| 标准操作规程 |
类别 | 工作标准文件 | 文件编号 | 油页岩灰渣XXXXX | 版本号 | V01 |
页码 | 共 页 | 执行日期 | 年 月 日 （禁止复印） |
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审批页
— | 起草人 | 审核人 | 审核人 | 二氧化碳制冷批准人 |
部门 | 分析研究部 | 分析研究部 | 分析研究部 | 质量保证部 |
姓名 | | | | |
签名 | | | | |
日期 | 年 月 日 | 年 月 日 | 年 月 日 | 年 月 日 |
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颁发部门：质量保证部
分发部门：分析研究部
拷贝号：NO. /
文件变更历史
版本号 | 执行日期 | 变更原因、依据及变更内容 通用机关零件 |
V00 | 2019年03月10日 | 新起草 |
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十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳法（CE-SDS法）测定记录 1
橄榄油的制作方法十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳法（CE-SDS法）测定记录(适用于多个样品) 1 1 目的
规范十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳法（CE-SDS法）检验的操作过程。
2 范围
本规程适用于常规十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳检验，涉及到蛋白质纯度相关指标的测定。
3 定义
3.1CE-SDS：十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳。
4 环境、健康和安全
还原电泳中使用的巯基乙醇为挥发性液体，具有较强烈的刺激性气味，会刺激眼睛、呼吸系统和皮肤，吞食有害，与皮肤接触有毒，取液时穿戴适当的防护服、手套和护目镜或面具。如不慎与眼睛接触后，请立即用大量清水冲洗并征求医生意见。该液体对水体环境能产生长期污染等不良影响，切勿倒入下水道，应倒入废液桶，由专业部门回收。与空气混合、受热、明火可爆，如其燃烧可用二氧化碳、干粉类灭火剂。储存库房应通风低温干燥，与氧化剂、食品分开储运。
5 培训
5.1培训部门：分析研究部。
5.2脱蜡铸造培训对象：分析研究部相关人员。
5.3培训方式和时数：自学，0.5小时。
5.4考核方式：问答。
6 职责
6.1质量保证部：负责监督本文件的执行。
6.2分析研究部：负责严格执行本规程规定。
7 程序（内容）
7.1原理
该方法是指以弹性石英毛细管为分离管道，以高压直流电场为驱动力，通过目标蛋白在含有胶的溶液中的迁移速率不同而得到分离，较小分子量的分子迁移速度更快则其迁移时间短，较大分子的迁移速度慢则其迁移时间更长。该方法主要能检测分子量在10kDa以上的降解片段。 7.2实验材料
7.2.1试药与试液
7.2.1.1超纯水：电阻率不低于18.2MΩ·cm，本方法所有试液均用超纯水配制。
7.2.1.2SDS-MW Analysis Kit：Beckman生产，货号390953，该试剂盒中包含SDS-MW凝胶分离缓冲液、SDS-MW样品缓冲液（样品稀释液）、酸性清洗液（0.1mol/L盐酸溶液）、碱性清洗液（0.1mol/L氢氧化钠溶液）、内标物质（10kDa Internal Standard）。也可采用北京博思雅生化技术研究院生产的SDS试剂盒，货号BSYK018，该试剂盒中包含CE-SDS Gel Buffer、CE-SDS Sample Buffer（样品稀释液)。也可采用同类型其它品牌的商品化试剂盒。
7.2.1.3烷基化溶液（0.25mol/L碘乙酰胺溶液）：称取约0.046g碘乙酰胺，加入1ml超纯水溶解混匀，可于2~8℃避光保存7天。
7.2.1.42-巯基乙醇。
7.2.1.5系统适用性样品：如无特殊规定，应采用经特殊处理后的系统适用性专用样品（处理方法见各项目下规定）；也可选用相应原研药或各项目自制工作对照品。
7.2.2仪器与用具
7.2.2.1毛细管电泳仪：AB SCIEX公司PA 800plus或CESI 8000 Plus。
7.2.2.2毛细管卡盒：适用于7.2.2.1中毛细管电泳仪的毛细管卡盒。
7.2.2.3毛细管：非涂层-熔融石英毛细管（内径50μm），切割至总长为30.2cm，高分辨率方法有效分离长度为20cm，高效方法有效长度为10cm。
7.2.2.4孔塞：孔塞大小8（100μm×800μm）。
7.2.2.5其他：CE通用样品瓶、蓝橡胶通用样品瓶瓶盖、200μl微量管（内插管）、移液器、水浴锅（或金属浴）、台式离心机、离心管、超滤管。
7.3操作步骤
7.3.1供试品制备
7.3.1.1供试品稀释
（1）空白对照：取当次检测供试品对应的缓冲液（如原液缓冲液或制剂缓冲液），分别用稀释液（SDS样品缓冲液）管式静态混合器进行稀释（稀释倍数同供试品），作为空白对照。 （2）系统适用性：取各项目下规定的系统适用性样品，用稀释液（SDS-MW样品缓冲液）稀释至终浓度约为1.0mg/ml。
（3）原液：根据待测原液浓度，用稀释液（SDS-MW样品缓冲液）稀释至终浓度约为1.0mg/ml。
（4）成品：若为液体制剂，根据标示含量，直接用稀释液（SDS-MW样品缓冲液）稀释至终浓度约为1.0mg/ml；若为冻干制剂，则先用水复溶后，根据复溶后理论含量，再用稀释液（SDS-MW样品缓冲液）稀释至终浓度约为1.0mg/ml。
7.3.1.2非还原供试品溶液制备：取稀释后供试品溶液各95μl，各加入10kDa Internal Standard 2μl，再各加入0.25mol/L碘乙酰胺溶液5μl，涡旋混匀。
7.3.1.3还原供试品溶液制备：取稀释后供试品溶液各95μl，各加入10kDa Internal Standard 2μl，再各加入2-巯基乙醇5μl，涡旋混匀。
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