牙疳药Twist1、VE-cadherin和血管生成拟态在子宫内膜样腺癌侵袭转移中的作用及意义 钼精粉冯振中;武世伍;俞岚;蔡兆根;李楠;吕秀红;陈嘉薇
【摘 要】目的 探讨子宫内膜样腺癌中Twist1、VE-cadherin和血管生成拟态(VM)的表达以及与肿瘤侵袭转移的关系.方法 采用免疫组化方法,结合组织芯片技术,检测124例子宫内膜样腺癌、28例不典型增生内膜、35例正常内膜组织中Twist1、VE-cadherin和VM的表达水平,分析三者与临床病理因素的关系及相关性.结果 子宫内膜样腺癌组织中Twist1、VE-cadherin和VM的表达率分别为56.5％、48.4％、16.9％,与正常内膜和不典型增生内膜相比,差异均显著(P＜0.01).Twist1表达与病理分级、肌层浸润深度和淋巴结转移有关(P＜0.05).VE-cadherin和VM与肿瘤肌层浸润和淋巴结转移显著相关(P＜0.01).子宫内膜样腺癌中VE-cadherin表达分别与Twist1和VM呈正相关趋势(r=0.232,P=0.010;r=0.251,P=0.005).结论 Twist1、VE-cadherin和VM参与子宫内膜样腺癌的发生、发展过程,三者联合检测可能对肿瘤的进展及预后判断有重要意义. 【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》
【年(卷),期】2014(023)005
【总页数】6页(P439-444)
【关键词】子宫内膜癌;Twist1;血管生成拟态;血管上皮钙黏附素
【作 者】冯振中;武世伍;俞岚;蔡兆根;李楠;吕秀红;陈嘉薇
【作者单位】蚌埠医学院第一附属医院病理科,蚌埠医学院病理学教研室,蚌埠233030;蚌埠医学院第一附属医院病理科,蚌埠医学院病理学教研室,蚌埠233030;蚌埠医学院第一附属医院病理科,蚌埠医学院病理学教研室,蚌埠233030;蚌埠医学院第一附属医院病理科,蚌埠医学院病理学教研室,蚌埠233030;蚌埠医学院第一附属医院病理科,蚌埠医学院病理学教研室,蚌埠233030;上海交通大学附属第一人民医院病理科,上海200080;上海交通大学附属第一人民医院病理科,上海200080焦磷酸盐
蝇蛆蛋白【正文语种】中 文
【中图分类】R737.33
子宫内膜样腺癌是最常见的女性生殖道恶性肿瘤之一，侵袭和转移是肿瘤失败、临床
预后不良的重要生物学原因［1］，探讨肿瘤侵袭转移的相关分子机制，能够为临床子宫内膜癌的诊疗提供有价值的帮助。
Twist1基因是一种在胚胎发育中起关键调控作用的转录因子，同时具有介导肿瘤细胞上皮－间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）的能力，在多种人类恶性肿瘤中均有高表达［2，3］。血管生成拟态（vasculogenic mimicry，VM）是新近认识的肿瘤微循环模式，即某些高侵袭性肿瘤细胞通过自身变形和细胞外基质重塑，直接形成微循环管道，管腔无内皮细胞衬覆，并可与宿主微血管相通［4］。随后的研究发现，VM与恶性肿瘤的侵袭转移和预后不良等恶性行为密切相关［5］。血管上皮钙粘附素（VE－cadherin）是细胞黏附分子家族中的重要成员，是血管发生及血管内环境稳定过程的重要因素，并直接参与了肿瘤VM的形成和调控［6，7］。
那么，在子宫内膜样腺癌中是否存在VM现象？Twist1、VE－cadherin的过度表达是否和 VM的发生有关？目前关于此类的研究未见报道。本研究采用免疫组化方法，结合组织芯片技术，检测124例子宫内膜样腺癌、28例不典型内膜增生和35例正常内膜组织中Twist1、VE－cadherin和VM的表达，探讨这些指标和子宫内膜样腺癌侵袭转移的关系，为临床肿瘤预防和靶向提供新的思路和实验基础。
材料和方法
1.研究对象
子宫内膜样腺癌124例，来自上海交通大学附属上海市第一人民医院病理科，2005年1月至2009年9月手术切除并经病理诊断证实标本，患者术前均未接受放疗、化疗，具有完整临床资料。年龄27－81岁，平均年龄57岁。根据2000年FIGO标准，临床分期为101例I－II期，23例III－IV期。根据2003年WHO标准，病理分级为高分化57例，中分化41例，低分化26例。肌层浸润＞50%者40例，≤50%者84例。有淋巴结转者31例，无转移者93例。子宫内膜不典型增生28例（单纯性不典型增生3例，复杂性不典型增生25例）；正常子宫内膜35例（增生期16例，分泌期19例），分别取自妇科活检和子宫平滑肌瘤的内膜组织。
2.方法和试剂
兔抗人多克隆Twist1抗体（工作浓度1∶200，Santa Cruz公司），鼠抗人单克隆 VE－cadherin抗体（工作浓度1∶120，Abcam公司），鼠抗人单克隆CD34抗体（即用型，克隆号 QBEnd／10）、Ultra－Sensitive试剂盒和DAB显液购自福州迈新生物技术有限公司。
过碘酸Schiff（periodicacid－Schiff，PAS）染液为蚌埠医学院第一附属医院病理科配制。
3.构建组织芯片
选择所需病例存档蜡块，根据HE切片仔细进行形态学观察，确定具有代表性的病变部位并标记，由上海芯超生物有限公司技术支持。
4.免疫组织化学染
采用SP两步免疫组织化学染法，操作步骤按试剂盒说明书进行，采用已知阳性片作为对照，以PBS液代替一抗作为空白对照。Twist1和VE－cadherin蛋白检测采用组织芯片结合免疫组化方法，VM检测为便于观察更多病变组织，采用常规切片结合免疫组化方法。
5.CD34和PAS双重染检测VM［8］
CD34免疫组化染，DAB显后，自来水冲洗1min终止显反应，将切片置于0.5%高碘酸溶液中氧化5－8min，自来水冲洗2min，再用蒸馏水洗1次，于暗处置于Schiff液中染1
0－20min，然后用0.5%偏重亚硫酸钠液滴洗2次，每次1min，自来水冲洗2min；此后依次苏木素浅染细胞核、盐酸酒精分化、返蓝、脱水透明以及中性树胶封片。
6.结果判定
采用双盲法阅片并判定结果，若肿瘤染不均匀，则取其主要部分进行计数。Twist1蛋白主要定位于细胞核，可伴有胞质着；VE－cadherin阳性表达于细胞质，呈弥漫性棕颗粒，也可见于血管内皮细胞连接处，呈棕褐细线状。判断标准以子宫内膜腺上皮细胞内出现定位明确、染明显的样本为阳性，判定标准［9］：①阳性细胞率：无着为0，1－10%为1分，11－50%为2分，51－80%为3分，＞81%为4分；②染强度：无为0分，浅黄为1分，棕黄为2分，棕褐为3分。为方便数据统计，两者计分相加，＜2分为阴性，≥2分为阳性表达。
7.统计学分析
采用SPSS 16.0统计软件。计数资料率的比较采用卡方检验或Fisher精确检验，相关关系采用Spearman等级相关分析，检验水准取双侧α＝0.05。
结 果
1.Twist1、VE－cadherin和VM 在不同内膜组织中的表达
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在部分子宫内膜样腺癌中可检测到VM结构（16.9%，21／124），而正常子宫内膜及不典型增生内膜中均未观察到VM（P＜0.01）。苏木精－伊红（HE）染切片中可见由肿瘤细胞围绕形成的管腔样结构，腔内可见红细胞，通过CD34和PAS套染，表现为PAS阳性染但CD34阴性的管腔样结构（图1），其周围未见坏死的肿瘤细胞。常规血管则表现为CD34及PAS染均为阳性的管腔样结构。
Twist1、VE－cadherin在子宫内膜样腺癌中的表达率分别为56.5% （70／124）、48.4%（60／124），与不典型增生和正常内膜组织相比，有显著差别（P＜0.01）（图2，3）（表1）。
合成氨催化剂表1 Twist1、VE－cadherin和VM在不同内膜组织中的表达Table 1 Expression of Twist1，VE－cadherin and VM in distinct tissue types①与正常及不典型内膜组织相比 （Compared with normal and atypical tissue）；P＜0.01Tissue type n Twist1（－） （＋）
P① VE－cadherin（－） （＋） P① VM（－） （＋） P①Normal 35 34 1 33 2 35 0 Atypical tissue 28 17 11 22 6 28 0 Carcinoma 124 54 70 ＜0.01 64 60 ＜0.01 103 21 ＜0.01
2.子宫内膜样腺癌中Twist1、VE－cadherin和VM的表达与临床病理因素的关系
子宫内膜样腺癌中Twist1表达与病理分级、肿瘤浸润深度和淋巴结转移明显相关（P＜0.05）（表2），但与患者年龄、临床分期等指标无明显关系。VE－cadherin蛋白与肌层浸润和淋巴结转移显著相关（P＜0.01）（表2）。肿瘤细胞分化越低，VM 形成越多，差异显著（P＜0.01），FIGO临床分期I＋II期 VM 阳性率为12.9% （13／101），III＋IV 期VM 表达率为34.8% （8／23），有明显差异（P＜0.05）；VM组的患者更易发生肌层浸润及淋巴结转移（P＜0.01）（表2）。
表2 Twist1、VE－cadherin和VM表达与子宫内膜样腺癌临床病理因素的关系Table 2 The association of Twist1，VE－cadherin and VM with clinicopathological factors in EECFactors n Twist1（－） （＋） P① VE－cadherin（－） （＋） P① VM（－） （＋） P①Age＜50 29 14 15 16 13 26 3≥50 95 40 55 0.557 48 47 0.661 77 18 0.425 His
tological grade G1 57 32 25 30 27 56 1 G2 41 15 26 19 22 36 5 G3 26 7 19 0.025 15 11 0.694 11 15 ＜0.01 FIGO stage I＋II 101 47 54 54 47 88 13 III＋IV 23 7 16 0.160 10 13 0.387 15 8 0.026 Myometrial invasion≤1／2 84 42 42 51 33 77 7＞1／2 40 12 28 0.036 13 27 0.003 26 14 ＜0.01 LN metastasis Absent 93 47 46 55 38 90 3 Present 31 7 24 0.007 9 22 0.004 13 18 ＜0.01
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