RNA逆转录
实验器材： PCR管，去RNA酶头，PCR仪，掌上离心机及振荡器
试剂：DEPC水，逆转录试剂盒（本实验室使用兰博利德First-strand cDNA Synthesis Mix With gDNA Remover试剂盒，货号F三相混合步进电机0201）
点胶机密封圈
实验步骤：
将模板RNA在冰上解冻；LabScript RT Mix、2×RT Reaction Mix（With Primer）、gDNA Remover、5×gDNA Remover Reaction Mix、DEPC-ddH2O在室温（15-25℃）解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，简短离心以收集残留在管壁的液体。以下操作步骤请在冰上进行。为了保证反应液配制的准确性，进行各项反应时，应先配制成Mix，然后再分装到每个反应管中。 1.去除RNA中基因组DNA残留：食品安全检测试纸
组分 | 体积 |
RNA模板 | ≤ 1 µg total RNA 或≤ 0.1 µg poly(A) mRNA |
5×gDNA Remover Reaction Mix | 1.6 µl |
gDNA Remover | 0.5 µl |
DEPC-ddH2O | 补足至8 µl |
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混匀，并短暂离心，反应条件为 37℃，5 min。
2.在上述的反应管中，直接添加如下的反转录反应所需组分，进行第一链 cDNA 的合成步骤： 组分 | 水平面体积 |
gDNA Remover处理后RNA样品 | 8 µl |
2×RT Reaction Mix（With Primer） | 10 µl |
LabScript RT Mix | 1 µl |
DEPC-ddH2O | 补足至20 µl qam调制器 |
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3.轻轻混匀，短暂离心；42℃孵育 15-30 min。
4.85℃加热 5 min 失活 LabScript RT Mix。
5.反应结束后所得的 cDNA，请置于冰上进行后续实验或冷冻保存。
注意事项：
1.实验过程中请注意避免 RNase 污染。
2.除酶以外的各种试剂，使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度不均影响实验结果。
3.RNA 模板的完整性对 cDNA 合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的RNA提取/纯化方法。
4.捕鱼网具由于所有的 RNA 提取方法都不能完全去除基因组 DNA，所以应根据后续实验的需求， 选择是否需要在反转录反应前去除残留基因组 DNA。本产品中的 gDNA remover 组分，只需 5 min 即可除高效去基因组 DNA。
5.LabScript RT Mix 合成的第一链 cDNA 产物可直接加入 PCR 反应混合物中进行扩增，但加入体积不应超过PCR反应总体系的 10%，否则可能影响目的片段的产量。PCR 扩增使用的耐热 DNA 聚合酶和热循环条件需要根据目的片段的大小、GC含量、引物特性、以及对保真度的要求等进行选择。
6.第一链 cDNA 合成产物经过处理后可作为第二链合成的模板，合成含各种标记的cDNA，
作为杂交实验的探针。
RNA 可置于-80℃以下长期保存，cDNA 合成产物可置于-20℃保存。
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