网络出版时间：２０２０－６－２８１３：４０ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０７３．Ｒ．２０２００６２８．０８４８．００１．ｈｔｍｌ
·论 著·
理学特征
led日光管时姗姗，沈 勤，叶胜兵，吴 楠，王 璇，夏秋媛，李 锐，鲍 炜，周晓军
摘要：目的 观察散发性琥珀酸脱氢酶（ｓｕｃｃｉｎａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＳＤＨ）缺陷型胃肠道间质瘤（ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｓｔｒｏｍａｌｔｕｍｏｒ，ＧＩＳＴ）的临床病理特点、免疫表型、分子遗传学改变，并探讨潜在的分子机制。方法 采用甲基化特异性ＰＣＲ、直接测序法检测２６例散发性ＳＤＨ缺陷型ＧＩＳＴ，并分析其临床病理学、免疫表型及分子遗传学特点。结果 ２６例ＧＩＳＴ中１５例（５７ ６９％）存在至少一项ＳＤＨ基因异常，３８ ４６％（１０／２６）检测到ＳＤＨＢ、ＳＤＨＣ、ＳＤＨＤ基因突变，其中３例双突变。甲基化特异性ＰＣＲ技术检测出３
８ ４６％（１０／２６）病例发生基因启动子甲基化：ＳＤＨＡ基因８例，ＳＤＨＢ基因３例，其中１例同时甲基化。结论 通过分析ＳＤＨ缺陷型ＧＩＳＴ的形态学特征、免疫表型和分子生物学特征，提示ＳＤＨ基因突变及甲基化均是肿瘤抑制因子失活的重要机制，在肿瘤发生、发展中发挥重要作用。ＳＤＨ突变与ＳＤＨ启动子甲基化同时发生，提示存在基因多种异常共同作用的可能性。关键词：胃肿瘤；胃肠道间质瘤；琥珀酸脱氢酶；突变；甲基化测序
中图分类号：Ｒ７３５ ２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－７３９９（２０２０）０６－０６３１－０５ｄｏｉ：１０．１３３１５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｃｅｐ．２０２０．０６．００１
接受日期：２０２０－０３－０６
基金项目：国家自然科学基金面上项目（８１５７２４５３）、江苏省青年医
学重点人才（ＱＮＲＣ２０１６９１８）、南京总医院院管课题（
２０１６０５３）作者单位：解放军东部战区总医院病理科，南京 ２１０００２作者简介：时姗姗，女，博士，高级实验师。Ｔｅｌ：（０２５）８０８６０１９３，
Ｅ ｍａｉｌ：ｌｖｄｏｕ２０００＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
周晓军，男，博士，主任医师，通讯作者。Ｅ ｍａｉｌ：Ｚｈｏｕｘｊ１＠１２６．ｃｏｍ
琥珀酸脱氢酶（ｓｕｃｃｉｎａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＳＤＨ）缺陷型胃肠道间质瘤（ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｓｔｒｏｍａｌｔｕｍｏｒ，ＧＩＳＴ）是近年发现的一类ＳＤＨＢ免疫阴性，具有特征性临床病理表现的异质性肿瘤，其临床病理学特征、免疫表型及分子遗传学改变均不同于Ｋｉｔ或
ＰＤＧＦＲａ突变型ＧＩＳＴ［１］。目前对其临床病理学特
征有了一定的认识，但这类肿瘤的分子发病机制尚未明确。本实验从３６６例原发性ＧＩＳＴ中筛选出２６例ＳＤＨ缺陷型，首次用甲基化特异性ＰＣＲ、直接测序法观察ＳＤＨ基因突变以及启动子甲基化状态，并结合患者的临床病理资料，深入探讨ＳＤＨ缺陷型ＧＩＳＴ的临床病理学特征、免疫表型、分子遗传学改变以及潜在分子机制。１ 材料与方法
１．１ 临床资料 收集２００５～２０１０年解放军东部战区总医院病理科存档的３６６例ＧＩＳＴ，由两位高年资病理医师根据ＷＨＯ（２０１２）消化系统肿瘤分类标
准，并通过检测Ｋｉｔ及ＰＤＧＦＲａ基因及ＳＤＨＢ免疫阴性筛选出２６例ＳＤＨＢ缺陷型ＧＩＳＴ，收集患者的临床病理资料。１．２ 方法
１．２．１ 免疫组化及结果判断 免疫组化染采用ＥｎＶｉｓｉｏｎ法。一抗包括ＣＤ１１７（
Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ，Ｄａｋｏ公司，稀释度１∶１００）、ＤＯＧ１（Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ，福州迈新公司，稀释度１∶１００）、ＳＭＡ（１Ａ４，ＺＥＴＡ公司，稀释度１∶３００）、Ｓ １００（Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ，Ｄａｋｏ公司，稀释度１∶２０００）、Ｋｉ ６７（ＭＩＢ１，福州迈新公司，稀释度１∶３００）和ＳＤＨＢ（２１Ａ１１ＡＥ７，Ａｂｃａｍ公司，稀释度１∶３００）。高倍镜（４００×）下选取１０个有代表性的视野，计算免疫标记细胞的阳性率（阳性瘤细胞数／总瘤细胞数）×１００％。细胞阳性率占０～５％为阴性（－
陶粒混凝土墙板
）；６％～１０％为灶状阳性（＋）；１１％～５０％为中度阳性（ ）；５１％～１００％为弥漫强阳性（ ）
。１．２．２ 直接测序法 根据基因库ＤＮＡ序列设计引物（表１），分别扩增ＳＤＨＢ基因８个外显子、ＳＤＨＣ基因６个外显子及ＳＤＨＤ基因４个外显子，包含全部编码序列。所有引物均由上海桑尼生物公司合成。用Ｄ
ＮＡ测序仪３７３０进行ＤＮＡ双向测定序列，结果经ＡＢＩ公司软件分析。
１．２．３ ＤＮＡＣｐＧ岛甲基化检测 采用“ＭｅｔｈＰｒｉｍ ｅｒ”在线软件预测ＳＤＨＡ、ＳＤＨＢ基因启动子区ＣｐＧ岛甲基化检测引物（表１），并用全基因组扩增（ＷＧＡ）的ＤＮＡ验证甲基化引物的特异性。以至少为１在线aoi
００ｂｐ，ＧＣ含量＞５０％，ＣｐＧ出现频率＞０ ６为·碟形螺母
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１３６·临床与实验病理学杂志 ＪＣｌｉｎＥｘｐＰａｔｈｏｌ ２０２０Ｊｕｎ；３６（６）
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