细菌基因组的提取——CTAB法
准备试剂：
10% 的SDS
20 mg/ml 蛋白酶K（分装好后保存于-20度）
5 M NaCl
24:1 氯仿：异戊醇
25:24:1 酚：氯仿：异戊醇
异丙醇
70%乙醇
3M 乙酸钠（pH5.2）
50ml 的离心瓶
实验流程：
1、 将过夜培养的阴沟肠杆菌（Amp抗性）种子菌按1%的接种量转接于一瓶100mL 液体LB培养基中，37度，200rpm 培养月2h ,使其进入对数期（OD600为0.6）。
2、 离心收集菌体（4000×g,10min 例如在JA-20转子的离心机上是6000rpm），倒掉上清。
3、 收集好的菌体用9.5 mL TE缓冲液重悬（重悬的时候要轻柔），并加入0.5 mL 10%SDS和50 μL 20mg/mL 的蛋白酶K，轻轻的颠倒试管是溶液混合充分，于37度水浴1h。（处理完后的溶液应该很粘稠，不需要用溶菌酶预先处理）
4、 向上步的处理液中加入1.8 mL 5 M NaCl，充分混匀。（这一步至关重要，因为在室温若是盐离子浓度下降至0.5M时，就会形成CTAB-核酸沉淀，CTAB能与细胞壁碎片、变性的蛋白质及多糖形成复合体，而核酸仍然存在于溶液中） 5、 向上步溶液中加入1.5mL CTAB/ NaCl 溶液，充分混匀后于65度水浴10min。
6、 用等体积的氯仿：异戊醇抽提，混合充分后，室温6000×g离心10min（JA-20转子的离心机上是7000rpm）
7、 将上层水相用大口径的移液将其转移到另一干净管中。（若是基因组含量很高的话上层水相将会非常粘稠，可以另外再用氯仿：异戊醇或是酚：氯仿：异戊醇进行抽提）
8、 用0.6倍体积的异戊醇沉淀收集的上清（加入异丙醇后混合充分静置约10min），这时会出现白絮状沉淀，将白絮状沉淀转移另一干净的EP管中，用1 mL 70%乙醇清洗。
9、 10,000×g（JA-20转子的离心机上是9900rpm）离心5min,去掉上清，沉淀用真空冷冻机抽干，溶于4 mL TE缓冲液（这一过程可能要很长一段时间—几个小时甚至是过夜，也可以吧它放于60度以加快DNA的溶解）
小提：
1、生长到对数期离心收集菌体
2、收集好的菌体用567μL TE缓冲液重悬（重悬的时候要轻柔），并加入3μL 10%SDS和3 μL 20mg/mL 的蛋白酶K，轻轻的颠倒试管是溶液混合充分，于37度水浴1h。
3、向上步的处理液中加入100μL 5 M NaCl，充分混匀。
4、向上步溶液中加入80 μL CTAB/ NaCl 溶液，充分混匀后于65度水浴10min。
5、用等体积的氯仿：异戊醇抽提，混合充分后，室温6000×g离心10min（JA-20转子的离心机上是7000rpm）
6、上清移于另一干净的EP管中，用等体积的酚：氯仿：异戊醇进行抽提，离心5min。
7、用0.6倍体积的异戊醇沉淀收集的上清（加入异丙醇后混合充分静置约10min），这时会出现白絮状沉淀，将白絮状沉淀转移另一干净的EP管中，用1 mL 70%乙醇清洗。
8、10,000×g（JA-20转子的离心机上是9900rpm）离心5min,去掉上清，沉淀用真空冷冻干燥机抽干，溶于100 μL TE缓冲液
常用试剂的配制
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1. 1 mol/L Tris-HCl 溶液（pH 8.0）：称取 12.191 g Tris，溶于 80 mL 双蒸水 中，用浓盐酸调 pH 8.0，定容至 100 mL，高压灭菌 15 min，室温保存。 2. 50 mmol/L Tris-HCl 溶液（pH 8.0）：称取 0.606 g Tris，溶于 80 mL 双蒸水中，用浓盐酸调 pH 8.0，定容至 100 mL，高压灭菌 15 min，室温保存。
3. 0.5 mol/L EDTA 溶液（pH 8.0）：称取 18.61 g Na2EDTA·2H2O 溶解于 80 mL 水中，磁力搅拌器上剧烈搅拌，加入 NaOH 固体约 2 g，再滴加 NaOH 溶液调 pH 至 8.0，定容至 100 mL，高压灭菌15 min，室温保存。
4. TE 缓冲液（10 mmol/L Tris，1 mmol/L EDTA，pH 8.0）：于 80 mL 双蒸水中，加入 1 mL 1 mol/L Tris-HCl 溶液，0.2 mL 0.5 mol/L EDTA 溶液，调 pH 至 8.0，加水定容至 100 mL，高压灭菌 15 min，室温保存。
5. 20 mg/mL 蛋白酶 K：称取 0.2 g蛋白酶 K溶于 10 mL 双蒸水中，分装贮存于 -20℃。
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6. 5 mol/L NaCl 溶液：称取 29.22 g NaCl，加入 80 mL 双蒸水，搅拌溶解后，定容至
100 mL，高压灭菌 15 min，室温保存。
7. CTAB/NaCl 溶液（0.7 mol/L NaCl，10％CTAB）：称取 4.1 g NaCl，溶于80 mL 双蒸水，磁力搅拌器搅拌的同时，缓慢加入 10 g CTAB，必要时可以 65℃加热促溶，冷却至室温后，加水定容至 100 mL，高压灭菌 15 min，室温保存。
8. 3 mol/L 乙酸钠溶液（pH 5.2）：称取 40.8 g CH3COONa·3H2O，溶于 80 mL双蒸水中，用乙酸调校至 pH 5.2，加水定容至 100 mL，高压灭菌 15 min，室温保存。
9. 苯酚/氯仿/异戊醇（PCI，25∶24∶1）：将重蒸酚、氯仿、异戊醇按体积比 25∶24∶1 混合，上层以 0.1 mmol/L Tris-HCl（pH 8.0）溶液液封，置棕瓶中 4℃保存。
10. 氯仿/异戊醇：96 mL 氯仿与 4 mL 异戊醇混合，4℃保存。
11. 0.1 mol/L CaCl2 溶液：称取无水 CaCl2（分析纯）2.77 g，加入 200 mL双蒸水充分溶解，定容至 250 mL，高压灭菌，4℃保存。
12. 0.5 mol/L CaCl2 溶液：称取无水 CaCl2（分析纯）13.85 g，加入 200 mL双蒸水充分溶解，定容至 250 mL，高压灭菌，4℃保存。
13. 氨苄青霉素（Amp）储存液（100 mg/mL）：称取氨苄青霉素 1 g，溶于10 mL 水中，过滤除菌，分装贮存于 -20℃。
14. 羧苄青霉素（Car）储存液（100 mg/mL）：称取羧苄青霉素 1 g，溶于 10 mL 水中，过滤除菌，分装贮存于 -20℃。
15. IPTG 储存液（100 mmol/L）：称取 IPTG 0.74 g，溶于 10 mL 水中，过滤除菌，分装贮存于 -20℃。
16. X-gal 贮备液：将 X-gal 溶于二甲基甲酰胺中，配成 20 mg/mL 浓度的溶液，装入玻璃瓶或聚丙烯管中，装溶液的管应以锡铂包裹以防见光使X-gal 受到破坏，应贮存于 -20℃保存。该溶液不必过滤除菌。
17. 10% SDS 溶液：称取 10 g SDS（分析纯）溶于 100 mL 双蒸水中，室温保存。
18. 10% 过硫酸胺（APS）：称取 0.1 g过硫酸胺溶于 1 mL 双蒸水中，现配现用。
19. 50 × TAE电泳缓冲液：
Tris 242 g
EDTA (0.5 mol/L，pH 8.0) 100 mL
冰乙酸 57.1 mL
加双蒸水定容至 1000 mL。
服务器硬件监控20. SDS-PAGE 蛋白电泳试剂
1). 30% 聚丙烯酰胺溶液：
丙烯酰胺 30 g
亚甲双丙烯酰胺 0.8 g
溶解后定容至 100 mL，装于棕瓶，4℃保存。
汽车软管 2). 2 × 加样缓冲液：
1 mol/L Tris·HCl (pH 6.8) 10 mL
甘油 20 mL
SDS 4 g
溴酚蓝 0.005 g
β-巯基乙醇 10 mL
加双蒸水定容至 100 mL，分装后 -20℃保存。
3). 蛋白电泳缓冲液（4 ×）：
Tris 1.514 g
甘氨酸 7.065 g
10% SDS 5 mL 定容至 500 mL。
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4). 4 × 分离胶缓冲液：1.5 mol/L Tris-HCl （pH 8.8）
5). 4 × 浓缩胶缓冲液：0.5 mol/L Tris-HCl （pH 6.8）
6). 染液：
考马斯亮蓝 R-250 0.25% （w/v）
甲醇 45%（v/v）
冰醋酸 10%（v/v）
7). 脱液I：甲醇∶水∶冰醋酸 = 40∶53∶7
8). 脱液II：甲醇∶水∶冰醋酸 = 5∶88∶7
21. ELISA 分析试剂
1). 包被缓冲液（0.1 mol/L Na2CO3，0.1 mol/L NaHCO3，pH 9.6）：
Na2CO3 1.06 g
NaHCO3 0.84 g
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溶于 80 mL 双蒸水中，调 pH 9.6，定容至 100 mL，高压灭菌室温保存。
2). 磷酸盐缓冲液（10 × PBS）（1.37 mol/L NaCl，0.027 mol/L KCl，0.1 mol/L Na2HPO4，0.02 mol/L KH2PO4，pH 7.4）：
NaCl 40 g
KCl 1 g
Na2HPO4 7.1 g
KH2PO4 1.2 g
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