大鼠总抗氧化能力(T-AOC)定量检测试剂盒(ELISA) 使用说明书
【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒试剂盒名称】
大鼠总抗氧化能力(T-AOC)滚动鼠标定量检测试剂盒(ELISA)
【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒试剂盒用途】
定量检测大鼠血清、血浆及相关液体样本中总抗氧化能力(T-AOC)的含量。 【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒检测原理】
本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被大鼠总抗氧化能力(T-AOC)单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝产物，在酸的作用下变成黄，颜的深浅与样品中大鼠总抗氧化能力(T-AOC)浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值， 根据标准品和样品的OD值，计算样本中大鼠总抗氧化能力(T-AOC)含量。
【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒试剂盒组成】
1 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 7 | 显剂A液 | 6mL |
2 | 标准品 | 0.3mL×6管 | 8 | 显剂B液 | 6mL |
3 | 20倍浓缩洗涤液 | 25mL | 9 | 终止液 | 6mL |
4 | 样本稀释液 | 6mL | 10 | aveee说明书 | 1份 |
5 | 特殊稀释液 | 6mL | 11 | 封板膜 | 2张 |
6 | 酶标试剂 | 6mL | 12 | 密封袋 | 1个 |
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备注：标准品(1号→6号)浓度依次为：1600、800、400、200、100、50 U/L.
【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒需要而未提供的试剂和器材】
1、37℃恒温箱
2、标准规格酶标仪
3、精密移液器及一次性吸头
4、蒸馏水
5、一次性试管
6、吸水纸
【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒操作步骤】
1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍)；空白对照孔不加。
4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。
7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
8、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
9、显：每孔先加入显剂A 液50μL，再加入显剂B液 50μL，平板混匀器混匀30s(或用手轻轻震荡混匀30s)，37℃避光显15min。
10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应(颜由蓝立转黄)。
11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。
12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最
终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。
【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒样本要求】
1、样本不能含叠氮钠(NaN3)，因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。
2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。
【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒注意事项】
1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。
4、牢记样本已经稀释5倍，计算结果乘以5才是样本实际浓度。
5、本试剂盒定量范围为50-1600U/L，超过此范围，为标准曲线延伸计算所得，不做为准确定量结果，请用特殊稀释液稀释后测定准确结果(50-1600U/L范围内)，乘以总稀释倍数即为样本最终浓度。
6、若显过浅，可适当延长底物温育时间。
7、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。
8、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。
9、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒操作程序总结】
准备试剂，样品和标准品
加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟
洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟
洗板4次，加入显液A、B，37℃显15分钟
加入终止液卷积编码
15分钟之内读OD值
计算
【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒检测范围】
50U/L - 1600U/L
【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒规格】
96人份/盒
【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒贮藏】
2-8℃，避光防潮保存。
【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒有效期】
6个月
∙ 大鼠总抗氧化能力(T-AOC)ELISA试剂盒说明书
本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中wsrd总抗氧化能力(TAOC)的含量。上海丰翔生物高品质ELISA试剂盒供应商，品质卓越，售后完善。欢迎垂询：021－35301269 手机：13761338453 提供免费代检测服务。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠总抗氧化能力(TAOC)水平。用纯化的总抗氧化能力(TAOC)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入总抗氧化能力(TAOC)，再与HRP标记的总抗氧化能力(TAOC)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝，并在酸的作用下转化成最终的黄。颜的深浅和样品中的总抗氧化能力(TAOC)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中大鼠总抗氧化能力(TAOC)的含
量。
试剂盒组成：
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) | |
密封袋 | 1个 | 1个 | |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品：9 U/ml | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
样品稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
浓缩洗涤液 | (20ml×20倍)×1瓶 | (20ml×30倍)×1瓶 塑料口罩 | 2-8℃保存 |
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样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将
标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤：
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后
从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为6 U/ml，4 U/ml ，2 U/ml，1 U/ml，0.5 U/ml)。
2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5ic卡智能门锁倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显：每孔先加入显剂A50μl，再加入显剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显15分钟.
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