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布鲁氏菌病是一种由布鲁氏菌引发的传染性疾病，该病菌主要寄生在网状的淋巴细胞中，除了会攻击免疫系统外，还会引起菌血症，对动物的骨骼系统带来严重的损伤，导致母畜流产，生殖能力下降。现阶段接种疫苗是控制和预防布鲁氏菌病的主要途径，因此，相关的工作人员应重视牛羊布鲁氏菌疫苗的研究工作，加强对疫苗抗体的评估，为后续疫苗的研制工作夯实基础。 为了准确评价牛羊布鲁氏菌疫苗的接种情况，本文以我省某市牛羊布病接种的抗体疫苗情况为例，该市接种的是哈药六厂研发的S2疫苗，生产批号为201814、201716以及201717，另外，还使用了该企业生产的A19株疫苗，实验还调查了其他6个试验点疫苗的接种情况。该试验中肉牛标本数量为84头，肉羊为38头，可以充分观察抗体消长规律。另外，本试验中使用的检测试剂是PBRP。
二、牛羊布鲁氏菌免疫后抗体水平消长规律的实验方法研究
1、抗体的筛查分析
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需要对牛羊开展布病抗体的筛查工作，本实验中主要利用布病阴性场的方式进行免疫实验，每头牛均需要先口服500亿的S2活菌疫苗，每只羊则需要口服100亿的S2活菌疫苗，而A19疫苗则需要采用皮下注射的方式，本实验中对肉牛84头、肉羊38只进行了注射。在抗体筛查时发现，其中有50头牛对于A19疫苗免疫，36只羊对S2疫苗免疫。另外，为了保证实验结果的科学性，本实验还在该省份其他6个地区，也进行了牛羊布鲁氏菌疫苗的免疫实验。 2、样品的采集分析
在样品的采集过程中，在对肉牛采集时，除了在免疫前采集血液外，同时在接种后的15天、30天以及45天均分别采集了血液，并将血清进行分类；在对羊采集时，也采集了免疫前的血液，同时在免疫后的7天、15天、30天、45天以及135天均采集了血液，用于提取血清。橙子剥皮机
3、抗体的检测方法分析
本实验根据相关的标准，采用RBPT方式对抗体进行检测，首先工作人员取用布病虎红平板凝集抗原30μL放在玻璃平面上，然后再将其和30μL的血清混合均匀，观察其在4分钟内是否存在凝结的现象，一旦出现凝集的颗粒，则表示布病的抗原体呈现阳性。
另外，本实验中还运用了cELISA的方式进行检测，具体的检测方式如下，将带稀释的血清样本与标准
导热胶带对照的血清，采用了RBPT方式进行稀释，本实验中对其进行了10倍稀释，也就是将20μL的样本以及血清，将其加入到了180μL的稀释液中，同时使用50μL稀释液置于酶标板中，并利用6ml的PBST溶液用于溶解冷冻的抗体，将其添加到单克隆抗体溶液中，在室温下培育45分钟，然后去除所有孔的液体，再使用PBST进行洗涤，为了保证实验结果的精确性，应洗涤4次以上，每次不低于3分钟，加入HRP进行标记，也需要在室温下培育45分钟，然后再洗涤。以100μL/孔加入TMB溶液，令其显，10分钟后再加入反应终止液体，同时读取OD值。最后采用以下公式对血清进行判定：抑制率=对照样品OD450nm-试验样品OD450nm/对照样品OD450nm*100％，如果抑制率大于30％，则认为其呈现阳性，如果抑制率小于30％，则表明其为阴性。
4、抗体的试验结果分析
首先，肉牛A19疫苗抗体的检测情况分析，15天后，呈现阳性的肉牛数量约为39头，阳性率约为81％；30天后，呈现阳性的肉牛数量约为42头，阳性率约为87％；45天后，呈现阳性的肉牛数量约为37头，阳性率约为77％。
其次，牛免疫S2疫苗的抗体试验结果分析，15天后，呈现阳性的肉牛数量约为21头，阳性率约为58％；30天后，呈现阳性的肉牛数量约为18头，阳性率约为66.7％；45天后，呈现阳性的肉牛数量约为18头，阳性率约为50％。
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最后，羊免疫S2疫苗的抗体试验结果分析，7天后，呈现阳性的羊数量约为0头，阳性率为0％；15天后，呈现阳性的羊数量约为18头，阳性率约为47％；30天后，呈现阳性的羊数量约为20头，阳性率约为52％；45天后，呈现阳性的羊数量约为12头，阳性率约为31％；135天后，呈现阳性的羊数量约为0头，阳性率约为0％。再将样品进行了PBRT以及cELISA检测后，符合率均大于89％。
5、实验抗体的消长规律分析
从上述实验结果中可以看出，在对布病阴性牛羊进行免疫实验时，在注射A19后，15天、30天以及45天，抗体的检测率依次为81％、87％、77％；而采用S2口服疫苗后，抗体的阳性率依次为58％、66％、50％，羊的抗体则为47％、52％、31％。从上述数据可以看出，疫苗在注射30天后抗体的阳性率最高，而羊在7d以及135d均未检测出布病抗体。因此，相关的工作人员在判定疫苗效果时，必须要把握好时间差异，防止影响实验结果。
本实验主要布病疫苗进行了初步的研究，由于样本的数量较少，因此，仅仅得出了一些基本规律，牛羊可以通过口服S2疫苗预防布病，抗阳率在60％以上。因此，可以大范围推广使用。但是从实验结果中也可以看出A19疫苗具有更好的免疫效果，不仅保护时间较长，而且免疫效
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果也较好，但是却不适合在羊类中推广，因为免疫反应较强。因此，对于羊类而言，可以通过口服疫苗的方式来预防布病。
（作者单位：164199黑龙江省五大连池市畜牧站）
牛羊布鲁氏菌疫苗免疫后抗体水平消长规律分析
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