学报
Journal of China Pharmaceutical University2022，53（1）：74-78
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施晓露1，2，乔宏伟2，3，吴健美2，3，狄斌1，2*，王优美2，3**手机应急充电器
（1中国药科大学药学院，南京210009；2监测管控与禁毒关键技术公安部重点实验室，北京100741；
3公安部禁毒情报技术中心，北京100741）
摘要建立快速检测毛发中地佐辛和含量的超高效液相谱-质谱（UPLC-MS/MS）法。将清洗后的毛发样品经甲醇研磨超声提取后进行UPLC-MS/MS分析。谱柱为Waters Acquity BEH C18（2.1mm×100mm，1.7μm），流动相为0.1%甲酸水-甲醇，0.4mL/min梯度洗脱。质谱采用ESI+离子源，MRM多反应监测，测定地佐辛和的定性离子对和定量离子对。地佐辛和在0.01~8ng/mg范围内线性关系良好，检出限均为0.005ng/mg，定量限均为0.01ng/mg；准确度和精密 度、基质效应和提取回收率以及稳定性均符合方法学要求。本研究建立的方法可简单、快速、准确地测定毛发中地佐辛和的含量，可应用于地佐辛和滥用的相关案件分析。
关键词地佐辛；；毛发检测；超高效液相谱-质谱联用技术
中图分类号R917文献标志码A文章编号1000-5048（2022）01-0074-05
doi：10.11665/j.issn.1000-5048.20220111
引用本文施晓露，乔宏伟，吴健美，等.毛发中地佐辛、的UPLC-MS/MS检测［J］.中国药科大学学报，2022，53（1）：74–78.
Cite this article as：SHI Xiaolu，QIAO Hongwei，WU Jianmei，et al.Determination of dezocine and pethidine in human hair by UPLC-MS/MS ［J］.J China Pharm Univ，2022，53（1）：74–78.
Determination of dezocine and pethidine in human hair by UPLC-MS/MS SHI Xiaolu1,2,QIAO Hongwei2,3,WU Jianmei2,3,DI Bin1,2*,WANG Youmei2,3**
1School of Pharmacy,China Pharmaceutical University,Nanjing210009;2Key Laboratory of Drug Monitoring and Control,Beijing 100741;3Drug Intelligence and Forensic Center,Ministry of Public Sec
urity of the People Republic of China,Beijing100741,China Abstract A rapid analytical method for the determination of dezocine and pethidine in hair samples using ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS)was established.After cleaned hair was extracted by grinding with methanol and ultrasonic,the final solution was analyzed by UPLC-MS/MS. The targets were gradient eluted on a Waters Acquity BEH C18(2.1mm×100mm,1.7μm)column with0.1% formic acid-water and methanol as mobile phase at a flow rate of0.4mL/min.The ESI+ion source and multiple reaction monitoring(MRM)were used to select the qualitative and quantitative ion pairs of dezocine and pethidine.Dezocine and pethidine showed good linearity in the range of0.01-8ng/mg,with the limit of detection of0.005ng/mg and the LOQs of0.01ng/mg.The accuracy,precision,matrix effect,extraction recovery,and stability all met the requirements.The established method is simple,rapid,and accurate for the qualitative and quantitative determination of dezocine and pethidine in hair,which can be applied in the case analysis of dezocine and/or pethidine abuse.
Key words dezocine;pethidine;hair analysis;UPLC-MS/MS
This study was supported by the Special Project of Basic Work of Strengthening Police by Science and Technology of Ministry of Public Security(No.2020GABJC22)
收稿日期2021-04-10*通信作者*Tel：************E-mail：dibin@cpu.edu
**E-mail：youmei_626@163
基金项目公安部科技强警基础工作专项资助项目（No.2020GABJC22）石墨电极加工
第53卷第1期施晓露，等：毛发中地佐辛、的UPLC-MS/MS检测
地佐辛（dezocine）是阿片受体部分激动剂，因镇痛作用强（同剂量与等效）、成瘾性小而作为缓解术后疼痛、晚期癌痛等多种疼痛的常用药物［1-2］。虽然成瘾性小，但仍存在心理依赖和躯体依赖的风险，属于管制类药品［3］。国内报道该药物成瘾［4］，初始用药主要由于手术镇痛、抑郁症以及肿瘤晚期镇痛。 （pethidine）是苯基类阿片受体激动剂，与有相似的药理作用，但镇静效果较弱（同剂量镇痛效果约为的1/10~1/8）。主要用于外伤止痛、术后镇痛以及肿瘤晚期的止痛［5］。然而长期使用也会造成身体依赖性、成瘾，其中医源性成瘾尤为突出，是严格管制的麻醉药品［6］。
目前国内外对于地佐辛和在毛发中的检测鲜有文献报道，主要是在血液、尿液中检测［7-9］。与这两种检材相比，毛发具有取样简便，易于存贮，不易污染，检测窗口期长的特点［10-11］，借助
毛发检测技术可获取更长时程的用药信息以便分析。此外，毛发相对稳定的生长速度也为推测药物摄入的时间提供依据。该技术已被广泛应用于公安机关的禁毒工作中，检测结果在案件认定中也得到了法庭的采纳［12-13］。依托毛发检测技术和高灵敏度、高准确度的超高效液相谱-串联质谱的分析方法［14］，建立毛发中地佐辛和含量的检测，不仅能应用于药物滥用导致的药物成瘾相关案件的事后检测，也能应用于医疗机构中对于管制类药品易接触人的事前监测。
1材料
1.1药品与试剂
地佐辛、对照品（1mg/mL甲醇溶液，公
安部第三研究所）；甲醇（谱纯，德国Supelco公司）；甲酸（谱纯，美国Honeywell公司）；丙酮（分析纯，北京化工厂）；十二烷基磺酸钠（化学纯，国药集团化学试剂有限公司）；纯水（美国Milli-Q纯水仪制备）。
1.2仪器
Acquity UPLC®Xevo TQ-XS超高效液相谱-质谱联用仪（美国Waters公司）；CPA224S万分之一电子天平（德国Sartorius公司）；研磨仪（北京万孚智能科技有限公司）；KQ-600DE超声仪（昆山市
超声仪器有限公司）；MIX-2500涡旋仪（杭州佑宁仪器有限公司）；含氧化锆研磨球的具盖研磨管（北京柏丞科技有限公司）；GH Polypro微孔滤膜（美国Pall公司）。
2方法
2.1UPLC-MS/MS分析条件
液相条件：谱柱：Waters Acquity BEH C18（2.1mm×100mm，1.7μm）；流动相：A相为体积分数为0.1%的甲酸水溶液，B相为甲醇；梯度洗脱程序：0.0~0.5min，10%B；0.5~1.5min，10%~ 30%B；1.5~5min，30%B；5.0~5.5min，30%~ 10%B；5.5~6.5min，10%B。流速：0.4mL/min；进样量：1μL；柱温：（45±5）℃；样品室温度：10℃。
质谱条件：扫描方式：电喷雾（ESI）离子源，正离子扫描；检测方式：多反应监测（MRM）；毛细管电压：1000V；锥孔电压：20V；离子源温度：150℃；碰撞气流量：0.15mL/min；脱溶剂气温度：500℃；脱溶剂气流量：1000L/h；气帘气流量：150L/h；MRM参数见表1。
2.2样品前处理
取适量毛发于15mL塑料离心管中，依次加入0.1%SDS溶液、纯水、丙酮各5mL振荡洗涤后置于通风橱中晾干。称取毛发样品约20mg于5mL
Table1MRM parameters of dezocine and pethidine
Compd. Dezocine
Pethidine Precursor ion（m/z）
246.146
246.146
硬件加速器248.062
248.062
Daughter ion（m/z）
229.142*
96.897
69.922*
174.112
Dwell time/s
0.025
0.025
0.025
0.025
Cone voltage/V
30
30
24
24
Collision energy/eV
10
16
26
18
*Quantitative ion
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具盖研磨管中，加入甲醇1mL 。在研磨仪中以
3000r/min 研磨提取100s ，再放入超声仪中超声
提取2h 。提取完成后用1mL 一次性注射器移取液体并过0.2μm GHP 微孔滤膜于2mL 离心管中。取适量过滤后的提取液与纯水1∶1混合，用涡旋仪混匀，再用0.2μm GHP 微孔滤膜过滤至进样小瓶中，进UPLC -MS/MS 分析［15］。3方法学验证与结果3.1
选择性
将10种不同来源的空白毛发和加入20ng/mL
地佐辛和混合对照品溶液的空白毛发经“2.2”项下处理后在“2.1”项条件下检测。图1表明空白毛发基质对地佐辛和的检测无明显干扰，该分析方法可以区分目标分析物与基质中的其他组分。地佐辛和的保留时间分别为3.36和3.48min 。
3.2
线性范围、检出限及定量下限
将地佐辛和的对照品溶液配制成质
量浓度为0.05，0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0，10，20，40，50，80ng/mL 的系列混合工作溶液，按照
“2.2”项下方法各取1mL 加入空白毛发中经前处理后，于“2.1”项下分析方法进行分析。以目标物的峰面积（Y ）为纵坐标，与之对应的质量浓度（X ）为横坐标作线性回归（权重：1/X ）。结果表明地佐辛和在0.01~8ng/mg 范围内线性良好。地佐辛的标准曲线方程为：Y =48349X +1198.31（n =11，r =0.9996）；的标准曲线方程为：Y =115652X +4711.87（n =11，r =0.9998）。线性回归相关系数r 均大于0.998，且所有浓度拟合相对误差小于20%，最低浓度信噪比大于10，因此定量下限均为0.01ng/mg 。以信噪比（S/N ）大于3为检出限，地佐辛和的检出限均为0.005ng/mg 。
3.3
准确度和精密度
将地佐辛和的对照品溶液配制成低
氢氧化钙生产（0.2ng/mL ）、中（5.0ng/mL ）、高（50ng/mL ）3个质量浓度的混合工作溶液，按照“2.2”项下方法将工
Figure 1Chromatograms of dezocine and pethidine
A:Blank hair;B:Blank hair samples containing 20ng/mL working solution of dezocine and pethidine
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第53卷第1期施晓露，等：毛发中地佐辛、的UPLC -MS/MS 检测
作溶液加入空白毛发中进行前处理，制备得每一浓度点各6个平行质控样品，于“2.1”项下分析方法进行分析，连续测定3d ，计算准确度、日内精密度和日间精密度。结果见表2。地佐辛的准确度
在98.9%~104.6%范围内，的准确度在93.3%~105.6%范围内，且两者的日内和日间精
密度RSD 均小于5%，符合方法学要求。
3.4
基质效应和提取回收率将地佐辛和的对照品溶液配制成3个
质量浓度分别为0.2，5.0，50ng/mL 的混合工作溶液，加入空白毛发中，经前处理方法制备得每个浓度点各6个平行质控样品，于“2.1”项下分析方法进行分析，记录峰面积为A b ；取适量甲醇和水（1∶1）溶液将对照品溶液配制成相应浓度混合溶液，每个浓度点各6个平行质控样品，检测分析得峰面积记为A a 。将空白毛发按照“2.2”项下前处理制备得滤液，与纯水1∶1混匀后将对照品溶液配制成相应浓度混合溶液，每个浓度点各6个平行质控样品，记录检测峰面积记为A c 。基质效应=A c /A a ×100%；
提取回收率=A b /A c ×100%。由表3可知，地佐辛和的提取回收率均在85%~115%以内，符合方法学要求；基质效应在88%~97%以内，说明毛
发基质对检测无明显干扰。3.5
稳定性
将地佐辛和的对照品溶液配制成
0.05，0.2，5.0，50ng/mL 的混合工作溶液，加入空
白毛发中，按照“2.2”项下前处理方法制备得每个浓度点各3个平行质控样品，于4℃冰箱中放置7d 后检测。结果显示样品放置7d 对定性结果不会造成影响。地佐辛各浓度点含量的RSD 分别为1.14%、0.56%和1.58%，结果为1.03%、0.54%和1.04%，表明样品中地佐辛和具有良好的稳定性。4
案例应用
2020年6月，北京市某派出所向禁毒大队转来
线索：北京市某医院医师非法开具和地佐辛等管制麻醉药品。经查，该医师张某在2017、
2018、2019年先后共计开出8000余支注射液和7000余支地佐辛注射液。据张某自述，3年
期间平均每个工作日注射这两种药物共计8支。地佐辛规格：5mg/mL （极量：120mg/d ），规格：50mg/mL （极量：600mg/d ）。对张某毛发进行取样，得长度约为7cm 的毛发样品，从发根至发梢分为长约1cm 的小段，依次编号为1~7，经前处理后进行UPLC -MS/MS 分析。初步分析后，样品中目标物含量过高，需进行适当稀释。最终检测结果如表4所示。检测结果表明，张某连续数月内使用了大量的和地佐辛注射液。5
结
论
本研究基于UPLC -MS/MS 技术并结合毛发的
Table 2
Accuracies and precisions of dezocine and pethidine (x
ˉ±s )Compd.Dezocine
Pethidine
Added/（ng/mL ）
0.2
5500.2
5
50
Accuracy/%（n =6）104.6102.398.993.3105.6
98.0
Intra -day precision （n =6）
Found/（ng/mL ）0.200±0.0085.143±0.08449.857±0.3370.180±0.0075.185±0.048
48.393±0.340RSD/%3.151.250.512.880.860.49
Inter -day precision （n =18）
Found/（ng/mL ）0.195±0.0135.082±0.14548.194±2.000
0.190±0.0165.428±0.291
50.348±2.295
RSD/%3.741.782.894.683.973.52
Table 3
Extraction recoveries and matrix effects at three concentra⁃
tions of dezocine and pethidine
Compd.Dezocine
Pethidine
Added/（ng/mL ）0.2
5500.2
5
50
Matrix effect/%
88.5989.0396.5394.5292.9395.59
Recovery/%106.59107.17100.42113.80114.07107.38
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第53卷
前处理方法，建立了毛发中地佐辛和的检测方法。该方法符合生物样本分析的各项要求，能较为快捷、准确地测定毛发中地佐辛和的含量并且可靠地应用于实际案例中。能够为禁毒工作中
地佐辛、滥用案件提供毛发检验的技术支撑，以及为其他类管制药品的滥用提供毛发检测的理论依据。同时也能够为研究毛发中药物含量与摄入量的药代动力学关系提供数据支持。References
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Justice of the People's Republic of China ，2018.
Table 4Concentrations of dezocine and pethidine in human hair of
the user
Sample 1234567
Hair weight/mg
19.820.219.919.920.010.010.0
c /（ng/mg ）
Dezocine 13.0615.8620.1120.1917.4512.5512.98
Pethidine 4.83
13.9717.5413.804.205.919.9478
豫公网安备41160202000603
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