从茶叶中提取及其测定
A 茶叶中的提取及其红外光谱的测定
一、实验目的
1、通过从茶叶中提取学习固-液萃取的原理及方法。
2、掌握索氏提取器的原理及其作用。
3、掌握升华原理及操作。
4、了解傅立叶变换红外光谱仪的工作原理，学习AVATAR360FT-IR的使用方法。
5、掌握常用的固态物质红外制样方法—溴化钾压片法。
6、学习利用红外吸收光谱对有机化合物结构进行定性鉴定的方法。
二、实验原理
茶叶中含有多种黄嘌呤衍生物的生物碱，起主要成分为含量2%~4%的（Caffeine，又名），
并含有少量茶碱和可可豆碱，以及11%~12%的丹宁酸（又称鞣酸），还有约0.6%的素、纤维素和蛋白质等。
的化学名为1，3，7-三甲基-2，6-二氧嘌呤，其结构为：
纯为白针状结晶体，无臭，味苦，置于空气中有风化性。易溶于水、乙醇、
氯仿、丙酮、微溶于石油醚，难溶于苯和乙醚，它是弱减性物质，水溶液对石蕊试纸呈中
性反应。在100︒C时失去结晶水并开始升华，120︒C升华显著，178C︒时很快升
华。无水的熔点为238C︒。
具有刺激心脏，兴奋大脑神经和利尿等作用，因此可单独作为有关
药物的配方。可由人工合成法或提取法获得。本实验采用索式提取法从
茶叶中提取。利用易溶于乙醇，易升华等特点，以95%乙醇作溶剂，通过索氏提取器（或回流）进行连续提取，然后浓缩、焙炒而得粗制，再通过升华提取得到纯的。
受体拮抗剂实验方法红外吸收光谱是有机化合物结构鉴定的重要方法之一，它主要能提供有机物中所含有
官能团等信息。
测定红外光谱时，不同类型的样品须采用不同的制样方法。固态样品一般可采用压片 法和糊状法制样。压片法是将样品与溴化钾粉末混合研磨细和匀后，压制成厚度约为1mm
的透明薄片；糊状法是将样片研磨成足够细的粉末，然后用液体石蜡或四氯化碳调成糊状，然后将糊状物薄薄地均匀涂布在溴化钾晶片上。由于石蜡或四氯化碳本身在红外光谱中有
吸收，所以在解析谱图时要将它们产生的吸收峰扣除。图4-32是液体石蜡和四氯化碳的红
外吸收光谱图。
测绘样品的红外光谱图仅仅是化合物结构坚定工作的第一步，更重要的是对红外光谱
图进行解析。红外光谱图中有很多吸收峰，含有丰富的结构信息，但其中有许多我们还不
能准确地解释。对于初学者来说，主要应掌握4000~1500
1
cm-官能团特征频率区的吸收峰
和1500
1
cm 以下一些重要吸收峰的回归，并学会红外标准谱图的查阅或标准谱库的计算 机检索方法。烷基叔丁基醚
三、仪器与试剂
1、仪器：60mL索氏提取器一套、蒸发皿、玻璃漏斗、蒸馏头、接受管、50mL锥形瓶、
直形冷凝管。AVATAR360FT-IR红外光谱仪或其他型号的红外谱仪器。红外干燥灯、不锈钢镊子和样品刮刀、玛瑙研钵、试样纸片、压模、压片机、磁性样品架、无水乙醇浸泡的脱脂棉等 2、试剂：茶叶、95%乙醇、生石灰、溴化钾粉末。
四、实验装置图
茶叶中的提取装置图
蒸馏装置图
升华装置图
五、实验步骤
1、从茶叶中提取
2、用熔点仪测熔点
3、红外光谱吸收测定a 、开启仪器，启动计算机并进入OMNIC 窗口。b 、压片法制样：取1~2mg 干燥试样放入玛瑙研钵中，加入100mg 左右的溴化钾粉末，磨细研匀。按照图4-33顺序放好压模的底座、底摸片、试样纸片和压模体，然后，将研磨好的含试样的溴化钾粉末小心放入试样纸片中央的孔中，将压杆插入压模体，在插到底后，轻轻转动使假如的溴化钾粉末铺匀。把整个压模放到压片机的工作台垫板上（见图4-34），旋转压力丝杆手轮压紧压模，顺时针旋转放油阀到底，然后，缓慢上下压动压把，观察压力表。当压力达到55110~1.210kPa ⨯⨯（约100~120
2kg cm ）时，停止加压，维持2~3min ，反时针旋转放油阀，压力解除，压力表
指针回到“0”，旋松压力丝杆手轮，取出压模，即可得到固定在试样纸片孔中的透
明晶片。将试样纸片小心放在磁性样品架的正中间，压力磁性片。制好的试样供下
一步收集样品图时用。
c、绘制试样的红外光谱图并进行标准谱库检索。整个过程包括（1）设定收集
参数；（2）收集背景；（3）收集样品图；（4）对所得试样谱图进行基线校正，
焊接卡盘标峰等处理；（5）标准谱库检索；（6）打印谱图。
d、收集样品图完成后，即可从样品室中取出样品架。并用浸有无水乙醇的脱脂棉将用
过的研钵、镊子、刮刀、压模等清洗干净，置于红外干燥灯下烘干，以备制下一个
试样。
六、实验结果
1、得到产品0.1025g。
2、测的初熔：224.5℃；终熔：226.3℃。
3、根据试样谱图分析可知，1024.88cm：C=N;1702.14cm：C=O;1284.82cm:C-C。该试样为
。由于有杂质峰和溶剂峰影响以及实验条件的不同，试样谱图与标准谱图匹配相似
捆扎胶带
为92.91%。
七、注意事项
1、加入生石灰起中和作用，以除去单宁酸等酸性的物质。生石灰一定要研细。
2、乙醇将要蒸干时，固体易溅出皿外，应注意防止着火。
3、升华前，一定要将水分完全除去，否则在升华时漏斗内会出现水珠。遇此情况，则用滤纸迅速擦干水珠并继续焙烧片刻而后升华。
4、升华过程中必须严格控制加热温度。
B、液相谱法测定速溶咖啡中的含量
一、实验目的
1、掌握高效液相谱定性和定量分析的原理及方法；
2、了解高效液相谱的构造、原理及操作技术。
二、实验原理
高效液相谱由储液器，泵、进样器、谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，储液
器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动，经过反复
多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分
依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。
三、仪器与试剂
1、仪器：液相谱仪：六通进样阀：20ulHPLC微量注射器：0.45微孔滤膜；超声波清
洗器及玻璃器皿一套。
2、试剂：标准液：配制浓度为10mg/ml的储备液（称取0.1g定容于10ml）；取0.50ml 10mg/ml 的标准再用水稀释至50ml的浓度为100ug/ml标准中间液。
四、实验步骤
1、实验条件
流动相：甲醇+水（90+10）
检测波长：276nm
进样体积：20ul
流动相流速：1ml/min
温度：30℃
2、溶液配制
（1）标准溶液的配制：取0.5ml 100ug/ml的标准中间液定容于50ml容量瓶中，得到1ug/ml的标准使用液。分别移取5.00ml,2.50ml,1.00ml,0.50ml,0.25ml标准使用液于50ml容量瓶中，用水定容，得浓度分别为
100ug/ml,50ug/ml,25ug/ml,10ug/ml,5ug/ml的标准系列溶液。
钼精粉（2）样品溶液：称取咖啡3.6558g，溶解过滤，得50ml，取出2ml，稀释定容于10ml容量瓶中。
3、测定
开机：按照正确开机方式，开启高效液相谱仪和电脑，并联机。用流动相冲洗体系，待基线稳定。
动物模型制作建立分析方法：点击file中method的new。建立新的方法文件，设置pump和
detector参数，save as 该方法并激活。
进样分析：按照浓度由低到高的顺序测定标准系列溶液，以峰面积定量做工作曲线，在相同条件下测样品分析液。
关机：测定完毕后，用100%甲醇清洗谱柱和进样阀，按照操作步骤关闭高效液相谱仪和电脑，并清洗所用玻璃仪。
五
六、实验数据记录
溶液浓度（ug/ml）保留时间（min）峰面积
5 2.501 505763
10 2.536 682922
25 2.528 1972960
50 2.549 2906651
100 2.528 2606290七、实验数据处理
以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图如下：
豫公网安备41160202000603
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