目的:探讨进行ABO、RhD正反定型手工微柱法在血型鉴定中的应用。方法:对门诊送检血样同时采用手工微柱凝胶法及手工盐水试管和玻片法进行ABO、RhD正反对比定型鉴定。结果:一次性正确率,手工微柱凝胶法正定型为100%、反定型为99.92%;试管法分别达到99.92%、99.83%;玻片法正定型率正确率为98.91%。结论:手工微柱凝胶法操作简单、快速,易于观察。其灵敏度高于试管法与玻片法。血型标本便于保存,利于事后复查,值得在二甲以上医院推广。 标签： 微柱凝胶法;试管法;玻片法
在做ABO血型鉴定时,临床广泛应用的玻片法虽操作简单、方便快捷,但在临床实际工作中却时有发生血型鉴定错误现象,而且往往是在患者需要输血申请配血时被发现错定血型,导致临床科室对检验科产生不良印象,认为检验质量差,检验结果不准确、不可靠。对检验科工作会产生很大的负面影响。试管法是传统经典的ABO、RhD血型鉴定方法,其结果准确可靠,但与微柱凝胶法相比,敏感性较差,操作难以规范化、自动化、检测结果不易保存,而微柱凝胶法用于ABO、RhD血型鉴定易于自动化、标准化、结果准确可靠,特异性强等优点被许多大医
院所采用。笔者在湘雅三院输血科进修学习期间,对于门诊每天送检血型鉴定标本同时采用手工微柱凝胶法鉴定ABO、RhD血型结果与试管和玻片法进行ABO、RhD血型鉴定结果进行比较。
1材料与方法
1.1材料
湖南省湘雅三院输血科2009年1月~2009年6月门诊血型鉴定1 193例,抽取静脉血1 ml用EDTA-K2抗凝,年龄1 d～90岁。
1.2试剂
ABO、RhD血型定型微柱凝胶试剂卡(单克隆抗体)(长春博迅生物技术有限责任公司提供)反定型用的A型标准试剂细胞、B型标准试剂细胞由本实验室自制2%~5%试剂红细胞,按第一版《临床输血手册》[1]操作。
1.3设备
TD-3A型血型血清学专用离心机(长春博研科学仪器有限责任公司生产)
1.4 方法
对门诊送检血样同时采用手工微柱凝胶法及手工盐水试管法进行ABO、RhD正反定型鉴定。用玻片进行ABO、RhD正定型鉴定。
1.4.1 微柱凝胶法①正定型,将受检者0.5%的红细胞生理盐水悬液,加入抗A、抗B、抗D、阴性对照微管凝胶孔中,每孔50 μl即可使用微柱凝胶离心机,以900 r/min离心2 min;以1 500 r/min离心3 min,取出肉眼观察结果。②反定型,先将受检者血浆标本加注Ac、Bc 两孔内,每孔50 μl。后在2孔标本中分别加入相应的A型B型标准红细胞悬液50 μl即可使用微柱凝胶离心机,以900 r/min离心2 min,1 500 r/min离心3 min取出观察结果[2]。结果判定标准按试剂盒说明书。阳性:红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中。反应强度:特异性红细胞抗原抗体复合物位于凝胶表面为强阳性反应,复合物在胶中为弱阳性反应;愈靠近胶底部颗粒愈小,反应愈弱。阴性:被检红细胞抗原无相应的抗体结合,不出现特异性抗原抗体复合物,红细胞沉于微柱凝胶的尖底部。
1.4.2 试管法①查抗原(正定型):取洁净小试管2支,分别标明抗A 、抗B,用滴管加入抗A和抗B分型试剂2滴于试管底部,再分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴,混匀。②查抗体(反定型)取洁净小试管2支,分别标明A 型、B型细胞。用滴管加入受检者血清2滴于试管底部,再分别以滴管加入A、B型5%试剂红细胞悬液1滴,混匀与正定型2管,立即放入离心机内以1 000 r/min离心5 min。取出轻轻摇动试管,使沉于管底的红细胞浮起,以肉眼观察来判断结果[2]。
氨分解制氢1.4.3 玻片法正定型取清洁玻片用蜡笔标明抗A、抗B,并加入抗A、抗B分型试剂各1滴于玻片标记相对应处,再以滴管分别加入受检者10%红细胞盐水悬液1滴充分混匀,连续约15 s以肉眼观察来判断结果[2]。
2 结果
在1 193例送检血样中,一次性正确率:微柱凝胶法正定型率100%、反定型率99.92%;试管法一次性正确率也分别达到99.92%、99.83%;玻片法一次性正确率为98.91%。这与张悦,张国平研究结果基本相符[3]。3种检测方法结果见表1。
表1 3种血型鉴定方法比较
3 讨论
在上述3种方法血型鉴定不符17例。对可疑结果及时进行复查其结果,①1例微柱凝胶法正反不符情况是:抗A(-)、抗B(4+)、A型(1+)、B型(3+),后经待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞(I、Ⅱ、线圈骨架Ⅲ套)起反应抗体筛查显阳性,表明有其他不规则抗体存在。后确定血型是“B”(已查到的抗原定型[2])。微柱凝胶法是应用分子排阻层析原理,通过微小的凝胶颗粒构成的滤网,在离心条件下,将与抗体反应的红细胞浮于胶表面或胶中,将未与抗体反应的红细胞沉至微柱凝胶的尖底部。结果可以由自动化仪器判读,也可以由肉眼直视判读。目前国内一些大医院主要用该法进行ABO、RhD 血型抗原鉴定,该法有自动化和手工两种,三院输血科采用的是手工微柱凝胶法。②三例试管法正反不符多由操作繁琐易出现漏加、错加抗A 、抗B试剂或试剂红细胞悬液浓度度不够造成肉眼观察困难。③对于13例玻片法判断困难的可疑结果后经试管法和、微柱凝胶法复查证实有8例定型错误。这可能由亚型红细胞抗原与抗体的凝集反应慢、凝集强度弱,而造成误判。此外还有一些疾病,如白血病、恶性肿瘤也会使RBC抗原变弱;而某些自身免疫性疾病或新生儿溶血患者的RBC会发生自发性凝集[4]。有时还可因为红细胞浓度过高或低,以及玻片、吸管、试管等污染造成假凝集,引起血型鉴定错误[5-6]。
离子接地棒>三基光源
本研究表明,手工微柱凝胶免疫检测ABO、RhD 血型鉴定,其灵敏度、准确性均与试管法一致,其反应强度高于试管法、优于玻片法。微柱凝胶法操作简便、快速、省时、省力,易于观察结果,并可以长时间保存血型鉴定样本(保存7 d以上),有利于事后复查。该法样本、试剂用量少,结果的判读易于标准化,最大限度减少了操作者主观因素的影响。玻片法正定型虽操作简单、方便快捷被广泛应用于临床,可在操作时,是一块玻片只能做一个人,做血型鉴定一个一个做,如标本量大时就不便于操作,费时费力。在实际工作中很少同时做反定型,由于没有指控(反定型),如遇弱凝集、冷凝集、或假凝集时容易对结果误判出错,而不能及时发现。再有,做过的玻片放置时间稍长就会因液体挥发而凝集也给审核签发人员(主管检验师)带来不便。为确保血型鉴定的准确性,避免血型差错。建议手工微柱凝胶法血型鉴定技术应在二甲以上医院推广使用。考虑到微柱凝胶法成本略高的关系,对门诊用可采用试管法、而对住院患者则采用手工微柱凝胶法分步实施的办法。
[参考文献]绿隔热玻璃
[1]王宝燕.输血手册[M].北京:科学出版社,2008:129-132.
[2]夏琳.临床输血诊疗技术[M].北京:人民卫生出版社,2008:62-64.
[3]张悦,张国平.ABO血型2种检测方法比较[J].职业与健康,2008,24(14):1393-1397.
[4]王琳.抗M引起ABO血型鉴定困难分析[J].中国现代医生,2009,47(2):91.
[5]陈希元. ABO血型鉴定中应注意的问题及解决方法[J].社区医学杂志,2009,7(2):39.
水磨片[6]余海燕,王席,丁后明.高效价冷凝集素患者引起的血型鉴定困难1例报道[J].中国现代医生,2008,46(22):130.
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