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菌种管理制度

	文件编号：Q/SOP-###
	版本：1
菌种管理制度	生效日期：2019.8.23

1目的

建立检定用菌种的管理制度，规范检定用菌种的管理，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。

2范围

本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的采购、传代、使用及销毁。

3定义

3.1标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学菌种保藏中心提供的冷冻干燥菌。

3.2传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制

备工作用菌种。

3.3工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。

3.4菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。

4职责

4.1采购部负责菌种的采购。

4.2无菌检验员负责菌种的接收、保存、传代、使用及销毁。

5标准菌种的来源

标准菌株由中国药品生物制品检定所医学菌种保藏中心（China Medical culture collection CMCC）提供的冷冻干燥菌种（0代）或由上级药检部门、生物科技公司已接种好的菌种斜面（2、3代）。中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌

种的标签CMCC（B）代表细菌（bacteria）CMCC(F)代表真菌（fungi），每种菌具有固定的代号。

6标准菌种的接收

6.1新购入的0代原始菌种管是玻璃安瓿装的冻干菌。接收菌种时应检查安瓿的数量和名称，和每一支安瓿的完整性。

6.2购买的已接种好的菌种斜面（2代或3代）应检查菌种管是否完好。

6.3购买的定量菌种应检查菌种管是否完好，同时应检查稀释液管是否完好。

6.4在Q/SOP-###【菌种接收记录】上记录关于菌种的信息，如接收日期、名称、来源、接种日期、数量、代次、批号（无批号者按菌种编号原则给出管号）和接收人等。在菌种管上粘贴标签，内容包含批号或管号及有效期至。

6.5将其暂贮存于2～8℃冰箱中在有效期内完成转接。有效期到应销毁，在【菌种接收记录】上记录销毁信息。

7菌种的编号

乘波体采用字母加数字表示：英文缩写字母—代次—传代日期—顺序号

菌种的英文缩写字母：大肠埃希菌（E.c）、金黄葡萄球菌（S.a）、枯草芽孢杆菌（B.s）、白念珠菌（C.a）、黑曲霉菌（A.n）、铜绿假单胞菌（P.a）、生孢梭菌（C.s）

水刺无纺布代数用一位带有下标数字的字母表示：传代用菌种用G表示；工作用菌种用W表示；如G3表示传代用菌种第3代；W3表示工作用菌种第3代。

传代日期用6位数字表示：年份取最后两位数，月、日分别用两位数。如2012年1月12日传代的第一支金黄葡萄球菌作为传代用菌种的编号为：S.a -G3-120112-01。

8菌种的传代及保藏

8.1传代

8.1.1将菌种接种至一新鲜培养基上，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻

干燥的菌种为第0代，冷冻干燥的原始菌种开启后转种后为第1代，直到第3代为工作菌种。菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代。

大微动开关

木材烘干8.1.2定期传代用菌的传代其操作步骤如下（斜面接种法）：

8.1.2.1从冰箱冷藏室中取出菌种斜面后，应在室温放置约30分钟。

8.1.2.2将装有新鲜配制的培养基菌种保藏管管壁上注明管号，和传代菌种一并移入生物安全柜，打开紫外灯照射不小于30分钟。

8.1.2.3关闭紫外灯。点燃酒精灯，左手握住菌种斜面和待接种的新鲜培养基管，将管口靠近火焰上方，右手拿接种棒后端，将接种环烧红约30秒，随后将接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过三次。

8.1.2.4右手用无名指、小指及掌部夹住管塞，左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手再轻轻拔开管塞，将接种环伸入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷后再至菌苔上，刮取少量菌苔，随即取出接种棒并将菌种管口移至火焰上方。将接种环伸入待接种的新鲜培养基管内至琼脂斜面的底部向上划一条直线，然后从底部向上作连续曲线划线，一直划到斜面

顶端，使菌种接种在斜面的表面上。

8.1.2.5取出接种环，在火焰上方盖上管塞，然后将接种过细菌的接种环在火焰上烧灼灭菌。

8.1.2.6将已接种好的细菌管置30～35℃细菌培养箱培养2～3天，真菌管置20～25℃霉菌培养箱最多培养5～7天。

8.1.3菌种传代代数不得超过5代，需要用传代用菌种转接下一代工作用菌种和传代菌种。

8.1.3.1用于传代用的菌种斜面，如：从上级药检部门买回来的菌种为二代（G2）可直接转接为（W3）和（G3），（G3）可以转接为（W4）和（G4），（G4）只能转接为(W5)。（W5）为实验用的新鲜培养物或用来制作菌悬液的菌种斜面。

8.1.3.3旧的工作菌种进行销毁。

8.1.3.4如采购定量菌，则按说明书要求一次性使用，无需传代，如生孢梭菌直接采购定量菌。

8.1.4菌种的传代记录应记录在Q/SOP-###【菌种传代记录】表中。

8.1.5必要时对菌种进行纯度确认和特性确认。

8.2菌种斜面的培养、保藏条件及时间

菌种	培养条件及时间	培养基	保存条件及时间
大肠埃希菌(CMCC(B)44102)	30～35℃ 2～3天	胰酪大豆胨琼脂培养基	2℃～ 8 ℃保存1个月
金黄葡萄球菌(CMCC(B)26003)	30～35℃ 2～3天	胰酪大豆胨琼脂培养基	2℃～ 8 ℃保存1个月
枯草芽孢杆菌(CMCC(B)63501)	30～35℃ 2～3天	胰酪大豆胨琼脂培养基	2℃～ 8 ℃保存３个月
铜绿假单胞菌(CMCC(B)10104)	30～35℃ 2～3天	胰酪大豆胨琼脂培养基	室温保存1个月
白念珠菌(CMCC(F)98001)	20～25℃ 5～7天	沙氏葡萄糖琼脂培养基	2℃～ 8 ℃保存2个月
黑曲霉 (CMCC(F)98003)	20～25℃ 5～7天	沙氏葡萄糖琼脂培养基	2℃～ 8 ℃保存3个月

注：菌种斜面1次/周观察状态是否正常。消音降噪

8.3放在冰箱中的菌种应在Q/SOP-###【菌种库存状态清单】中记录库存状态，绿标识在有库存栏代表有库存，在无库存栏代表无库存。

9菌种的使用及销毁

9.1每次进行菌种复活时，只能复活一个菌种。如果要复活其他菌时，应对所用物品重新消毒灭菌。

9.2菌种管上应贴有牢固的标签。标明管号、传代人、有效期至等。

9.3菌悬液计数应填写Q/SOP-###【菌种计数记录】。

9.4废弃菌种及实验用品废弃物的处理：121℃高压蒸汽灭菌30分钟。填写Q/SOP-###【菌种传代记录】。

10记录/文件清单

电梯监控方案

记录编号	记录名称	文件编号	文件名称
Q/SOP-###	菌种接收记录
Q/SOP-###	菌种传代记录
Q/SOP-###	菌种库存状态清单
Q/SOP-###	菌种计数记录