仅供科研 版本号：170313
考马斯亮蓝G250染料试剂
【产品组成】
Component铝酸钙生产工艺 | 磨内喷水SBJ-1008S | SBJ-1008M | Store at |
考马斯亮蓝G250染料试剂 | 100ml | 500ml | 室温，避光 | 切割环
| | 铅酸蓄电池组装 | |
【保存条件】
室温,避光,3个月
【产品概述】
彩铅芯Bradford法是常用的蛋白浓度检测的方法，与传统方法相比，更简单、更稳定、兼容性更好。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M，DTT的浓度可高达5mM。但受高浓度的去垢剂的影响明显，故在用Bradford ProteinAssayKit进行蛋白定量时，需确保SDS低于0.01%，TritonX-100低于0.05%，Tween20,60,80低于0.015%，含高浓度去污剂的蛋白定量，建议采用BCAProteinAssayKit。
考马斯亮蓝G250染料试剂由考马斯亮蓝G250、乙醇、磷酸组成，用于考马斯染料结合(Bradford)分析的总蛋白测量，其特点在于对蛋白样品中可能存在的大多数盐、溶剂、缓冲液、硫醇、金属螯合剂、还原性物质等均不排斥。检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1～20μl，在50~1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
【使用方法】
1、稀释蛋白标准(一般为BSA5mg/ml)使其终浓度为0.5mg/ml。注意：蛋白样品在什么溶液中，蛋白标准也应用什么溶液稀释，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释蛋白标准。 2、将标准品按0,1,2,4,8,12,16,20μl加到96孔板的蛋白标准孔中，加蛋白标准稀释液补足至20μl。
3、加适当体积样品到96孔板的样品孔中，补加标准品稀释液至20μl。
4、各孔加入200μl考马斯亮蓝G250染料试剂，室温放置3～5min。
5、酶标仪测定595nm波长处的吸光值，560~610nm之间的波长也可。
6、根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
【注意事项】
1、待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也应溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。
2、需可检测560~610nm之间波长的酶标仪一台，最佳检测波长为595nm。
3、建议每次测定时都做标准曲线。因为测定时颜会随着时间的延长不断加深，并且显反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显反应的时间和温度，否则如需精确测定应每次都做标准曲线。
经络拍4、如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，考虑根据比皿的最小检测体积。应按比例适当加大考马斯亮蓝G250染料试剂的用量使总体积不小于最小检测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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