收稿日期：2020-09-10
作者简介：李云聪（1992-），男，硕士研究生，研究方向为植物提取，E -mail ：*******************。
李云聪，牛志平，徐美利，田洪，高伟*
（晨光生物科技集团股份有限公司，邯郸 057250）
摘 要：绿原酸是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。绿原酸具有抗氧化，抗炎，抗菌，抗病毒作用，抗高血糖、高血脂的作用，主要存在于忍冬科忍冬属、菊科篙属及杜仲科杜仲属等植物中，并且含量较高的植物不多，主要包括杜仲（树皮可达5%）、金银花（花中可达5%）、向日葵（籽实中可达3%）、咖啡（绿咖啡豆可达7%）。经过本实验检测得知，其他来源的绿原酸中，新绿原酸是主要组成部分，而甜叶菊绿原酸中，异绿原酸的占比明显高于其他来源的样品，由于异绿原酸的生物活性更高，甜叶菊绿原酸可能具有更强的生物功效。 关键词：甜叶菊；绿原酸；对比分析；高效液相谱法
中图分类号：TS201.4 文献标识码：A 文章编号：1006-2513（2021）01-0001-06
doi ：10.19804/j.issn1006-2513.2021.01.001
Comparative analysis of chlorogenic acids in stevia and
other plants
LI Yun-cong ，NIU Zhi-ping ，XU Mei-li ，TIAN Hong ，GAO Wei *
（Chenguang Biotechnology Group Co.，Ltd.，Handan 057250）
Abstract ：Chlorogenic acid is a phenylpropanoid compound produced by shikimic acid during aerobic respiration in plants. Chlorogenic acid had antioxidant ，anti -inflammatory ，antiviral ，anti -hyperglycemia ，hyperlipidemia effect. High Chlorogenic acid content plants were fewer and was mainly found in Lonicera L ，Compositae ，Eucommiaceae ，and Eucommia Oliv ，and are represented by Eucommia ulmoides （up to 5% in bark ），honeysuckle （up to 5% in flowers ），sunflower （3% in seeds ）and coffee （up to 7% in coffee bean ） . In this experiment ，it was found that neochlorogenic acid was the main component in other chlorogenic acids source ，while in stevia chlorogenic acid ，isochlorogenic acid is significantly higher than that of other sources. Due to the higher biological activity of isochlorogenic acid ，stevia chlorogenic acid may have stronger biological efficacy.Key words ：stevia ；chlorogenic acids ；comparative analysis ；HPLC
1 引言
绿原酸类物质是植物体中重要的次生代谢
产物，存在于多种植物中。绿原酸的种类不同，
在人体的代谢途径不同，因此功效不同。一般来说，异绿原酸（咖啡酰奎尼酸）的生物活性
最强。
微生物检查对植物中不同绿原酸的抗氧化活性进行了多项研究，结果显示：三取代的咖啡酰奎尼酸活性最强，二取代的咖啡酰基奎尼酸次之，而单取代的绿原酸活性最弱［1］。总的来说，抗氧化活性随着咖啡酰基的增加而增加［2］。研究发现，3，5-diCQA和4，5-diCQA可以抑制白细胞迁移和炎症过程超氧阴离子的产生，具有良好的体外抗炎活性［3-4］。3，5-diCQA具有抑制腐皮镰刀菌的活性、抑制和杀死蓝氏贾第鞭毛虫的活性［5］，4，5-diCQA具有抗革兰氏阳性菌的活性［6］，3，5-diCQA在体外具有显著的抗呼吸道合胞病毒的活性，且还具有抑制蜡状芽孢杆菌的活性［7］。3，5-diCQA可能具有人乳头状瘤病毒感染的宫颈癌的作用。另外，3，5-diCQA 不仅抑制HIV-1整合酶，并且能抑制HIV-1在组织中的复制［8］。通过体外活性实验评价表明，咖啡酰奎宁酸化合物具有抑制大鼠AR的活性和抑制AGEs（高级聚糖化终产物）形成的作用［9］。此外，咖啡酰奎宁酸化合物还是麦芽糖酶抑
制剂，非竞争抑制活性随着咖啡酰基数目的增加而增加，3，5-diCQA可以降低餐后血糖值［10］。3，5-diCQA对自发性高血压大鼠具有明显的降压作用［11］。
最近的研究发现，品种不同会对甜叶菊叶中绿原酸类物质产生较大影响，绿原酸类成分种类及含量均会受到品种差异性的影响［12］，目前绿原酸类成分的主要来源为杜仲、金银花、咖啡豆等植物［13］，因此本文主要对杜仲，金银花，绿咖啡豆和甜叶菊中绿原酸类化合物成分进行分析，确定其成分的差异。
2 实验方法
2.1 材料与试剂
甜叶菊，产地为甘肃、东台；杜仲、金银花、绿咖啡豆；乙腈，谱级试剂［赛默飞世尔科技（中国）有限公司］；甲酸，分析纯（天津市科密欧化学试剂有限公司）；三氟乙酸，分析纯（天津市大茂化学试剂厂）。
2.2 仪器与设备
高效液相谱仪［沃特世科技（上海）有限公司］；恒温水浴锅（上海森信实验仪器有限公司）；电子分析天平，感量 0.0001g（日本岛津公司）。
2.3 谱条件
试样的前处理：原料需充分粉碎，保证40目筛通过率在95%以上，合并粉碎后样品倒入混样袋中，摇晃10min以上，充分混匀，称取1g（精确至0.0001g）样品至100mL容量瓶中，加入70%甲醇定容，超声2h，冷却至室温后备用。
无人机控制系统
谱柱：Phenomenex Kinetex 5μm C18 100 mm×4.6mm；检测波长：330nm；柱温：25℃；进样量：3μL；流速：1.5mL/min；流动相A：0.1%三氟乙酸；流动相B：乙腈；缓冲液：乙腈∶水∶甲酸=100∶880∶20
梯度条件：
表1 绿原酸检测方法梯度条件
Table 1 HPLC method for chlorogenic acids
时间/min A/%B/%
0955
108020
128020
12.5955
15955
3 实验数据与分析
3.1 甜叶菊绿原酸的分析
甘肃甜叶菊绿原酸液相分析如图1所示，数据如表2所示，从表中数据可以看出甜叶菊中的绿原酸类成分主要有绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C。其中异绿原酸A的占比最高，为42.7%，其次是新绿原酸、异绿原酸C，分别占24.7%和22.6%。
3.2 杜仲，金银花，绿咖啡豆和甜叶菊中绿原酸的成分对比分析
分别对杜仲，金银花和绿咖啡豆进行了液相检测分析，具体图谱如图2、3、4，数据如表3所示。
mAU
800
600
400
200
2
4
6
8
10
12
14min
12.801
11.661
12.586
11.152
5.461
5.258
3.421
图1 甘肃甜叶菊醇提检测绿原酸谱图
Figure 1 HPLC chromatogram of chlorogenic acids from stevia in Gansu
表2 甘肃甜叶菊醇提绿原酸数据
Table 2 HPLC data of chlorogenic acids from stevia in Gansu
序号出峰时间/min
峰面积/%
化合物化合物名称1 3.421 4.43-CQA 绿原酸2 5.25824.75-CQA 新绿原酸3 5.461 2.64-CQA 隐绿原酸411.152 2.23，4-diCQA 异绿原酸B 511.66142.73，5-diCQA 异绿原酸A 6
12.801
22.6
4，5-diCQA
异绿原酸C
mAU
1201008060
40200
2
3.439
5.281
5.476
5.871
6.51511.1688.118
7.8697.5747.03511.65612.792峰面积：4.09671
峰面积：3.00472
峰面积：33.1618峰面积：27.385峰面积：8.45652峰面积：5.466074
6
8
10
12
14min
图2 杜仲绿原酸HPLC 检测谱图
Figure 2 HPLC chromatogram of chlorogenic acids from eucommia ulmoides
mAU 300250200150100500
2
4
6硅胶海绵条
8
10
12
14min
12.83811.68911.191
7.7497.4427.0666.4656.2165.9265.5185.317
3.476
峰面积：1.03666峰面积：4.8572峰面积：1.04785峰面积：9.13
558
图3 金银花绿原酸HPLC 检测谱图
Figure 3 HPLC chromatogram of chlorogenic acids from honeysuckle
mAU 350300250200150医用材料与应用
100
500
2
4
6810
12
14min
12.58511.50711.0248.2587.9167.5977.4196.9065.754
5.371
5.178
3.355
峰面积：15.002
6
峰面积：205.49
8峰面积：135.945
图4 绿咖啡豆绿原酸HPLC 检测谱图
Figure 4 HPLC chromatogram of chlorogenic acids from green coffee bean
表3 杜仲，金银花，绿咖啡豆与甜叶菊中绿原酸分析对比数据
Table 3 Comparative analysis of chlorogenic acids in eucommia ulmoides ，honeysuckle ，green coffee bean and stevia
绿原酸种类出峰时间/min
占比/%
出峰时间/min
占比/%
出峰时间/min
占比/%
出峰时间/min冰棍机
占比/%
来源杜仲金银花绿咖啡豆甘肃甜叶菊总酸含量%＜5
1.5-5
6-7.5
1.7-7.2绿原酸（3-CQA ） 3.439 3.6 3.476
2.4
3.355 5.5 3.421
4.4新绿原酸（5-CQA ）
5.2815
6.0 5.31755.0 5.17861.6 5.25824.7隐绿原酸（4-CQA ）
5.476 3.6
5.518
1.1
5.371
8.5
5.461
2.6
绿原酸种类出峰时间/min占比/%出峰时间/min占比/%出峰时间/min占比/%出峰时间/min占比/%
咖啡酸 5.87117.5 5.9260.7 5.754 1.2————
异绿原酸B
（3，4-diCQA）
—
———11.1910.911.024 3.311.152 2.2异绿原酸A
（3，5-diCQA）
11.65610.611.68934.011.507 6.511.66142.7
异绿原酸C
（4，5-diCQA）
12.792 2.512.838 4.312.585 4.312.80122.6
图2，图3，图4分别为杜仲，金银花，绿咖啡豆液相分析图谱，数据如表3所示。从表3中可以看出，杜仲绿原酸主要为5-CQA（新绿原酸，5.281min，56.0%）、咖啡酸（5.871min，17.5%）、3，5-diCQA（异绿原酸A，11.656，10.6%），其中咖啡酸的含量明显高于其他样品。金银花中的绿原酸主要为5-CQA（新绿原酸，5.317min，55.0%，）；3，5-diCQA（异绿原酸A，11.689min，34.0%），从各项成分的占比来看，金银花中的新绿原酸和异绿原酸之和的占比最高，其他成分的含量都处于较低水平。绿咖啡豆绿原酸种类主要为5-CQA（新绿原酸，5.178min，61.6%），占比最高，4-CQA（隐绿原酸，5.371min，8.5%）的占比也明显高于其他样品。甜叶菊中的绿原酸类化合物中，异绿原酸的占比最高，尤其是4，5-diCQA（异绿原酸C，12.801min，22.6%），明显高于其他样品的2.5%
～4.3%，而新绿原酸的占比明显低于其他样品。
4 结果与讨论
本文测定并对比了甜叶菊和杜仲、金银花、绿咖啡豆中的绿原酸类成分，不同的植物中虽然同样含有绿原酸类成分且含量较高，但是具体成分的占比有明显差异，主要体现在新绿原酸和异绿原酸上，甜叶菊中的异绿原酸含量占比高于其他植物，而新绿原酸的含量占比则明显低于其他植物。
绿原酸具有抗氧化，抗炎活性抗菌，抗病毒作用，抗高血糖、高血脂的作用。杜仲中绿原酸含量最高可达5%，主要用于医药保健品原料、饲料添加剂；金银花中的绿原酸最高可达5%，
主要用于医药保健品原料（具有广谱抗菌性）、饲料添加剂；绿咖啡豆绿原酸主要用于减肥类保健品。甜叶菊绿原酸主要作用有抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒、抗高血糖、高血脂等。由于不同种类的绿原酸生物活性不同，绿原酸类化合物成分在总的绿原酸中的占比可能对功效产生影响，甜叶菊绿原酸中，异绿原酸的占比明显高于其他来源的样品，可能具有更强的生物功效。但关于具体成分的功效方面的研究较少，值得进一步研究与发现。
参考文献：
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