苹果茎痘病毒的IC—RT—PCR检测作者：李丽丽等来源：《江苏农业科学》2014年第05期 玻璃热转印
摘要：利用CTAB缓冲液提取苹果叶片粗提液，以苹果茎痘病毒（ASPV）的抗血清包被薄壁管，捕获感病叶片粗提液中的ASPV病毒粒子；最终进行RT-PCR反应扩增ASPV特异片段，建立了利用免疫捕获RT-PCR（IC-RT-PCR）技术检测ASPV电子玻璃的技术体系。结果显示，变压器油箱
IC-RT-PCR可有效检测ASPV，且对栽培苹果、海棠、杏、毛樱桃样品的检测皆有效。IC-RT-PCR无需提取RNA，只需叶片粗提液，步骤简单；IC-RT-PCR技术受叶片中杂质影响较小，可有效检测不同植物样品中的ASPV，具有重要应用价值。 关键词：苹果茎痘病毒；IC-RT-PCR；粗提液
中图分类号： S436.611文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）05-0063-02
节能减排设备 苹果茎痘病毒（apple stem pitting virus，储酒罐ASPV）是一种严重危害果树生产的潜隐性病毒，主要侵染苹果和梨，从而导致苹果和梨产量降低、品质变差[1]。ASPV最早于1954年在
美国森林苹果（Malus sylvestris）上被发现[1]，目前在世界各地广泛分布。ASPV在一些敏感的砧木和栽培品种上症状较明显，主要表现为叶片反卷、木质部茎痘斑、果实凹陷、叶偏上性生长等[2]。为了进一步控制病毒危害，迫切需要灵敏、快速的病毒检测技术，因此本研究探索了用于检测ASPV的IC-RT-PCR技术。生物学方法是最传统的植物病毒检测方法，主要是将病毒转移到木本或草本指示植物上，通过病毒在敏感的指示植物上显示一些典型症状来确定病毒的存在。刘福昌等利用生物学方法对我国苹果、梨受ASPV感染情况进行了大规模的病毒筛查，结果显示该方法可有效鉴定ASPV，其缺点是周期长、易受季节和环境等因素影响[3]。基于基因组学的发展，国内外研究人员已获得ASPV的基因组序列[4]，以此为基础，并进一步开始探索利用PCR技术进行病毒检测。早在1998年Nemchinov等即开始探索利用RT-PCR技术检测固定宽带接入速率测试方法ASPV并取得了成功[5]。我国从20世纪末开始了苹果病毒的RT-PCR检测研究，侯义龙等首先探索建立了ASPV的RT-PCR检测体系，并对一些田间样本进行了小规模检测[4，6]。解决了因病毒含量和核酸纯度低影响扩增的问题。基于IC-RT-PCR的优势，本研究探索利用IC-RT-PCR技术检测ASPV，从而希望获得一种可有效检测ASPV的技术体系。
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