【摘要】本文对酶联免疫吸附法(清理河道淤泥设备elisa)测定花生油中的b1进行探究分析,总结酶联免疫吸附法(elisa)的方法与其他常用测定发进行比较探讨,并对酶联免疫吸附法测定黄曲霉毒素b1的方法进行了简单的阐述。 【关键词】酶联免疫吸附法 测定 黄曲霉毒素b1
黄曲霉毒素主要是由黄曲霉和寄生曲霉两者产生的次生代谢产物,其中最主要的是黄曲霉毒素封盾
b1,其主要存在于霉变的谷物、大米、果仁和花生等食物中,在食用油等制品中也常常能够发现黄曲霉毒素b1。目前常用的方法主要有薄层层析法(tlc)、液相谱法(hplc)和酶联免疫吸附法(elisa)[1]。用hplc虽然有着特异性好,灵敏度高和测定结果准确可靠这些优点,但是其技术要求高,仪器昂贵,不易于普遍使用。而tlc方法的样品处理过程比较繁锁,而且分析时间长,操作人员要直接接触毒素和大量有机溶剂,不适宜大批量样品的快速检测,主要是用来做半定量。因此,本文用酶联免疫吸附法测定黄曲霉毒素b1,并对酶联免疫吸附方法进行了探讨和分析。 一、酶联免疫吸附法
饱和聚酯免疫分析技术在黄曲霉毒素分析过程中是最为引人注目的,因为它们具有高度的灵敏度和选择性,而且具有快速和大批量检测的能力。竞争性酶联免疫吸附试验(elisa)从1995年起已成为aoac检测黄曲霉毒素的官方方法。elias根据具体操作的不同还可分为直接法和间接法。
擦车工具(一)直接方法
操作程序如下:(1)包被:每孔加100μl适当稀释度的包被抗原b1-bsa(黄曲霉毒素一牛血清白蛋白),于37℃放置3h。(2)洗涤:用0.0lmol/l的pbst(磷酸盐/柠檬酸盐缓冲液,ph为7.4)洗涤3次,所制备的微孔elisa板放置于4℃下备用,保存期6个月。(3)加样:每孔先加afb1标准或样品提取液50μl,再加适当稀释度的b1抗体-hrp复合物(b1抗体-辣根过氧化物酶)50μl,于适当温度反应一定时间,再按上述方法洗涤。(4)显:每孔加反应底物溶液100μl,于适当温度反应一定时间。(5)终止反应:每孔加一定浓度的硫酸溶液。最后放入酶标仪中检测。joanna leszczynska内网审计等人采用此法检测了奶酪和酸奶酪中黄曲霉毒素b1和m1以及黄曲霉毒素总量。