訾晨瑞;石秀伟;郝宏山
反光书包
【摘 要】目的:建立盐酸氨基葡萄糖片有关物质检查的高效液相谱分析方法.方法:采用Applied Biosystems BrownleeTM(SPHERI-5 CYANO,220 mm×4.6 mm,5 μm)谱柱;流动相为乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液(70∶30);流速:0.4 ml/min;柱温:30 ℃;检测器为Alltech ELSD 2000ES 蒸发光散射检测器(仪器参数:漂移管温度85 ℃,气体流速2.0 L/min,Gain＝1,Impactor＝off).结果:盐酸氨基葡萄糖主峰有较高响应值的同时,与杂质峰分离度良好,辅料无干扰.供试品溶液在0.05~0.4 mg/ml范围内,精密度及线性关系良好(R2=0.999 4).结论:测定方法简便、准确、灵敏度高,方法可靠,可用于盐酸氨基葡萄糖片的有关物质检测. 【期刊名称】《天津药学》
【年(卷),期】2011(023)003
【总页数】4页(P18-21)
【关键词】盐酸氨基葡萄糖;高效液相-蒸发光散射谱法;有关物质
【作 者】燃煤助燃剂訾晨瑞;石秀伟;郝宏山
过氧化氢浓度测定
【作者单位】天津市轩宏医药技术有限公司,天津,300192;天津市轩宏医药技术有限公司,天津,300192;天津市轩宏医药技术有限公司,天津,300192
【正文语种】中 文
【中图分类】R927.11
氨基葡萄糖(GS)是一种天然的氨基单糖，是软骨基质和滑液中聚氨基葡萄糖的成分，是骨性关节炎的特异物。氨基葡萄糖在体外一般以硫酸、盐酸、N-乙酰化物的形式存在，它们在胃酸中完全解离，在小肠中以氨基葡萄糖的原形吸收，一旦被吸收就与最初的酸根无关[1]。
改锥头
盐酸氨基葡萄糖由于价格较低廉，近年来得到广泛应用，国家药品标准(WS1-SG-028-2001)和USP也有收载。但现行标准中均未制订有关物质检查项。USP30版收载质量标准中仅采用HPLC方法在195 nm处测定含量。盐酸氨基葡萄糖属于小分子多羟基化合物，该类型化合物一般极性较强，由于其结构中含有氨基，极可能与检测池壁产生相互作用，伴
随吸附与解吸附的进程，影响到光路而产生负峰[2]。同时由于在紫外区缺乏特征吸收或者仅有微弱的末端吸收，以200nm以下的极限末端吸收波长为检测手段时，易放大溶剂、盐基(无机离子)和共存物质的干扰响应，实验偏差较大。为此，考虑到盐酸氨基葡萄糖的强极性及弱紫外吸收的特性，采用质量型的蒸发光散射检测技术(HPLC-ELSD)检测盐酸氨基葡萄糖片的有关物质。ELSD最大的优势在于它可以检测无特征紫外吸收的物质，采用HPLC-ELSD检测技术对盐酸氨基葡萄糖片进行有关物质检查，有利于更好地控制产品质量，并建立准确、灵敏、快捷的分析方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Lab Alliance Series III型高效液相谱仪；检测器：Alltech ELSD 2000ES 蒸发光散射检测器；气源：WYK-2型无音无油空压机；工作站：Anastar谱工作站。
1.2 试药 盐酸氨基葡萄糖片(厂家A：深圳资福药业有限公司生产，批号100601、101001、101002，规格：240 mg/片)；盐酸氨基葡萄糖片(厂家B：四川宝光药业股份有限公司生产，批号100502)。三氟乙酸(TFA)、乙腈均为谱纯；水为屈臣氏蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 谱条件及系统适用性 液相谱柱：Applied Biosystems BrownleeTM Columns，SPHERI-5 CYANO，(220 mm ×4.6 mm，5 μm)。流动相：乙腈-0.1%TFA(三氟乙酸)水溶液(70∶30)；柱温：30 ℃；流速：0.4 ml/min；Alltech ELSD 2000ES 蒸发光散射检测器参数：漂移管温度85 ℃，Gain=1，Impactor=off；进样量：20 μl。
2.2 溶液制备
2.2.1 供试品溶液 精密称取盐酸氨基葡萄糖片的细粉适量，加流动相适量，超声使溶解，配制成浓度约为0.3 mg/ml(以盐酸氨基葡萄糖计)的样品溶液，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.2.2 自身对照溶液 精密量取上述供试品溶液1.0 ml，置50 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为2%自身对照溶液。
2.2.3 空白辅料溶液 精密称取空白辅料适量，配制成约相当于盐酸氨基葡萄糖0.3 mg/ml的空白辅料溶液，摇匀，滤过，取续滤液作为空白辅料溶液。
取供试品溶液和空白辅料溶液各20 μl,依“2.1”项下谱条件进样，盐酸氨基葡萄糖主峰与辅料峰分离度为5.810，大于1.5，与其他杂质峰分离度也大于1.5，辅料峰与1#杂质峰分离度为2.152，大于1.5，分离度良好。见图1。外墙金属复合板
2.3 破坏试验 分别称取空白辅料、盐酸氨基葡萄糖片粉适量，分别加入流动相适量，超声使溶解，用强光照射(4500 LX)12 h以上；分别加入流动相、强酸(0.1 mol/L盐酸)、强碱(0.1 mol/L氢氧化钠)、双氧水溶液(30%过氧化氢)适量，超声使溶解，沸水浴加热2 h以上，冷却至室温后用流动相稀释至刻度，制成浓度约为0.3 mg/ml(以盐酸氨基葡萄糖计)的样品溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液，分别进行测试，记录谱图。同时与未经破坏的空白辅料及制剂样品进行比较，用以考察可能存在的降解产物和降解途径。结果表明，光、热破坏实验对空白辅料没有破坏作用，对制剂均使其杂质稍有增大；酸碱环境对空白辅料及制剂均有较强的破坏作用；氧化环境对空白辅料及制剂均有一定的破坏作用。各破坏条件下，降解产物峰均能与盐酸氨基葡萄糖峰良好分离，见图1。
upd2.4 重复性试验 按照“2.2.1”和“2.2.2”项下的方法分别制备6份供试品和自身对照溶液，分别精密量取续滤液20 μl，注入液相谱仪，记录谱图。以样品溶液峰面积的lg值与称样量l
g值的比值计算相对标准偏差，RSD分别为0.71%和1.00%。结果表明，供试品溶液及自身对照溶液重复性良好。
1．盐酸氨基葡萄糖图1 供试品(A)辅料(B)光破坏(C)热破坏(D)酸破坏(E)碱破坏(F)氧化破坏(G)HPLC谱图
2.5 稳定性试验 分别以重复性试验中供试品溶液及自身对照溶液的1#样品为稳定性0 h样品，分别在室温自然光下放置1、2和4 h后，精密量取各溶液20 μl，注入液相谱仪，记录谱图，考察溶液的稳定性。结果：供试品溶液及2%对照溶液室温放置4 h，相对标准偏差分别为1.92%和1.94%，稳定性良好。
2.6 线性试验 取盐酸氨基葡萄糖片粉适量(约相当于盐酸氨基葡萄糖25 mg)，精密称定，置于50 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，用滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液线性试验贮备液，备用。精密量取此液1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、7.0和8.0 ml分别置于10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取各溶液20 μl，注入液相谱仪，记录谱图。以溶液浓度的对数值和主峰面积的对数值计算线性回归方程，得线性方程：Y=1.235 6 X+8.139 0(R2=0.999 4)。精密量取供试品溶液线性实验贮备液1.0
ml，置于50 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液线性实验贮备液，备用。精密量取此液2.0、5.0、6.0、8.0分别置于10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取上述各溶液20 μl，注入液相谱仪，记录谱图，以溶液浓度的对数值和主峰面积的对数值计算线性回归方程，得线性方程：Y=0.670 1 X + 6.983 2(R2=0.990 4)。线性试验结果表明，供试品溶液浓度在0.050 1～0.400 8 mg/ml范围内，线性关系良好。自身对照溶液浓度在0.002 004～0.010 02 mg/ml范围内，线性关系良好。同时，当溶液浓度为0.002 004 mg/ml时，主峰的峰高约为基线噪声的3倍，即为供试品溶液杂质的最低检出限，最低检出量约为40 ng。
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