本人在酶促化学发光免疫检测领域工作已经有4个年头了，期间不仅学习并从事了酶促化学发光免疫诊断试剂的开发，同时很幸运地受聘于天众达公司，学习了化学发光免疫检测仪器的开发、生产全过程。这意味着本人经过了多年的努力，对酶促化学发光免疫检测技术有了较高层次的了解和掌握。 虽然酶促化学发光免疫检测技术应用于临床检验约有10年的历史，但是遗憾的是，目前国内缺乏专门针对这一技术领域的学术专著。大多数用户对酶促化学发光免疫检测技术的原理、特点、影响因素等缺乏全面系统的了解。再加上某些不负责任的厂家的不专业的技术支持，造成了许多模糊和错误的认识，导致了酶促化学发光免疫检测技术在国内临床的实际应用情况非常糟糕。使得酶促化学发光免疫检测技术的优越性无法在临床检验中得到充分发挥。 经过多年的实践，本人深深体会到，只有真正做好技术支持工作，一个新检测技术才能普及推广，才能完全发挥其优越性，造福国民。
因此，就有了下面本人多年来的总结
试剂篇
酶促化学发光免疫检测技术属于体外免疫分析检测技术范畴 常用体外免疫分析技术有：
免疫比浊分析涂塑钢管连接
放射免疫分析
酶联免疫分析
化学发光免疫分析
时间分辨荧光免疫分析
金标免疫分析
化学发光免疫分析检测技术包括：
直接化学发光免疫分析检测技术
酶促化学发光免疫分析检测技术
电化学发光免疫分析检测技术
化学发光（chemiluminescence）是指某些化学反应中发出可见光的现象。通常是氧化
反应产生电子能级处于激发态的物质，后者通过跃迁释放能量产生光子，从而导致的发光现象，其特点为消耗发光剂，同时量子效率相对较底，通常，可以用于分析化学的化学发光系统的量子产率值在0.01~0.20之间。
一个化学反应要产生化学发光现象，必须满足以下三个条件：
第一，反应中可提供足够的激发能，并由某一步骤单独提供，因为前一反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发光；
第二，有有利的反应过程，使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态；
第三，激发态分子具有一定的化学发光量子效率释放出光子，或者能够转移它的能量给另一个分子使之进入激发态并释放出光子。
文蛤刃因此，化学发光测定易受化学反应条件，如PH值、离子强度、溶液组成、温度等的影响，影响反应速率或任意一个量子效率的因素都会改变发光强度。
夺刀器化学发光免疫分析检测技术是把化学发光技术应用于体外免疫分析的一种检测技术。
化学发光免疫分析检测技术按化学反应类型可分为酶促化学发光和非酶促化学发光两类。
酶促化学发光包括辣根过氧化物酶（HRP）系统、碱性磷酸酶（AP）系统、黄嘌呤氧化酶系统等。
非酶促化学发光包括吖啶酯系统、草酸酯系统、三价铁-鲁米诺系统等。
按发光持续时间分类，可分为闪光（Flash）检测分析系统和辉光（Glow）检测分析系统。
闪光型发光时间在数秒内，如吖啶酯系统等。其检测分式一般采用原位进样（In Situ Injector）和时间积分法测量，即在检测器部位加装进样器，并保证加入发光剂和检测两个过程同步进行；同时以整个发光信号峰的面积为发光强度。
辉光型发光时间在数分钟至数十分钟以上，如碱性磷酸酶-AMPPD系统等，其信号检测无须原位进样，一般以速率法测量，即在发光信号相对稳定的区域（坪区）任意点测量单位时间的发光强度。
刮腻子的机器
国内从2001年开始出现许多的化学发光体外免疫分析试剂及化学发光免疫分析仪器的生产制造厂家，其中绝大部分的厂家采用是发光系统是辉光系统，包括辣根过氧化物酶（HRP）系统、碱性磷酸酶（AP）系统。因此，本人在天众达公司就职期间，主要接触的也是这两个系统，下面就这两个系统做
分析总结
鲁米诺
鲁米诺（5-氨基-2，3-二氢-1，4-二杂氮萘二酮，也称3-氨基邻苯二甲酰肼）是最常见的化学发光试剂之一。在碱性溶液（pH=10~11）中，鲁米诺被氧化成激发态的3-氨基邻苯二甲酸盐。
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该物质在化学反应过程中发出蓝光，最大发光波长为425nm。在通常情况下，鲁米诺与H2O2的化学发光反应相当缓慢和微弱的，但是，当某些催化剂存在时，如K2S2O8、NACLO、FE（II）盐、MN（II）盐、辣根过氧化物酶、微过氧化物酶等，反应速率和发光强度可以得到很大的提高。
鲁米诺的化学发光量子效率与溶液中的pH值有密切的关系（见表1），pH=11附近时达到最大值，约为0.01~0.02
通常以0.1mol/L pH8.6Tris缓冲液作底物液。要注意是：首先，鲁米诺和H2O2在无HRP 催化时也能缓慢自发发光，而在最后光强度测定中造成空白干扰，因而宜分别配制成2瓶
试剂溶液，只在用前即刻混合；其次, HRP发光增强剂如某些酚试剂（如邻－碘酚）或萤火虫荧光素酶可增强HRP催化鲁米诺氧化的反应和延长发光时间，提高发光敏感度。
对于酶促免疫分析，过氧化物酶是最常见的标记物。国内的试剂厂家绝大多数用的是辣根过氧化物酶。
一般认为，鲁米诺的化学发光机理如图：
AMPPD （Dioxetane Phosphate）
中文名为1，2-二氧环已烷衍生物，它是一种生物化学领域中最新的超灵敏的碱性磷酸酶底物，其特点：反应速度快，在很短时间内提供正确可靠的结果。在它的分子结构中有两个重要部分，一个是联接苯环和金刚烷的二氧四节环，它可以断裂并发射光子；另一个是磷酸根基团，它维持着整个分子结构的稳定。在通常情况下，这种化合物很稳定。但是，结果有碱性磷酸酶存在，Dioxetane Phosphat
e作为酶的底物会在酶的催化一脱去磷酸根基团，形成一个不稳定的中间体（AMP-D阴离子），其有2-30min的分解半衰期，发出波长为470nm的持续性光，在15min时其强度达到高峰，15-60min内光强度保持相对稳定。
下面就国内绝大多数在用的两个系统：辣根过氧化物酶（HRP）---鲁米诺系统（下文叫系统I）；碱性磷酸酶（AP）---AMPPD系统（下文叫系统II），在临床实际应用中常常忽
视的问题做一个总结。
实验操作方面
1，试剂盒平衡
实验准备阶段，要把试剂盒放到室温15~30分钟以上，以保证试剂整体达到室温，并把各液体组分振匀待用；
如果有样品、标准品、酶浓缩液需要稀释，要事先配置好，平衡15分钟以上，使工作液（即稀释后液体）内蛋白质分子布朗运动充分才可以使用
稀释时，液体量要用排尽法，否则将造成结果不准确
2，布板cd架
按实验需要布板，最好能用本子记录下布板信息，标明日期等，以防实验项目太多或样本太多时搞混。
多项目同时实验时，要在各条板条上注明项目名称和条数顺序。
剩下的干净条子要和干燥剂一起用密封袋密封好，并在袋子上做好标示。
待一切准备完毕，要开始加样时，方可以取出板条。如果排好的板条，暂时不做实验，要把其反扣在干净的纸候用。
3，加样
加样品和标准品时，每个浓度都要更换吸头。
要尽量保持吸头的干净，不能到处碰桌子、瓶子等等。
同一板实验，只能同一个人加样，否则会因为个人加样习惯差异造成分析上的困扰。
如果是手工洗板，不能用沾满洗液的手套进行加样操作，防止洗液滴入微孔内. 洗液的ph值，离子浓度等会影响到酶、底物的效价和活性。
加样品和标准品时加样手法采用贴壁不排尽法，加酶和底物（系统I底物分A、B液两种；系统II底物就一种）时加样手法采用悬壁不排尽法。
样品加样量的准确性直接影响到最终结果。
4，振荡
加完样品和酶，要放置到混匀器（即振荡器）上混匀15～30秒（此步很重要，混匀是加快液体内的蛋白质分子布朗运动，使反应更充分），才可以放至指定温度进行温育。
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