巢式PCR

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巢式PCR
1.增效PCR(booster PCR)
扩增少于1000拷贝的模板DNA时会遇到两个问题:一是形成引物二聚体,一是非特异扩增,消耗了引物和酶,而特异扩增片段产量降低。对于这种情况,可设置二步PCR,先用较低浓度的引物进行初级PCR,此时由于引物少,形成引物二聚体的可能减少,但它并不影响靶序列的扩增,只是由于引物少产量不高。约经15~20个循环后补充引物量,以初级PCR产物为模板进行扩增,靶序列的产量将相应增加。
2.巢式PCR
此时也是进行二步PCR,与上面不同的是,第二级PCR需另行设置反应体系,并应用另外的PCR引物,此时引物的位置位于初级PCR 引物的内侧,用初级PCR产物做模板,进行第二步PCR,这样只有初级PCR中特异的扩增片段才能被二级引物扩增。自动扶梯装饰
除了达到增效PCR同样的目的外,还提高了最终产物的特异性。
巢式PCR:利用两套PCR引物对进行两轮PCR扩增反应组成,在第一轮扩增中,外引物用以产生扩增产物,此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增
u型管❖巢式RT- PCR,这种方法的特点是需要设计两对引物,一对引物扩增稍长片段,在这一扩增范围内再设计一对引物,扩增的产物是以第一对引物的产物为模版
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转子气体流量计5.杂交
芯片的杂交属于固液反相杂交即探针分子固定于芯片表面, 与液相的靶分子进行反应
4.杂交图谱的检测和资料分析
5.cDNA文库:
提取出组织细胞的全部mRNA,在体外反转录成cDNA,与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。
实际为不包含内含子的基因组文库。
cDNA 文库中的外源 DNA 片段是互补 DNA (complementary DNA ,

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