MPO测试盒 (南京建成生物工程研究所)
中性粒细胞中存在MPO,每个细胞所包含的酶的量是一定的,约占细胞总干重的5%,该酶具有使过氧化氢还原的能力,利用这一特点可以分析酶的活力,并测定中性粒细胞的数目。其具体原理是:MPO+H压铸机料筒的设计2O2→复合体;复合体+AH2(供氢体) →H20+MPO+A产物。通过供氢体邻连茴香胺供氢后生成黄化合物,在460nm处通过比测定A产物的生成量,从而推算出MPO的活力及H202减少的量和白细胞的数目。
试剂一:缓冲贮备液35mlx 1瓶,按需要量配成缓冲应用液,4。C保存。缓冲应用液的配制:贮备液:双蒸水=1:9。 试剂二:粉剂2支,临用时每支加缓冲应用液60ml溶解,可37℃加热溶解,4℃保存。
试剂三:粉剂3支,溶剂6mlx3支,用的时侯1支粉剂倒入1支溶剂中溶解,最好提前一天配制,充分溶解后4℃以下保存。
试剂四:24ml溶液X1瓶,用前放入37℃以上的水中摇晃使其溶解至透明后方可使用,室温保存。
试剂五:粉剂2支,4℃保存。
试剂六:溶液0.5mlxl支,4℃保存。
显剂的配制:临用时试剂五粉剂1支加到100ml缓冲应用液中,充分摇匀,待粉剂完全溶解后再加入试剂六O虹膜采集器.1ml,充分混匀,配好后的显剂4℃避光保存。
试剂七:溶液6mlxl支,4℃保存。
1.取右肺下叶,滤纸吸干污血渗液后-80℃冻存,以备打成肺组织匀浆测定肺髓过氧化物酶(MPO)活性。
2. 取液氮冻存的肺组织,在冷生理盐水中漂洗,滤纸拭干;称取适量肺组织,加试剂二溶液制成5%(肺重量:试剂二溶液体积 =1:19)的肺组织匀浆。
硒化卡拉胶四、操作步骤
1.样本前处理:取5%组织匀浆0.9ml钛合金热处理加入试剂三0.1ml,充分混匀后,37℃水浴15分钟,取出后待测。
2.操作表:
| 试剂空白(可以不做) | 对照管 | 测定管 |
蒸馏水(ml) | 0.2 | 3 | |
玩具车漂移样本(ml) | | 0.2 | 0.2 |
试剂四(ml) | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
显剂(ml) | 3 | | 3 |
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充分混匀,37℃水浴30分钟
↓
混匀,60℃水浴10分钟,取出后(未测管放于25-37℃热水中保温,防止反应液出现凝固)玻璃钢电除雾器立即在460nm处,光径lcm,蒸馏水调零,测定各管的OD值。
五、计算公式
酶活力单位定义:每克湿片在37℃的反应体系中H202被分为解1umol为1个酶活力单位。
MPO单位/克湿重=(测定管OD值-对照管OD值)/11.3x取样量(克)。