一、实验目的 1.掌握紫外－可见分光光度计性能的检验方法 2.学会UV-1100型紫外－可见分光光度计的使用方法 二、实验原理 分光光度计的性能的好坏，直接影响到测定结果的准确程度。因此，要对仪器进行性能检查，以保证测定结果的准确性。 三、仪器和试剂 UV汽车尾气抽排系统－1100型紫外－可见分光光度仪 石英比皿（一对） 擦镜纸 蒸馏水 四、实验内容及操作步骤 1. 比皿的配对性铅笔加工 将蒸馏水注入到比皿中，以其中一个比皿作空白，在 440 nm波长处分别测定其他各比皿中的透光率。 2.波长精度的检查 用KMnO4溶液的最大吸收波长525nm为标准，在待测仪器上测绘KMnO4溶液的吸收曲线，若测得的最大吸收波长在5251nm以内，则仪器的波长精度符合使用要求。 3. 重复性 以0.02mol/L的H2SO4溶液的透光率为100%，用同一K2Cr2O7溶液连续测定7次，求出极差，如小于0.5%，则重复性符合要求。 4.吸收值的准确度考察 取K2Cr2O7溶液，在以下波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，如下表所示，其相对偏差在1%以内，则吸收值的准确度符合要求。
五、思考题 1. 同种比皿透光度的差异对测定有何影响？ 2. 检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义？ | |||||||||||||||
实验二、吸收曲线的测绘及吸收系数的测定 |
一、实验目的 1. 掌握测绘吸收曲线的方法 2. 学会测定吸收系数 二、实验原理 若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的λmax超声波打磨机、λmin或λ (S)为一定值，且他们的数目也一定，从而为鉴别化合物提供了有力的证据。 百分吸收系数是指当溶液浓度为1%，液层厚度为1cm时，指定波长的吸光度。 即 三、仪器和试剂 dvd机芯UV－1100型紫外－可见分光光度计 石英比皿（一对） 100ml 烧杯1 个 擦镜纸 95%乙醇（A.R） 丹皮酚对照品 四、实验内容及操作步骤 丹皮酚对照品母液的配制：称取丹皮酚对照品10mg，用95％乙醇溶解，定容至10ml，摇匀。吸取5ml于100ml量瓶内，用95%乙醇定容，作为母液备用，此溶液中丹皮酚的含量为0.005%。 1. 吸收曲线的测绘 吸取母液1ml于10ml量瓶内，用95％乙醇定容。此时，丹皮酚含量为0.0005%。将此溶液与空白溶液（95％乙醇）分别用两个相同的比皿盛装后，放置在仪器的比架上，按仪器使用方法进行光谱扫描，得到吸收曲线图。 2．吸收系数的测定 利用上述溶液，在274nm波长处测定其吸光度，计算百分吸收系数。 |
实验三、分光光度法测定槐花中总黄酮的含量 |
一、实验目的 1.掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法 2.巩固紫外－可见分光光度计的操作方法 二、实验原理 黄酮类化合物分子结构中多含有羰基和羟基等结构，这些结构可与金属盐类试剂如铝盐、铅盐等生成有配合物。 铝盐比法是指用三氯化铝或硝酸铝、亚硝酸钠同黄酮类化合物生成稳定的有配合物，可用于定量分析。 三、仪器和试剂 UV－1100型紫外－可见分光光度仪 石英比皿（一对） 5% NaNO2溶液 10% Al(NO3)3溶液 NaOH试液 芦丁对照品 槐花药材 其余试剂均为分析纯 四、实验内容及操作步骤 1. 对照品溶液的制备 精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品50mg，置25ml量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。（每1ml中含无水芦丁0.2mg）。 2. 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置25ml量瓶中，各加水至5ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 3. 样品测定 取本品粗粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流至提取液无，放冷，弃去乙醚液。再加甲醇90ml，加热回流至提取液无，移至100ml量瓶中，用甲醇少量洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取3ml，至25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量（μg），计算，即得。 槐花中含总黄酮以无水芦丁（C27H30O16）计，不得少于8.0%。 五、注意事项 1、对照品和样品应同时显 2、显剂加入的顺序、加入量和显时间要正确 六、思考题 1.分光光度法有哪些影响因素？ 2.试述标准曲线法的优点。 |
实验四、薄层板的制备 |
一、实验目的 掌握薄层板的制板方法 二、仪器和试剂 天平（0.1mg） 研钵 玻璃板 10 cm×20cm CMC-Na水溶液 蒸馏水 95％乙醇（A.R） 薄层层析用硅胶G（青岛海洋化工厂） 三、实验内容及操作步骤 1. 洗板 选取板面平整的玻璃板，洗净后放置在薄层板放置架上阴干备用。（要求：薄板应光滑、平整、不符水珠。） 2．匀浆 将吸附剂1份（3.0g）和水3份在研钵中向同一方向研磨混合均匀。 3．铺制 将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板板的一端，用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘，轻轻震动，使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。 4．活化 将阴干的薄层板至于110℃烘箱中活化30分钟，置于有干燥器中备用。 要求：制备好的薄层板应检查其均匀度,即在反射光及透射光的检视下其表面应均匀、光滑、平整、无麻点、无气泡、无破损及无污染。 四、注意事项 1.玻璃板的规格有多种10*20cm、20*20cm等，可根据实验需要选择不同规格的玻璃板。 2. CMC-Na水溶液做为薄层板制备的粘合剂，《中国药典》2005年版规定其浓度在2‰～5 ‰，其浓度大小决定了所制备薄层板的硬度，本次实验粘合剂浓度为3 ‰ 。 3.除硅胶GF254外，薄层用硅胶还有硅胶G、硅胶H、硅胶GF365、硅胶GH254、 硅胶GH365等，不同种类的硅胶所制备出的薄层板性能不同。本次试验所用的硅胶GF254是指一种含有煅石膏的硅胶并在其硅胶中加入了一种在254nm下显强荧光背景的荧光剂，主要用于分离、检视在紫外和可见光下物无吸收的成分。 五、思考题 1．薄层板的铺制过程中应注意哪些问题？ |
实验五 薄层谱定性分析（五味子的定性鉴别） |
一、实验目的 1. 掌握薄层谱的定性分析方法 2. 熟悉薄层板的点样方法 二、实验原理 中药五味子中，五味子甲素为其主要有效成分之一，为了更好的进行定性鉴别，选用五味子甲素对照品和五味子对照药材进行对照，根据相同的组分在相同的条件下，应该有相同的颜和比移值来作为定性鉴别的依据。 三、仪器与试剂 毛细管 薄层板 10 cm×20cm 所用试剂均为分析纯 五味子粉末 四、实验内容及操作步骤 取五味子粉末1g，加20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加1ml使溶解，作为供试品液。另取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取五味子甲素对照品，加制成每ml含1mg的对照品溶液。吸取上述三种溶液各2μl，点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品谱中，在与对照药材和对照品谱相应的位置上，显相同颜的斑点。 五、注意要点 1.五味子有南、北之分。《中国药典》2005年版（一部）所收载的五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(TurcZ) Bail的干燥成熟种子。习称“北五味子”。 2.本次实验操作分为点样、展开、检视与记录数据四个过程。具体操作要点如下： 2.1点样：在干燥、清洁的环境中用毛细管分别吸取对照品溶液、对照药材溶液和样品溶液于同一硅胶GF254薄层板上，点样基线距离底边10~15mm，点样圆点不大于3mm，接触点样时勿损伤薄层板表面。点间距离不少于8mm。 2.2展开：浸入展开剂的深度为距底边5mm为宜。上行展开10cm左右，达到展距后取出薄层板、晾干、待检测。（展开之前应注意预平衡：在双槽展开箱的一侧槽内加入适量的展开剂，密闭，一般保持15～30 min，待容积蒸汽平衡后，应迅速将薄层板放入展开箱中，立即密闭，展开。） 2.3检视与记录数据：将展开、晾干的薄层板置于254mm紫外灯下检视，观察供试品溶液所显示的主斑点的颜和位置（Rf值）与对照品溶液、对照药材溶液是否一致。当供试品溶液主斑点与对照品、对照药材能对应时，即可认为该药材为药典收载五味子。 六、思考题 1．如何克服薄层展开过程中的边缘效应？引起边缘效应的因素有哪些？ |
实验六、高效液相谱仪的使用 | |
一、实验目的 1. 掌握高效液相谱仪的使用方法 2.了解高效液相谱仪的结构 二、仪器和试剂 L-2000液相谱仪（紫外检测器）； C18反相键合谱柱（250 mm×4.6 mm）； 微量进样器（25μl）； 过滤器（0.45μm）及脱气装置； 苯、甲苯、萘； 甲醇（谱纯）； 重蒸馏水（新制）； 三、实验内容与步骤 （一）．流动相的预处理： 1．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。 2．对过滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 （二）．安装谱柱 （三）．液相谱仪的使用方法 1.启动液相谱仪： (1)检查仪器的电源线是否已连接。 (2)打开仪器的电源开关。 (3)打开输液泵电源。 (4)打开检测器电源。（在平衡和冲洗谱柱时请将检测器关闭） 2..排除管道内空气： (1)将吸滤头放入经过处理后的溶剂内。 (2)将输液泵阀打开（逆时针旋转180º）。 (3)按下pump on/off键，开启输液泵。 (4)按下purge键，开始排管道内气泡。 (5)仔细观察管路，至无气泡流出时，再次按下purge键，暂停排液。 (6)按下pump on/off键，关闭输液泵。 (7)顺时针旋紧输液泵阀。 3.泵流速的设定： (1)按下manual键。 (2)按下1键，按ent键确认。 (3)输入需要的流速，按ent键确认。 4.检测器波长的设定： 按下wl键，输入需要的波长，按ent键确认。 5.打开T2000P谱工作站： (1)选择实时进样通道1，进入样品信号采集界面。 (2)鼠标左键点击“方法” ，修改或者新建分析方法。 (3)鼠标左键点击“谱图” ，设置谱图显示。 (4)在“停止时间” 项下输入采集停止时间。 (5)在“路径及文件名规则” 项下输入文件保存路径。 (6)鼠标右键点击“使用方法”项下分析方法，选择分析方法。 6.谱柱预平衡： 按下pump on/off键，开启输液泵。至基线平稳时可开始进样。 7．进样： (1)进样前按A/Z键将基线调零。 (2)将进样阀逆时针旋至于load位，插入进样针，进样。 (3)进样后立即将进样阀顺时针旋至injecti位。工作站开始采集信息。 8.数据采集完毕后，点击停止进样。 9.点击“再处理”和“报告”图标对图谱进行再处理，出报告图。 10.实验完毕后冲洗谱柱。 11.关闭工作站，关闭输液泵电源，关闭检测器电源、关闭仪器电源。 附: 练习液相谱仪使用的谱条件、样品溶液和进样量 谱条件 流动相为甲醇∶水（80∶20）；固定相为C18反相键合谱柱；检测波长为254nm；流速：1ml/min。 样品溶液 含苯、甲苯、萘浓度分别为1μg/ml的甲醇溶液。 进样量 ：10μl。 四、问题讨论 流动相在使用前为何要过滤和脱气？ | |
实验七高效液相谱定性及定量分析——中药赤芍中芍药苷的定性鉴别和含量测定（谱分析设计实验） | |
一、实验目的 1.掌握利用高效液相谱法进行定性及定量分析 2.巩固高效液相谱仪的使用方法 二、实验内容 中药赤芍中芍药苷的高效液相谱分析 三、实验提示 赤芍为常用中药，主要含芍药苷，并含氧化芍药苷、芍药内酯苷、牡丹酚、挥发油等，赤芍中的芍药苷是其主要活性成分，为了控制其含量，对赤芍中的芍药苷进行含量测定。 四、实验要求 1. 在老师的指导下查阅文献，系统了解赤芍中的芍药苷的测试方法。 2. 设计赤芍的提取处理方案。 3. 设计液相谱分离条件（谱柱，流动相，检测器等）与定量方法。 4. 实验报告按设计实验的要求书写。 五、思考题 1．外标一点法的主要误差来源是什么？ 2．紫外检测器的优缺点是什么？ | |
实验八、气相谱仪的使用 |
一、实验目的 1.掌握气相谱仪的使用方法 2.了解气相谱仪的结构 二、实验原理 气相谱法是采用气体作流动相（载气）流经谱柱进行分离分析的方法。所用的仪器为气相谱仪，主要由气源部分、进样部分、谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。 三、仪器与试剂 岛津GC-2014气相谱仪（FID检测器） 樟脑对照品溶液 试剂均为A.R纯； 四、实验内容及操作步骤 （一）、启动GC-2014气相谱仪： 1、检查仪器的电源线及氮气、空气、氢气的接头是否连好； 2、打开氮气、空气、及减压阀； 3、打开仪器右侧的电源开关，待自检完成后，开启电脑； （二）、参数的设定： 1、进样口温度：按下“INJ”键，设定进样口温度； 2、柱温：按下“COL”键，设定柱温； 3、检测器温度：按下“DET”键，设定检测器温度； 4、载气的流量：按下“FLOW”键，设定载气的流量； 5、分流比：按下“FLOW”键后，设定“SPLIT RATIO”项； （三）、打开N2000谱工作站： （四）、运行GC-2014气相谱仪： 1、点击“SYSTEM”，按下“START GC”键开启系统，再按下“MONITOR”键，在监视栏中观察流量、柱温、进样口温度、检测器温度的变化； 2、待温度达到设定值后，点击“MONITOR”键后，点击flame on，确认点火是否成功。 3、确认点火成功后，观察图谱的基线； （五）、进样 1、进样前按“ZERO ADJUST”键，将基线调零； 2、将进样针迅速插入进样口，并快速进样，然后立即按下数据采集开关，稍过片刻后拔出进样针； （六）、待数据采集完毕后，点击停止采集； （七）、待样品分析结束后，在离线处理数据，察看数据报告，打印报告。 （八）、关机： 1、将进样口、柱温箱、检测器的温度设为室温； 2、待各单元温度低于80度后，点击“MONITOR”键后，按下“SYSTEM”键，再点击“STOP GC”键关闭系统； 3、关闭N2000谱工作站，关闭主机电源； 4、关闭氮气、空气、。 附: 练习气相谱仪使用的谱条件、样品溶液和进样量 谱条件：聚乙二醇（PEG）-20M毛细管柱（柱长30m，内径0.25mm，膜厚度0.25µm）；柱温为160℃。 样品溶液 樟脑对照品溶液。 进样量 ：1μl。 五、 思考题 使用气相谱仪时，应该注意那些问题？ |
本文发布于:2024-09-22 01:12:50，感谢您对本站的认可！
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