高效液相谱法测定巧克力中的可可碱和

刘平年

【摘要】使用Zobarx Edipse XDB C18柱,以水-乙腈(体积比为88:12)为流动相,选择测定波长为278 nm,应用高效液相谱法测定巧克力中的可可碱和.可可碱和的平均回收率分别为96.7%和97.4%,RSD分别为1.05%和2.16%(n=5),检出限均为0.005g/kg.

机器人模型制作【期刊名称】《化学分析计量》

【年(卷),期】2005(014)002

【总页数】2页(P30-31)

【关键词】高效液相谱法;可可碱;;巧克力;氧化镁;测定

【作者】刘平年

【作者单位】上海市食品研究所,上海,200235

【正文语种】中文

【中图分类】O6

可可碱和均属于嘌呤碱[1]，其含量是评定巧克力品质的重要指标。由于巧克力中含有大量脂肪、蛋白质等物质，基质非常复杂，要去除杂质，将可可碱和从巧克力中提取出来并测定其含量较为困难。茶叶、可可粉中可可碱和的测定已有报道[2～3]，用高效液相谱法测定巧克力中的可可碱和未见报道。笔者利用氧化镁吸附巧克力中的杂质，释放可可碱和，应用高效液相谱法测定了巧克力中的可可碱和，取得较好的结果。

灭火器结构图1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相谱仪：Agilent 1100型，附带二极管阵列检测器(DAD)：美国安捷伦公司；

标准品：纯度为99.5%。北京试剂厂；

可可碱标准品：纯度为99.5%。美国Chemsiver公司；

标准储备液：1 000 μg/mL。准确称取0.100 0 g标准品，用甲醇溶解并定容至100 mL；

可可碱标准储备液：1 000 μg/mL。准确称取0.100 0 g可可碱标准品，用少量2 g/L氢氧化钠溶液溶解后，再用甲醇定容至100 mL；

甲醇：HPLC级，美国天地公司；

乙腈：HPLC级，美国天地公司；

氧化镁：分析纯；

实验用水为去离子水。循环水旁滤过滤器

刮刮卡制作

1.2 谱条件

谱柱：Zorbax Eclipse XDB C18柱(150 mm×4.6 mm i.d.， 5 μm，美国安捷伦公司)；流

动相：水-乙腈(体积比为88∶12)，流速为1 mL/min；柱温：30℃；检测波长：278 nm，带宽为30 nm；参比波长：360 nm，带宽为100 nm；进样量：20 μL。

1.3 实验方法

称取约5.00 g巧克力样品于250 mL锥形瓶中，加入150 mL去离子水、2 g氧化镁，摇匀后加热回流使溶液保持微沸45 min。取下锥形瓶冷却至室温，把内容物全部转移至250 mL容量瓶中，用去离子水定容，摇匀，静置后取上层清液经孔径为0.45 μm的滤膜过滤，用高效液相谱法测定。

2 结果与讨论

2.1 样品处理条件的控制

利用氧化镁对脂肪、蛋白质等极性物质的较强吸附能力来吸附巧克力样品中的杂质。实验中氧化镁的加入量受样品基质中蛋白质和脂肪等杂质含量的影响，如果样品中蛋白质或脂肪的含量高，则氧化镁的加入量应相应增加。试验表明，经加热回流的溶液静置沉淀后其溶液部分澄清透明、无乳状，说明加入的氧化镁已足量；若溶液部分不澄清透明、出现乳

马胶配方的大全

电锅炉制造状悬浮物、沉淀不彻底，说明加入的氧化镁量不足。处理后的溶液如果不澄清透明，可可碱和的检出量比溶液澄清透明时低，原因可能是吸附或结合在脂肪、蛋白质上的可可碱和未游离到溶液中。因此，在分析高脂肪、高蛋白质样品时，应增加氧化镁的加入量。本实验处理5.00 g巧克力样品，加入2 g氧化镁可满足提取要求。

2.2 流动相的选择

分别用甲醇-水和乙腈-水作流动相来考察分析物的洗脱分离情况，发现用乙腈-水(体积比为88∶12)体系作流动相时可可碱和与杂质的分离效果好，并且峰形尖锐，对称性好。乙腈的体积分数越大，样品出峰越早。由于可可碱上的一个氮原子以仲氨的方式存在，极性较大，所以可可碱出峰较早，极性较小出峰较晚。当乙腈的体积分数为12%时，其保留时间为2.3 min左右，刚好与样品中的杂质分离，的保留时间为5.2 min，这样可在7 min内分析完一个样品，并实现杂质与分析物的完全分离。可可碱、混合标准溶液的谱图和巧克力样品的谱图分别见图1、图2。

1—可可碱； 2—图1 可可碱、混合标准溶液的谱图

1—可可碱； 2—图2 巧克力样品谱图

2.3 检测器参数的选择

根据由二极管阵列检测器采集的数据绘制的可可碱和的紫外谱图，选择278 nm作为检测波长。依据紫外谱图优化二极管阵列检测器参数后得到比较好的检测效果，优化后的检测器参数为：检测波长278 nm，检测波长带宽30 nm，参比波长360 nm，参比波长带宽100 nm。

2.4 标准工作曲线及检出限

配制可可碱与浓度分别为0、5、10、20、50、100 μg/mL的混合标准溶液，进行液相谱分析，以浓度c为横坐标，相应峰面积A为纵坐标，进行线性回归，绘制标准工作曲线，得可可碱的线性回归方程为A=42.57c-5.97，线性范围为0～100 μg/mL，相关系数r=0.999 1，的线性回归方程为A=31.51c-1.12，线性范围为0～100 μg/mL，相关系数r=0.999 8。

当信噪比等于3时，可可碱和的最低检出浓度均为0.1 μg/mL，样品中可可碱、的检出限均为0.005 g/kg。

2.5 精密度试验

称取一定量的市售巧克力，按实验方法重复测定5次，计算测定结果的相对标准偏差，结果列于表1。由表1可知，本法的精密度较高。

表1 精密度试验结果分析物测定值/g·kg-1平均值/g·kg-1RSD/%可可碱2．45 2．43 2．50 2．46 2．472．461．050．361 0．358 0．374 0．376 0．3650．3672．16

2.6 加标回收试验

为验证方法的准确性，以市售黑巧克力为样品进行加标回收试验，计算回收率，结果列于表2。由表2可知，本法的回收率较高。

表2 加标回收试验结果分析物本底值/mg加标量/mg测得值/mg回收率/%平均回收率/%可可碱8．812．505．007．5010．0011．2513．5716．0118．6297．695．296．098．196．71．040．501．502．002．501．522．493．053．4596．096．7100．596．497．4

3 结论

采用高效液相谱法测定巧克力中的可可碱和，样品前处理较为简便、灵活，回收率和精密度较高，适用于巧克力中可可碱和的日常检测。经试验，本法也适用于咖啡、茶叶制品中可可碱和的测定。

参考文献

1 黄梅丽，姜汝涛，江小梅.食品香味化学.北京：轻工业出版社，1984.147

2 阚颖,张龙根，董姚萍，等.高效液相谱法测定可可粉和可可壳酊中的可可碱和.烟草科技/烟草化学，2000(3)：26

3 丁明玉，杨海军，肖善强.反相液相谱法直接测定茶水提取物中的嘌呤碱.谱，1999，17(5)：459

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