荣婷婷;饶威;陈惠娟;王颖;张勇;沈立松;葛海良
结经机
【摘 要】Objective To investigate the expression of tumor-associated antigen OVA66 in human tumor tissues, and explore its clinical values. Methods Immunohistochemistry was employed to detect the expression of OVA66 protein in several types of tumor tissue chips and samples ( gastric cancer, intestinal cancer, lung cancer, breast cancer, ovarian cancer, bladder cancer and renal cancer) and corresponding non-tumor tissues. The relationship between the expression of OVA66 protein and character of tumor tissues, tumor metastasis and clinicopathological characteristics was analysed. Results There was high expression of OVA66 protein in the tumor tissues of stomach, intestine, ovary, bladder and kidney, which was significantly higher than that in non-tumor tissues. While the expression of OVA66 was relatively lower in the tumor tissues of lung and breast. The expression of OVA66 in bladder cancer tissues was related to the pathological grading of bladder cancer. The expression of OVA66 in intestinal cancer and bladder cancer with lymph node metastasis was slightly hig
her than that in intestinal cancer and bladder cancer without lymph node metastasis, while there was no significant difference between them. Conclusion There is high expression of OVA66 protein in many tumor tissues. The expression of OVA66 protein in bladder cancer tissues is related to the pathological grading of bladder cancer. OVA66 may serve as a novel tumor marker in the diagnosis of tumors.%目的 分析肿瘤相关抗原OVA66在人肿瘤组织中的表达特征,探讨其临床应用价值.方法 采用免疫组织化学法检测多种组织肿瘤芯片和肿瘤组织标本(包括胃癌、肠癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌和卵巢癌)及其相应的非肿瘤组织中OVA66蛋白的表达,分析其表达与组织的良恶性以及肿瘤转移和临床病理特征的关系.结果 OVA66蛋白在胃、肠、卵巢、膀胱和肾的肿瘤组织中的表达显著高于正常组织,在肺和乳腺肿瘤组织中表达较弱.膀胱癌OVA66的表达与膀胱癌的病理分级呈现相关性,肠癌和膀胱癌的淋巴转移组表达阳性率略高于未转移组,但差异无统计学意义.结论 OVA66蛋白在多数肿瘤组织中均呈高表达,在膀胱癌中与肿瘤病理分级相关,提示OVA66有可能成为新的肿瘤标志物应用于多种肿瘤的辅助诊断. 【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》
助板
【年(卷),期】2011(031)008
【总页数】5页(P1129-1133)
【关键词】OVA66;组织芯片;免疫组织化学
【作 者】荣婷婷;饶威;陈惠娟;王颖;张勇;沈立松;葛海良
【作者单位】上海交通大学基础医学院免疫学教研室,上海 200025;上海交通大学基础医学院免疫学教研室,上海 200025;上海交通大学基础医学院免疫学教研室,上海 200025;上海交通大学基础医学院免疫学教研室,上海 200025;上海交通大学基础医学院免疫学教研室,上海 200025;上海交通大学医学院附属新华医院检验科,上海 200092;上海交通大学基础医学院免疫学教研室,上海 200025
【正文语种】中 文
【中图分类】R730.21
寻新的肿瘤抗原，分析其与肿瘤发生、发展的相互关系和临床意义仍是当前肿瘤免疫学研究的重要领域。OVA66是本实验室应用重组cDNA表达文库血清学分析(serological analy
sis of recombinant cDNA expression library，SEREX)技术筛选人卵巢癌cDNA文库得到的一种新的肿瘤相关抗原，该基因位于人染体8q23.3，编码583个氨基酸，相对分子质量为 66000，等电点为 4.80［1，2］。经血清学检测，肿瘤患者体内的OVA66抗体水平显著高于正常人［3］，并发现OVA66基因高表达可促进肿瘤细胞的增殖，有利于细胞的侵袭和转移［4］。本研究利用制备的OVA66抗原和单克隆抗体，采用免疫组织化学法分析OVA66在多种肿瘤组织中的表达与肿瘤病理特征的关系，探讨OVA66在肿瘤辅助诊断中的应用价值，为新的肿瘤靶点的研究奠定基础。 1 材料与方法
1.1 组织芯片
上海芯超生物科技有限公司肾、肠和膀胱3种肿瘤组织芯片(均含31例不同患者肿瘤组织及其癌旁组织)，呈10×6排列，芯片于4℃避光保存。
1.2 病例标本
选取上海交通大学医学院附属新华医院石蜡包埋肿瘤组织标本，包括肾癌17例和正常组织
11例、肠癌14例和正常组织9例、卵巢癌15例和正常组织8例、胃癌10例和正常组织7例、膀胱癌11例和正常组织13例、肺癌10例和正常组织7例以及乳腺癌10例和正常组织7例。
1.3 主要试剂
北京晶美公司免疫组织化学试剂盒MR-SPM060。
1.4 OVA66融合蛋白和单克隆抗体的制备
构建重组表达载体pET32b-OVA66，转化入感受态BL21(DE3)细胞中，筛选获得阳性克隆，以IPTG诱导剂诱导表达和经Ni-TED亲和层析纯化OVA66融合蛋白，经SDS-PAGE和Western blotting鉴定证实。以OVA66融合蛋白作为抗原，采用经典的小鼠杂交瘤细胞株制备方法，ELISA筛选分泌目的抗体的阳性杂交瘤细胞株5F4和4G9。两株细胞分泌的抗体亚类均为IgG1，轻链为κ型，亲和力常数Ka分别为2.96 ×1010L/mol和 0.4 ×1010L/mol，表位分析结果显示两者针对不同的抗原表位;两株抗体均可采用细胞免疫荧光、免疫组织化学和流式细胞术检测OVA66 蛋白的表达［5］。
1.5 免疫组织化学染
1.5.1 免疫组织化学染 组织芯片和石蜡切片脱腊、水化、蒸馏水清洗，PBS浸泡2 min;微波修复法进行抗原修复，3%H2O2阻断过氧化物酶，10%正常小牛血清封闭，室温孵育30 min;倾去血清，勿洗，滴加抗OVA66抗体(以10%正常小牛血清1∶100稀释)，阴性对照以PBS代替一抗，4℃孵育过夜;PBS冲洗，5次×10 min;滴加生物素标记羊抗鼠IgG工作液，37℃孵育30 min;PBS冲洗，5次×10 min;滴加辣根过氧化物酶标记链霉卵白素工作液，37℃孵育30 min;PBS冲洗，3次×5 min;DAB显剂显;自来水充分冲洗，苏木精复染，1%盐酸乙醇分化，封片，镜下观察，阳性结果为组织中出现棕颗粒，采用以下评分方法对每张切片蛋白表达强度测评。
1.5.2 结果判断 每个组织单位以高倍镜(40×)选取5个视野，综合阳性细胞计数评分和阳性反应强度评分，半定量分析OVA66蛋白表达水平。阳性细胞计数评分标准:0分，无阳性细胞;1分，0＜阳性细胞≤25%;2分，25% ＜阳性细胞≤50%;3分，阳性细胞＞50%。阳性反应强度评分标准:0分，无着细胞，同阴性对照，背景一致;1分，淡黄，染弱，但深于阴性对照及背景;2分，棕黄，染清晰，与阳性对照相近;3分，棕褐，染强。每张切片蛋白表达强度总评分=阳性细胞计数评分+阳性反应强度评分。积分0分:阴性(－);1～2分:弱阳性(+);3～4分:中等阳性(++);5～6分:强阳性(+++)。玻璃钢酸洗槽
1.6 统计学处理
采用SPSS 13.0软件，对所得数据进行非参数检验分析，P＜0.05为差异有统计学意义。造纸网
2 结果
2.1 OVA66蛋白在肿瘤组织中的表达
热流道温控器
对7种组织切片进行免疫组织化学染，发现OVA66在多种肿瘤组织中表达阳性，呈棕黄颗粒，主要位于胞质或胞核中(图1)。不同组织的肿瘤中OVA66表达程度各不相同，肾、膀胱、卵巢、肠和胃肿瘤中OVA66表达呈较强表达，在肺和乳房组织中呈弱表达。镜下结合切片的阳性反应细胞数和阳性反应强度对免疫组织化学检测结果进行评分，综合组织切片和组织芯片染结果。表1为OVA66在7种组织的肿瘤及非肿瘤组织中的表达情况，显示肾、膀胱、卵巢、肠和胃组织中OVA66的表达强弱与组织的恶性与否均相关，OVA66在这些癌组织中的表达均显著高于相应癌旁正常组织。
2.2 OVA66蛋白表达与肿瘤临床病理特征的关系
鼠标笔2.2.1 OVA66蛋白表达与肾癌病理分型的关系表2显示OVA66蛋白在肾透明细胞癌、乳头状肾癌和嫌肾癌中均呈高表达(P＞0.05)。
2.2.2 OVA66蛋白表达与结肠癌淋巴转移的关系 表3显示在结肠癌和膀胱癌中有淋巴转移组的阳性率略高于无淋巴转移组(P＞0.05)。
2.2.3 OVA66蛋白表达与膀胱癌淋巴转移及病理分期之间的关系 参考UICC四级分期法将膀胱癌分为四级。Ⅰ级:细胞分化良好，肿瘤细胞侵犯皮下和结缔组织;Ⅱ级:细胞分化出现紊乱，肿瘤侵至浅肌层;Ⅲ级:细胞分化差，肿瘤侵至深肌层;Ⅳ级:细胞排列紊乱，肿瘤侵入膀胱周围及膀胱外组织。将Ⅰ级与Ⅱ级合并、Ⅲ级与Ⅳ级合并。合并后的病理分级中OVA66蛋白阳性表达率及表达强度差异有统计学意义(P＜0.05)(表4)，提示 OVA66蛋白表达量与膀胱癌病理分级有关，肿瘤的恶性程度越高，OVA66蛋白在细胞的表达量越多。
图1 免疫组织化学观察7种肿瘤组织中OVA66蛋白表达 ×200Fig 1 Expression of OVA66 protein in 7 types of tumor tissues detected by immunohistochemistry ×200
表1 不同类型肿瘤与非肿瘤组织中OVA66表达分析Tab 1 Analysis of expression of OVA66
protein in various tumor and non-tumor tissues①P＜0.05与癌旁组织比较。组织 表达情况/n－ + ++ +++肾癌旁组织(N=42) 16 22 4 0肾癌组织(N=48) 5① 20① 16① 7①肠癌旁组织(N=40) 26 13 1 0肠癌组织(N=45) 8① 19① 14① 4①卵巢癌旁组织(N=8) 7 1 0 0卵巢癌组织(N=15) 6① 4① 3① 2①胃癌旁组织(N=7) 7 0 0 0胃癌组织(N=10) 2① 1① 5① 2①膀胱癌旁组织(N=44) 21 21 2 0膀胱癌组织(N=42) 8① 5① 18① 11①肺癌旁组织(N=6) 6 0 0 0肺癌组织(N=6) 6 0 0 0乳房癌旁组织(N=6) 6 0 0 0乳癌组织(N=6)6 0 0 0
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议