免疫组化实验步骤及配方

1. 多聚甲醛灌流取材，多聚甲醛后固定，30%多聚糖溶液沉糖;

2. 冰冻切片（1d-14d脊髓>=20μm;14d-28d>=10μm;DRGd=10μm）

3. 0.01MPBS洗10min×3次;

4. 1NHCL暴露抗原30min；

5. 去离子水洗，0.01MPBST洗10min×实时调试3次；

6. 3%双氧水(0.01MPBS配制)洗10min，灭活内源性HRP；

7. 0.01MPBST洗10min×3次；

8. 5%-10%血清封闭30min（0.01MPBST配制）；

9. 一抗过夜，一抗用PBST稀释；

10. 0.01MPBS洗10min×3次，二抗3孵育小时；

11. 0.01MPBS洗10min×3次，HRP-亲和素3小时；

12. 0.01MPBS洗10min×3次，DAB显12-18min。

免疫组化常用试剂配制

1. 0.1MPB:14.5gNa2HPO4·12H2O

500mLH2O

1.5gNaH2PO4·2H2O

2. 0.1MPBS:500mL0.1MPB

45gNaCl

3. 0.01MPBST:100mL0.01MPBS

10滴TritonX-100

4.INHCL:盐酸：水石墨冷铁=1：10

5.4%多聚甲醛：13.6gKH2PO4

3.6gNaOH

40g多聚甲醛

1000mLH2O

注：1).需要60°C加热溶解，过滤使用；

2).多聚甲醛每次比需要多称10g，以弥补后面过滤的损失；

3).现将多聚甲醛溶于1000mL水中，然后一边加热搅拌一边缓慢加入多聚甲醛的助溶剂NaOH导丝男士，待NaOH和多聚甲醛都完全溶解后再加入KH2PO4，溶后过滤备用。

6.DAB液：以0..1MPB多媒体中央控制器糖果装配制，DAB浓度0.05%，H2O2浓度0.03%。

注：1).H2O2临用时再加；

2).用DAB染后用0.01MPB洗。

7.30%马氏体耐热钢蔗糖：150g蔗糖

500mL4%多聚甲醛

注：可同时沉糖后固定。

8.封闭液：10%山羊血清（做免疫荧光时另加0.1%BSA）。

本文发布于:2024-09-24 16:35:52，感谢您对本站的认可！

标签：过滤加热血清免疫组化加入溶解溶液

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