实验三 杀虫剂触杀毒力（LD 50）测定（点滴法）
目前使用的杀虫剂大多数都具有较强的触杀作用，所以杀虫剂的触杀毒力测定显得特别重要。触杀毒力测定有药膜法、点滴法、喷雾法、喷粉法和浸液法等。
无烟锅炉室内比较精确的触杀毒力测定方法是点滴法和药膜法。本实验采用点滴法（topical application ）。是将一定量农药丙酮液点滴在虫体的一定部位上，药剂可能自体壁进入体内。 目的要求
通过本实验可以学习到一种比较准确的杀虫剂触杀毒力测定方法，并进行有关毒力数据整理及其可靠性检验。
实验用具
容量瓶（10、25、50及100ml ）、微量点滴器或毛细管微量点滴器、吸管、培养皿、烧杯、滤纸、平头镊子、计算纸。
实验材料
乙酰甲胺磷，辛硫磷，丙酮，可选用室内人工饲养的粘虫（Mythimna separta Walker ）、玉米螟（Ostrinia furnacalis G ）、棉铃虫（Heliothis armigera Hubner ）或直接采自田间的菜青虫等4龄幼虫，荔枝椿象成虫（Tessaratoma papillosa Drury ）也可根据不同地区或不同季节任选一种试虫。 测试方法（选用玉米螟为实验材料）
1) 预备试验 先用丙酮将乙酰甲胺磷配制成若干个不同浓度，选取4龄玉米螟幼虫若干，每个浓度用点滴器（或微量进样器）点滴药液于幼虫的胸部背面，每头虫点滴1ul，每浓度点滴虫数不少于30头，待药液干后，把5－8头虫盛于一皿中，加入少量饲料，盖好培养皿，写好标记，经24小时后检查试虫的生存及死亡头数，计算其死亡率。从这些浓度中出适合的浓度，即出其死亡率在20－90％之间的5－7个不同剂量的等比浓度供下一步试验用。 2) 根据上步预备试验结果，如本实验可用乙酰甲胺磷有如下浓度：500、1000、2000、4000、8000、12000和16000ppm 。可设7组，每组选择4龄玉米螟幼虫210头，分别放在垫有滤纸的培养皿中（滤纸预先加湿），每皿放10头，每种浓度设有3个重复。
3) 用微量点滴器盛装药液，从低浓度到高浓度点滴，每虫点滴1ul 于幼虫胸部背板处，待药液挥发后，添加适量人工饲料于皿中。对照虫仅点滴丙酮，其他处理与上不同。光盘包装盒
4) 试验观察及结果整理 试验期间记录温湿度，施药后24小时检查每种处理的生或死虫数。统计各浓度幼虫的死亡率和校正死亡率％。计算公式如下：医用呼叫器
微冻技术>无动力清扫器
或
100
%=
处理组生）校正死亡率（
最后采用绘图法或直线回归方程求LD 50，并用方差分析法检定其可靠性程度。 例如：乙酰甲胺磷对玉米螟幼虫触杀LD 50毒力测定结果及检验。 １．乙酰甲胺磷对玉米螟幼虫触杀结果（见表6—1）。
2．绘图法求LD 50 此方法以剂量对数作横坐标，机率值作纵坐标，绘制直角坐标系．在直角坐标中出该次试验的坐标点，并用一直线连接起来，该直线称“剂量对数－死亡率机率直线”。从机率值“5”处引一与横坐标平行的直线与“剂量对数－死亡机率直线”相交，以相交点引一线垂直于横轴，此垂线与横坐标的交点，即为乙酰甲胺磷对玉米螟LD 50的剂100(%)%100(%)(%)%⨯--=对照组死亡率对照组死亡率处理组死亡率）校正死亡率（
量对数值，再查反对数表，即为LD50值。（见图6－1）。
因此，乙酰甲胺磷对玉米螟4龄幼虫触杀毒力LD50为0.0072ug/头（试验时如把幼虫称重则其单位可为ug/g）。
３．剂量对数机率值直线的验证及LD50的计算
l型套筒扳手
1) 求直线回归方程y=a+bx
2)求LD50（用回归直线计算）。
因为当机率y=5时即为50％的死亡率，所以将y=5代入回归方程中，即可求出LD50。
3)方差分析检定
４. LD50标准误差和置信区间（可靠范围）上面所求出的LD50是人工饲料饲养的玉米螟幼虫LD50，其值往往受到所取样本影响，与昆虫的体有一定的差距，即所求的LD50不一定代表体的实际情况。因此，还需计算出LD50的标准误差以及置信区间（可能的实际所在的范围）。
1）LD50标准误差
2）置信区间当机率P=0.05，体自由度df=∞时，查t表：t0.05=1.96，因此，当LD505%最小显著性差异(LSD)0.05=t0.05(df=∞)×Sm=1.96×0.0328=0.0064.但是，由于S m是LD50标准误的对数值，要换算成本来数值时，不能直接由对数表查回，因为我们前面用的时log10，因此标准误差(S m)由对数查回的计算方法为:LD50×log10×S m=0.0078×2.3×
0.0064=0.0012．因此玉米螟幼虫体LD50的95%置信区间是
0.0078±0.0012=0.0089-0.0067ug/头之间．
习作
将实验结果列成表格，分别用作图法即回归方程求LC50或LD50，并且进行可靠性的检验。
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