环境科学
科技创新导报 Science and Technology Innovation Herald
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DOI：10.16660/jki.1674-098X.2019.16.109
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高敬华 李楠 郭士杰 姜学霞
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(肇庆学院环境与化学工程学院 广东肇庆 526061)
摘 要：本文主要是研究了富湾银矿微生物的多样性，通过采集富湾银矿土壤样品，利用16S rRNA基因 序列分析细菌基因文库，通过系统进化分析确定了该矿区的微生物落组成。结果表明，富湾银矿土壤的主要微生物落包括变形菌门（Proteobacteria ）、酸杆菌门（Acidobacteria ）、厚壁菌门（Firmicutes ）和浮霉菌门（Planctomycetes ）以及未分类的细菌类，揭示了富湾银矿的土壤中存在着丰富的细菌，这为探讨微生物修复矿区土壤污染提供理论的基础。关键词：矿区 多样性 16S rRNA 重金属污染中图分类号：S154 文献标识码：A 文章编号：1674-098X(2019)06(a)-0109-03 ①基金项目：肇庆学院2018年大学生创新创业计划项目（项目编号：201810580143）。 作者简介：高敬华（1997—），男，汉族，广东肇庆人，本科在读，研究方向：环境生态与修复。 通讯作者：姜学霞（1981—），女，汉族，山东东营人，博士，副教授，研究方向：环境生物生态修复，E-mail：32926497@ qq。
重金属污染积累性强，具有不可逆性。我国金属矿产资源丰厚，在矿山的开发、运送和矿石的冶炼过程中出现的尾矿、尾渣、粉尘颗粒等固液气体废弃物危害了矿区周围土壤和水体，给农业生产和周边环境良性发展造成潜在性危害[1]。重金属长期积累会危害人的智力发展以及身体发育[2]。 生物修复技术治理矿区重金属污染是关键技术，运用微生物的生化反应和代谢过程转化和治理矿区重金属污染，具备资金投入少、操作过程简单、没有产生二次污染等优点，是目前研究该领域的热点[3]。
蚕蛹虫草
广东富湾银矿位于广东省佛山市高明区富湾镇荷城街道东北部（华南褶皱系粤中凹陷内三洲上古生代断陷盆地的西北边缘），北东向恩平—从化断裂带与东西向高要—惠来构造带交汇部位[4-5]，面积约2.83km 2。银矿比邻高明富湾大学城，周边村落居民较多。高明矿产资源丰富，其中富湾银矿蕴藏量最大的金属矿之一，富湾银矿曾因被拟定开采开发利用而引起公众关注。
本研究以富湾银矿已开采的地方土壤为研究对象进行样品采集，采用非培养的方法，直接提取土样中微生物的基因组DNA，通过PCR扩增、连接和转化构建了该矿区16S rRNA基因克隆文库，对矿区土壤细菌落结构和多样性进行了研究，揭示了富湾银矿重金属污染与微生物之间的内在联系，为其他污染矿区土壤的微生物生态研究提供数据支撑。
金属焊接1 材料与方法
1.1 样品采集
本研究选取广东省佛山市高明区富湾银矿区的土壤进行采集。地理坐标为：东径112°48′01″，北纬 23°00′00″，根据矿区面积大小、地势情况和污染状况进电缆挂钩
行梅花形布点采样，采取0～15cm土层混合土样，四分法去掉多余土壤，装入无菌袋中，贴上标签，立即带回实验室。1.2 富湾银矿细菌DNA提取
用强劲土壤DNA提取试剂盒提取菌种基因组的DNA，通用引物27F和1492R进行16S rRNA基因的PCR扩增，扩增产物用1％琼脂凝胶电泳检测。1.3 测序与构建系统发育树
基因扩增产物纯化后送往上海美吉医药生物有限公司进行序列测定，共测定100条序列，将所得序列结果在GenBank数据库进行BLAST检索，同时下载与未知细菌同源性相对较高的序列，利用ClustalX比对分析，MEGA软件的N-J法构建系统发育树。确定样品中的细菌落多样性，利用Microsoft Excel 2010绘制细菌组成分布情况。
2 结果
本次实验结果共计得到序列100条，发现这些序列可以分为6大门类（图1）：P r o t e o b a c t e r i a（变形菌门）42％，其中A l p h a p r o t e o b a c t e r i a（α-变形菌纲）21％、B e t a p r o t e o b a c t e r i a（β-变形菌纲）6％、Gammaproteobacteria （γ-变形菌纲）15％，另外Clostridia （梭状芽胞杆菌纲）4％。Planctomycetes （浮霉菌门）5％、Actinobacteria （放线菌门）与Firmicutes （厚壁菌门）4％、Acidobacteria （酸杆菌门）12％、以及未知细菌37％左右。邮购盒
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3 讨论
环境中微生物的落组成信息能反映出环境的特点，不同的细菌落结构体现出它们特殊的生态功能。
本研究对富湾银矿的研究结果进行了分析，把土壤细菌类的多样性及各个类所占的丰富度做了比较，发现Proteobacteria （变形菌门）是细菌中最大且多样性比较丰
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