HPLC测定两种不同浓度乙醇提取补骨脂素的含量_李婷婷

HPLC测定两种不同浓度⼄醇提取补⾻脂素的含量_李婷婷190

第13卷第1期 2011 年 1 ⽉

辽宁中医药⼤学学报

JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM

Vol. 13 No. 1 Jan .，2011

补⾻脂为⾖科植物补⾻脂的成熟果实，性温、

味⾟，栽培或者野⽣。主要成分含⾹⾖精类、黄酮类、单萜酚类以及挥发油、皂式、多糖、类脂等成分。⾹⾖精类有：补⾻脂素（psoralen），异补⾻脂素（isopsorasen）等。在临床上具有强精补肾、扶正固本、妇科⽌⾎之功效，主治肾虚冷泻、⼩便频数、阳萎、腰膝冷痛、虚寒、喘咳、抗光敏和妇⼥⽉经不调，外⽤治⽩癜风[1]。补⾻脂素类加长波紫外线照射（PUVA）可⽤来⽪肤癌、银屑病、⽩癜风等[2]。补⾻脂素从⽔溶液中蒸馏得到针晶，溶于⼄醇、氯仿，微溶于⼄醚和⽯油醚。补⾻脂因含⼤量油脂和糖类成分。易发⽣皂化反应和形成腔状物。难以过滤因此⼀般不采⽤碱液中加热开环、酸液中闭环的原理来提取，⽂献中⼤多采⽤⼄醇提取。⽂章对采⽤50%、75%两种不同浓度⼄醇提取，并⽤⾼效液相⾊谱法测定其含量进⾏对⽐分析。

1 实验材料

1.1 药品与试剂

⾊谱甲醇（迪马公司）；乐百⽒纯净⽔；补⾻脂素对照品（四川省成都市药品与⽣物制品检验所）；补⾻脂样品（本院⾃制）。

1.2 仪器

HPLC ⾊谱系统（p680，戴安中国有限公司）；

紫外分光光度计（UV-1100，天美公司）；超声清洗器（AS150BD-IU，天津奥特赛斯有限公司）；移液器（沪制01150222）；电⼦分析天平（BS224S）。

1.3 ⾊谱条件

C 18（4.6nm×250nm，5µm）；流动相：甲醇-1％冰醋酸（50：50）；柱温：30℃；流速：1.0mL/min ；检测波长：

245nm。

2 ⽅法和结果

2.1 补⾻脂素的提取

将补⾻脂种⼦（未泡制过）碾碎，过100⽬筛，

取该粉末300g ⽤50％⼄醇溶液室温置于渗漉筒中浸渍泡4次，过滤合并得到滤液。滤液⽤旋转蒸发仪蒸发浓缩，回收⼄醇⾄⽆明显醇味，得到混悬液。将其置于冰箱过夜，待其分层，得补⾻脂⽔溶性部位和棕⾊黏稠层浸膏，取棕⾊浸膏置烧瓶中，加甲醇50mL 和适量活性炭，回流15min，趁热抽滤。滤液浓缩⾄⼩体积，放置，释出沉淀抽滤，沉淀⽤甲醇淋洗。提取上⾯的沉淀，加三氧化⼆铝搅匀，上硅胶G 层析柱以⽯油醚-⼄酸⼰酯洗脱以20mL 为1流份收集40~100流份、110~150流份，分别⽔浴加热，浓缩，放置过夜，依次得两份⽩⾊针晶（晶50%和晶75%）。分别采⽤50%和75%两种⼄醇提取后重结晶，⼲燥⾄恒重后密闭保存晶

HPLC测定两种不同浓度⼄醇提取补⾻脂素的含量

李婷婷，冯云，曾⽂婷，郑利，黄亚，尤思路

（成都医学院药学院实验教学中⼼，四川成都 610083）

摘要：⽬的：建⽴⾼效液相⾊谱测定⽤50% 和75% 两种不同浓度⼄醇分别从补⾻脂中提取、分离补⾻脂素

含量的⽅法。⽅法：⾼效液相⾊谱法。C 18⾊谱柱（4.6mm×250mm，5µm）；流动相：甲醇-1％冰醋酸（50：50）；流速：1.0mL/min ；λ：245nm。结果：两种不同浓度的补⾻脂素提取物均在进样量22.0~440.0ng 内线性关系良好；r

=0.9993。结论：HPLC ⽅法操作简便，重现性较好，结果准确。从含量测定⽅⾯进⽐较，认为在⽣产中⽤50%⼄醇从补⾻脂中提取补⾻脂素优于⽤75%⼄醇浓度。

关键词：HPLC ；补⾻脂素；⼄醇

中图分类号：R122.11 ⽂献标识码：A ⽂章编号：1673-842X (2011) 01- 0190- 02

收稿⽇期：2010-06-15

作者简介：李婷婷（1983-），⼥，重庆⼈，助理实验师，硕⼠研究⽣，研究⽅向：药物质量评价及分析。通讯作者：尤思路（1982-），⼥，四川成都⼈，助理实验师，硕⼠研究⽣，研究⽅向：药学专业实验教学与科研。E-mail ：

18000106@www.doczj/doc/1212b31067ec102de2bd8971.html 。

毛毯清洗剂Content Determination Psoralea Corylifolia of Psoralea Corylifolia Medicinal Extract

LI Ting-ting，FENG Yun，ZENG Wen-ting，ZHENG Li，HUANG Ya，YOU Si-lu榄香烯乳状注射液

（Experimental Teaching Center of Pharmacy College，Chengdu

Medical College，Chengdu 610083，Sichuan，China）

Abstract ：

Objective ：To establish high-performance liquid chromatography for determination of psoralen concentration method. Methods ：

The high-performance liquid chromatography. C 18 column （4.6mm×250mm，5µm）；mobile phase ：methanol-1% acetic acid（50∶50）；flow rate ：1.0mL/min ；detection wavelength ：

245nm. Results ：

The injection volume of psoralen 22.0-440.0ng a good linear relationship ；r =0.9993. Conclusion ：HPLC method was simple，reproducible and good results are accurate.

Key words ：HPLC ；psoralen ；ethanol

13卷辽宁中医药⼤学学报

50%和晶75%。

2.2对照品溶液的制备

精密称取补⾻脂素对照品1.1mg，加甲醇溶解⾄5mL容量瓶中定容。即得对照品的储备液。

2.3检测限考查

取补⾻脂素的对照品溶液，逐倍稀释，当稀释⾄浓度为0.022µg/mL时得到信噪⽐为1：3。得补⾻脂的最低检测浓度为

0.022µg/mL。

2.4线性关系的测定

双向玻璃

取对照品储备液1mL加甲醇稀释⾄10mL的容量瓶中，定溶后待⽤。吸取上述对照品溶液分别含补⾻脂素110.0、220.0、264.0、330.0、396.0、440.0ng 进样，得峰⾯积分别为13.1908、28.8388、34.93

58、45.6221、53.8044、59.1664。以进样量为横坐标，峰⾯积（A）为纵坐标进⾏线性回归，得回归⽅程：Y=0.1408X-2.056，r=0.9993，在110.0~440.0ng范围内线性良好。

2.5精密度实验

精密吸取浓度为22.0µg/mL的补⾻脂对照品5µL，注⼊⾼效液相⾊谱仪，连续进样5次，测定峰⾯积。以峰⾯积计算精密度，得到平均峰⾯积为14.1253，RSD=0.18%，表明仪器的精度较⾼。

2.6稳定性实验

精密量取供试品溶液1mL于10mL的容量瓶中，⽤甲醇稀释得到5.0mg/mL的样品溶液。然后分别于0、2、4、8、12、24h进样测定。测得平均峰⾯积为124.8243，RSD=1.71%，表明该样品在24h内较为稳定。

2.7重复性实验

精密称取晶50%和晶75% 各5份，按照拟定的测定⽅法测定含量。然后进样5µL测定，得到补⾻脂素晶50%平均浓度为

5.0mg/mL，RSD=0.97%，晶75%平均浓度为3.5mg/mL，RSD=1.35%，表明该⽅法的重现性较好。

2.8加样回收实验

蜂鸣器驱动电路精密称取同⼀已知补⾻脂素含量的样品适量，并且加⼊补⾻脂对照品，混合制成适宜浓度进样5µL。计算的晶50%平均回收率为98.36%，晶75%平均回收率为93.56%，表明该测定⽅法是可⾏的，且易得出⽤浓度50%⼄醇提取得到的补⾻脂素回收率稍⾼于70%⼄醇的提取物。50%⼄醇提取补⾻脂素得到的结果见表1。

表1 50%⼄醇提取补⾻脂素加样回收率

补⾻脂素含量（mg）加⼊量（mg）测得值（mg）回收率（%）

17.3317.3833.6797.01

17.3517.3834.2598.63

17.3717.3834.4699.16

17.3417.3834.5199.41

17.3817.3833.9397.61

2.9样品的含量测定

精密吸取供试品溶液稀释10倍得到0.5mg/mL 的晶50%和晶75%，吸取5µL进样，依照拟定的条件测定。得到峰⾯积50%⼄醇提取补⾻脂素明显⼤于75%⼄醇提取物，依据标准曲线计算得到50%⼄醇提取补⾻脂素每克样品固体中含有补⾻脂素

34.66mg，75%⼄醇提取补⾻脂素每克样品固体中含有补⾻脂素24.34mg。

2.10实验结果图谱

见图

1~3。

图1

补⾻脂素对照品⾊谱图

图250%

⼄醇提取补⾻脂素⾊谱图

图375%⼄醇提取补⾻脂素⾊谱图全自动电脑针织机

3讨论

本研究采⽤了HPLC法测定50%和75%两种不同浓度的⼄醇提取补⾻脂素的含量，提取⽅法简便、安全、得率较⾼，这两种溶液中⼀般认为50%的⼄醇质量较优，且价格便宜。在提取过程中⿊⾊黏稠沉淀层的甲醇处理是关键步骤，在除尽甲醇后，对提取物的黏稠液的流动性适度掌握得当，太湿则还存在没处理完的甲醇，会降低产率。⽤HPLC测定的过程中，流动相的配⽐时，我们采⽤了不同的甲醇-⽔、甲醇-1％冰醋酸溶液，结果表明以甲醇-1％冰醋酸（50：50）作为流动相时峰分离度⾼，峰形较好，在20min内出完所有的峰，且精密度较⾼，重复性较好。⽤50%⼄醇提取补⾻脂素并⽤HPLC测定其含量，操作简便，结果较为满意。◆

参考⽂献

[ 1 ] 刘志林.补⾻脂中补⾻脂素的提取及纯化[ J ] .第⼀军医⼤学学报，2005，25 ( 6 )：715.

[ 2 ] 骆和⽣.免疫中药学[ M ] .北京：北京医科⼤学、协和医科⼤学联合出版社，1999：127.

[ 3 ] 胡学军，林朝展，杨⾦燕，等.补⾻脂药材不同部位中补⾻脂素和异补⾻脂素的含量测定[ J ] .Traditional Chinese Drug Research & Clinical Pharmacology，2007 ( 18 )：5.

亮晶晶眼贴[ 4 ] 杨帆，⾦描真，宋凤兰，等.补⾻脂提取⼯艺的⽐较研究[ J ] .

中国中药杂志，2005，30 ( 16 )：1290.

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