄瓜样本上检出１例ꎮ
２.３㊀各寄主作物上病毒种类及分布
在所有采集的样品中ꎬ从黄瓜样品中检出了８种病毒ꎬ分别为ＺＹＭＶ㊁ＷＭＶ㊁ＣＡＢＹＶ㊁ＰＲＳ
Ｖ㊁ＣＣＹＶ㊁ＣＧＭＭＶ㊁ＣＭＶ和ＴＭＶꎬ检出率最高的仍然是ＺＹＭＶꎬ为４２ ８６％ꎬ其次是ＷＭＶꎬ检出率为
８６江苏农业学报㊀２０２２年第３８卷第１期. All Rights Reserved.
２２ ６９％ꎬＴＭＶ感染的仅有１例ꎬ未检出ＳｑＭＶ(图２)ꎮ南瓜和甜瓜的样品数量远远少于黄瓜ꎬ但检出的病毒种类数仅次于黄瓜上检出的病毒种类数ꎬ均为７种病毒ꎮ南瓜上未检出ＴＭＶ和ＣＣＹＶꎬ但检出了ＳｑＭＶꎬ南瓜是所有采集样品中唯一检出ＳｑＭＶ的寄主物种ꎮ甜瓜上的病毒种类与黄瓜相比仅有ＴＭＶ未检出ꎬ但甜瓜上ＺＹＭＶ的感染率高达８８ １６％ꎬＷＭＶ的感染率也非常高ꎬ达６１ ８４％ꎮ检测结果显示ꎬ所有采集样品中除瓠瓜外ꎬ在田间均有ＺＹＭＶ感染且感染率非常高ꎬ瓠瓜由于样品量太少ꎬ暂未检出ＺＹＭＶꎬ但瓠瓜也是ＺＹＭＶ的自然寄主之一
ꎮ
ＺＹＭＶ㊁ＷＭＶ㊁ＣＡＢＹＶ㊁ＰＲＳＶ㊁ＣＭＶ㊁ＣＣＹＶ㊁ＣＧＭＭＶ㊁ＳｑＭＶ㊁ＴＭＶ见表１注ꎮ图１㊀各地区检出病毒种类及检出率
Ｆｉｇ.１㊀Ｖｉｒｕｓｔｙｐｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒａｔｅｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｒｅｇｉｏｎｓ
图２㊀不同寄主中检出病毒种类及检出率
Ｆｉｇ.２㊀Ｖｉｒｕｓｔｙｐｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒａｔｅｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｈｏｓｔｓ
２.４㊀复合侵染
在对江苏各地的各种葫芦科作物样本进行检测的过程中发现ꎬ多种病毒共同侵染同一植株的现象普遍存在ꎬ其中２种和３种病毒复合侵染的情况较多ꎬ最多可达到４种病毒复合侵染ꎮ复合侵染在所调查的江苏各个地区均有发生ꎬ且在黄瓜㊁甜瓜㊁西瓜和南瓜上发生频率较高ꎮ检测结果(表４)显示ꎬ
ＺＹＭＶ＋ＷＭＶ的复合侵染频率最高ꎬ且主要发生在西瓜㊁甜瓜㊁黄瓜和南瓜上ꎮ
３㊀讨论
近年来ꎬ随着国内蔬菜种植面积的扩大和种植模式的变化ꎬ加之气候影响ꎬ蔬菜上病毒病的发生越来越严重ꎬ对生产造成了严重威胁[１３￣１６]ꎮ虽然各地陆续已有对特定作物或特定病毒的发生情况的部分报道ꎬ但至今仍缺乏对葫芦科作物病毒进行系统全面的调查鉴定ꎮ江苏省内葫芦科作物种植面积广泛
ꎬ本研究对省内７个地区的７种葫芦科作物上采集的６９３份样品进行了检测ꎬ希望能够通过较大面积的普查对江苏省内主要葫芦科作物病毒病的发生与分布开展分析ꎬ从而为江苏省葫芦科作物病毒病的预防及综合防控提供理论依据ꎮ
本研究共检出９种病毒ꎬ其中ＺＹＭＶ㊁ＷＭＶ和ＰＲＳＶ的检出频率都很高ꎮ这３种病毒均为马铃薯Ｙ病毒属的成员ꎬ可感染绝大部分的葫芦科作物ꎬ在中国甚至世界多个地区均有报道[１７￣１９]ꎮＺＹＭＶ㊁
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杨㊀柳等：江苏省主要葫芦科作物病毒种类及分布. All Rights Reserved.
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