收稿日期：2010－12－17
作者简介：蒋伟冬（1981－），男，上海人，医师，硕士，研究方向：肛
肠疾病。
胞损伤增多，间接提高放射敏感性，最终表现为CNE －2细
胞凋亡率上升。
总之，本研究证实PP Ⅰ能明显抑制鼻咽癌CNE －2细胞增殖，具有诱导细胞G2/M 期阻滞、诱导细胞凋亡的作用，离体细胞实验显示其较强的放射增敏作用，可能是一种有潜在应用价值的放射增敏剂。参考文献
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中
华中医药
学刊
影响的实验研究
蒋伟冬，陆金根，曹永清，梁宏涛
（上海中医药大学附属龙华医院肛肠科，上海200032）
摘要：目的：观察散瘀止痛方熏洗对于角叉菜致炎后大鼠足趾肿胀度的影响及对致炎足局部组织前列腺素 E2（PGE 2）含量及环氧合酶－2（COX －2）表达的影响。方法：24只SD 雄性大鼠，用角叉菜造模后随机分为四组：生理盐水组、散瘀止痛方Ⅰ组、散瘀止痛方Ⅱ组、塞来昔布组。将造模后4组大鼠，同时予灌胃及浸泡。观察致炎后30min ，1h ，2h ，3h 的足趾肿胀度。致炎3h 后，处死大鼠，采集标
本。用ELISA 法测定足趾局部组织的PGE 2含量，用RT －PCR 法测定足趾局部组织的COX －2mRNA 的表达。结果：与生理盐水相比，散瘀止痛方能显著抑制大鼠足趾肿胀度，能降低前列腺素E2（PGE 2）含量（P ＜0．01）及抑制环氧合酶－2（COX －2）mRNA 的表达（P ＜0．01）。结论：散瘀止痛方熏洗抗炎止痛机理可能与降低前列腺素E2含量及抑制COX －2的表达有关。
关键词：散瘀止痛方；熏洗；水肿；疼痛；前列腺素E2；环氧合酶－2
中图分类号：R285．5
文献标识码：A
文章编号：1673－7717（2011）06－1390－03
The Empirical Study on Sanyuzhitong Fumigation and Washing
Decoction for the Effect of the Contents of PGE 2and the Expression of COX －2of
the Inflammatory Rat Paw
JIANG Wei-dong ，LU Jin-gen ，CAO Yong-qing ，LIANG Hong-tao
（Longhua Hospital Shanghai University of TCM ，Shanghai 200032，China ）
Abstract ：Objective ：To observe the effect of the carrageenan －induced rat paw swelling and the contents of PGE 2
and the expression of COX －2by Fumigation and Washing with Sanyuzhitong Decoction．Methods ：After building the ani-0
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中华中医药
学
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mal model of "inflammatory edema and pain"，which was induced by carragheen ，24SD rats were randomly divided into 4group （each group had 6rats ），which were normal saline group ，Sanyuzhitong Decoction Ⅰgroup Sanyuzhitong Decoction Ⅱgroup and Celecoxib group．Rats in each group were administered by soaking and gavage．All the rats were soaked for 30minute．Then the
thickness of the inflamed paw was measured respectively at 30minute ，1hour ，2hour and 3hour ，and the degree of swelling was calculated．After that ，
the rats were killed and the specimens were collected．The contents of PGE 2were determined by ELISA．The expression of COX －2was determined by RT －PCR．Results ：The degree of swelling in Sanyuzhitong Decoction Ⅰgroup ，Sanyuzhitong Decoction Ⅱgroup and Celecoxib group were obviously lower than that in normal saline group．The contents of PGE 2and the expression of COX －2in Sanyuzhitong Decoction Ⅰgroup ，
Sanyuzhi-tong Decoction Ⅱgroup and Celecoxib group were obviously lower than that in normal saline group．Conclusion ：The mechanism of anti －inflammation and analgesic effect with Sanyuzhitong Decoction may be by reducing the local contents of PGE 2and inhibiting the expression of COX －2．
Key words ：Sanyuzhitong Decoction ；fumigation and Washing ；edema ；pain ；PGE 2；COX －2
水肿、疼痛是混合痔术后常见并发症。散瘀止痛方以活血化瘀、消肿止痛为治则，熏洗混合痔术后水肿、疼痛。
现代研究表明，混合痔术后出现水肿和疼痛，与局部炎性介症的大量表达密切相关。其中主要炎性介质有前列腺素等，而前列腺素E2（PGE 2）的致痛作用强，还能提高血管通透性，促进白细胞趋化，引起水肿。环氧合酶－2（COX －2）是机体催化花生四烯酸转变为前列腺素的关键限速酶，抑制COX －2，减少前列腺素E2，有消肿止痛的作用。为探讨其抗炎止痛作用及可能机制，拟以大鼠炎症足局部组织PGE 2含量、COX －2表达为研究目的而开展此项研究。1材料和方法1．1
实验材料和仪器
SD 雄性大鼠，清洁级，由中国科学院上海斯莱克实验动物有限责任公司提供（实验动物质
量合格证号0052756）。散瘀止痛方：丹参15g ，徐长卿30g ，莪术15g ，芒硝9g 。以上药物由龙华医院中药房提供，采用高压煎制而成，浓煎，真空包装。生理盐水：华裕（无锡）制
保护膜印刷药有限公司，
批准文号：国药准字H19983076。角叉菜：SIGMA 公司，批号：45F －0427。塞来昔布（西乐葆）胶囊：
探针天线辉瑞制药有限公司，批号：BK080777。PGE 2ELISA 试剂盒（美国ADL 公司）。电泳仪（上海医用分析仪器厂）。电泳槽（上海实生细胞公司）。生物电泳图像分析系统（上海复日科技有限公司）。
1．2
分组与造模取SD 雄性大鼠24只，随机分成4组：生理盐水组，散瘀止痛方Ⅰ组，散瘀止痛方Ⅱ组，塞来昔布组。制作大鼠足趾炎性肿痛模型，于大鼠右后肢足趾皮下注射1%角叉菜0．1mL ，致炎3h 。1．3
给药与标本采集生理盐水组：灌生理盐水20．83mL ·kg －1，致炎足置于生理盐水中浸泡30min 。散瘀止痛
方Ⅰ组：灌生理盐水20．83mL ·kg －1
，
致炎足置于散瘀止痛方Ⅰ中浸泡30min 。散瘀止痛方Ⅱ组：灌生理盐水20．83mL ·kg －1，致炎足置于散瘀止痛方Ⅱ中浸泡30min 。塞来昔布组：灌塞来昔布20．83mL ·kg －1，致炎足置于生理盐
水中浸泡30min 。致炎3h 后，
处死大鼠，于踝关节上0．5cm 处剪下各组致炎足，称重。剥皮后，剪取50mg 左右肌肉组织，迅速置液氮中冷冻。之后将致炎足置于5mL 生理盐水中浸泡30min 。将浸泡液离心，取上清液。
1．4足趾肿胀度的测定游标卡尺测量致炎前大鼠足趾
厚度。再致炎30min 、1h 、2h 、3h 后分别测量大鼠足趾厚度。计算致炎30min 、
1h 、2h 、3h 后各时段足趾肿胀度。足趾肿胀度=致炎后足趾厚度－致炎前足趾厚度。
1．5前列腺素E2（PGE 2）含量的测定严格按试剂盒说明进行。
1．6环氧合酶－2（COX －2）mRNA 表达的测定
严格按
试剂盒说明书（GIBCO BRC 公司Trizol 试剂盒）提取RNA 。再用分光光度计检测RNA 的浓度。再予反转录。引物序
列（生物技术公司）：COX －2的上下游引物序列分别
为5’－AATGAGTACCGCAAACGC －3’
，5’－TAGTCT-GGAGTGGGAGGC
－3’，产物长度为417bp ，退火温度
53ħBeta actin 的上下游引物序列分别为5’－CCGTA-AAGACCTCTATGCCAACA －3’
，3’－TCGTCCTCATGC-TACTCAGGC －5’，产物长度为230bp ，退火温度55ħ。PCR 扩增反应条件：94ħ3min ；94ħ40s ，55ħ1min ，72ħ1min ，
30个循环；72ħ5min →4ħ保存。取PCR 产物于1.6%的琼脂糖凝胶中，电泳1h 。凝胶分析系统观察拍照、分析。对图象用FR －2000型图象分析系统进行光密度扫
描，
自动测算其浓度。1．7统计方法计量资料用均数ʃ标准差（珋x
ʃs ）表示，采用多样本均数间的单因素方差分析，方差齐者用LSD
法，方差不齐用Dunnett ’s T3法，P ＜0．05为显著差异，采用SPSS 12．0统计软件包。
2结果
2．1对大鼠足趾肿胀度的影响分别于致炎后30min 、
1h 、2h 、3h 测定，观察散瘀止痛方Ⅰ、散瘀止痛方Ⅱ、塞来昔布的抗炎作用。如表1所示：散瘀止痛
方Ⅰ组、散瘀止痛方Ⅱ组、塞来昔布组大鼠足趾肿胀度均明显低于生理盐水组。
表1各时期大鼠足趾肿胀度（cm ，
珋x ʃs ）组别n 致炎后30min 致炎后1h 致炎后2h 致炎后3h 生理盐水组60．18ʃ0．05不锈钢精密冲压
0．22ʃ0．04
0．17ʃ0．03
0．20ʃ0．03散瘀止痛方Ⅰ组60．12ʃ0．03*
0．15ʃ0．03＊＊
0．13ʃ0．03
*
0．14ʃ0．03*散瘀止痛方Ⅱ组60．11ʃ0．04＊＊0．15ʃ0．05＊＊0．12ʃ0．05*0．13ʃ0．06＊＊
塞来昔布组
6
0．10ʃ0．02＊＊0．17ʃ0．03*
0．11ʃ0．02＊＊0．14ʃ0．02*
注：与生理盐水组比较，*P ＜0．05；与生理盐水组比较，＊＊P ＜0．01。
2．2
玻璃退火炉前列腺素E2（PGE 2）含量如表2所示，散瘀止痛方
Ⅰ组、散瘀止痛方Ⅱ组、塞来昔布组PGE 2含量明显低于生理盐水组（P ＜0．01）。散瘀止痛方Ⅰ组、Ⅱ组、塞来昔布
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华中医药
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感应式小便器
组之间无统计学差异（P ＞0．05）。说明散瘀止痛方Ⅰ、
散瘀止痛方Ⅱ、塞来昔布均可降低PGE 2含量。
表2大鼠PGE 2含量
组别n 前列腺素E2值（ng /mL ，
珋x ʃs ）生理盐水组65．71ʃ0．91散瘀止痛方Ⅰ组63．45ʃ0．38＊＊散瘀止痛方Ⅱ组63．92ʃ0．37＊＊塞来昔布组
6
3．82ʃ0．60＊＊
注：与生理盐水组比较，＊＊P ＜0．01。
2．3
环氧合酶－2（COX －2）mRNA 的表达如表3所
示，散瘀止痛方Ⅰ组、散瘀止痛方Ⅱ组、塞来昔布组COX －
2mRNA 的表达明显低于生理盐水组（P ＜0．01）。散瘀止痛方Ⅰ组、Ⅱ组、塞来昔布组之间无统计学差异（P ＞0.05）。说明散瘀止痛方Ⅰ、散瘀止痛方Ⅱ、塞来昔布均可抑制COX －2的表达。
表3COX －2mRNA 的表达
组
别
n COX －2mRNA （COX －2/actin ，珋x
ʃs ）生理盐水组61．57ʃ0．43散瘀止痛方Ⅰ组60．81ʃ0．34＊＊散瘀止痛方Ⅱ组60．86ʃ0．40＊＊塞来昔布组
6
0．78ʃ0．26＊＊
注：与生理盐水组比较，＊＊P ＜0．01。
A 为生理盐水组；
B 为散瘀止痛方Ⅰ组；
C 为散瘀止痛方Ⅱ组；
D 为塞来昔布组
图1
COX －2mRNA 表达电泳图
3
讨论
《素闻·阴阳应象大论》有云：“气伤痛，形伤肿”，常以
活血化瘀而达到消肿止痛的目的。痔术后水肿、疼痛的原因是手术破坏了肛门局部经络的连续性，导致气血运行受阻，气滞血瘀，阻塞不通而肿痛。原则应予活血化
瘀、消肿止痛。拟定散瘀止痛方。方由丹参15g ，徐长卿30g ，莪术15g ，芒硝9g 组成。丹参为君，祛瘀止痛，活血通经；徐长卿为臣，祛风止痛，解毒消肿；佐以莪术，行血止痛；以芒硝为使，清热消肿。再加上熏洗给药，能促进药物吸收，改善局部微循环，加速血流，促进炎性介质的吸收，从而改善痔术后水肿及疼痛。
注射角叉菜胶已用于制备多种组织炎症模型。足底皮下注射后，动物出现早期的痛反应和随后的痛觉过敏，表现为舔、摇动后掌，后掌抬离盒底等，主要表现为局部的充血、水肿及渗出等病理反应过程，可用于炎性水肿疼痛模型的
制备及观察各类药物对急性炎症过程的影响［1］
。本实验显示，散瘀止痛方熏洗对角叉菜胶致炎大鼠具有明显的抗
炎作用，能抑制局部炎症足趾肿胀。
前列腺素前身是结合在细胞膜磷脂中的花生四烯酸
（AA ）。当细胞膜受到炎症刺激时，膜磷脂由磷脂酶A2和磷脂酶C 系统催化水解而释放出AA 。AA 经环氧合酶（cy-clooxygenase ，COX ）催化，在血管内皮细胞和肾脏中很快转变为前列腺素，在血小板中转变为血栓素A2（TXA2）。前列腺素中，前列腺素E2的致痛作用强，可引起小血管扩张，降低血管张力，增强毛细血管通透性，诱导血小板聚集
和血栓素A2合成，
并直接增强感受器的兴奋性，降低神经兴奋阈值，
增强其对疼痛刺激的敏感性，另外可同时促进白细胞趋化，加重缓激肽和组织胺释放引起水肿［2］
，起着介导炎症的发生发展的作用。本实验检测了各组大鼠足趾局部组织中PGE 2的含量，发现散瘀止痛方可以有效地降低PGE 2含量，从而控制炎症的进一步发展。
环氧合酶为一种膜结合蛋白，至少存在两种异构体，即C0X －1（组成型）和C0X －2（诱导型）。COX －1为要素酶或管家酶，它产生的PG 参与机体正常生理过程和保护功能。而COX －2是经刺激迅速产生的诱导酶，在未受炎症、细胞因子等刺激的细胞中不易检测到，在受到细菌脂多糖（LPS ）、炎症细胞因子等刺激时诱发性高表达。其具有催化合成前列腺素参与炎症反应的功能特点，是机体催化花生四烯酸转变为前列腺素的关键限速酶，抑制COX －2，减
少前列腺素E2，能起到抗炎止痛的作用［3－4］
。塞来昔布为特异性COX －2抑制剂，空腹约2 3h 达到血浆峰浓度。本实验结果显示散瘀止痛方对模型大鼠炎症足趾组织的
COX －2mRNA 的表达起到干预作用，而发挥抗炎作用。因此，散瘀止痛方抗炎止痛机理可能与降低前列腺素E2含量及抑制COX －2的表达有关。参考文献：
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