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在我国艾滋病已经进入了快速增长期，疫情形势严峻，政府和社会各界对此高度重视，正在积极地投入大量人力、物力和财力进行地区疾病预防控制机构建设，并不断加大投入力度建全和完善艾滋病疫情监测网络，其中对艾滋病的检测是这些工作的基础。在我国经国家认证的筛查实验室使用的主要筛查方法是酶联免疫方法(汽车烧甲醇
ELISA)。 自1971年Engvall等建立了检测可溶性物质的酶联免疫吸附实验和1972年Rubenstein等建立了均相酶免疫测定技术以来，酶联免疫检测方法进展很快，是目前我国在临床检验领域最主要的免疫检测技术由于酶联免疫检测是以底物显作为反应的检测对象，因此作为微孔板比测定分析仪器的酶标仪也就成为酶联免疫实验的重要工具，也是艾滋病检测必不可少的最基本检测设备。
酶标仪的基本工作原理
酶标仪是用来测定被检测物光密度（简称OD值）的精密分析设备。利用酶标仪进行酶联免疫检测的基本工作原理是朗比定理（Bouger-lambert-beer）。
光是电磁波，波长100nm-400nm称为紫外光，400nm-750nm之间的光可被人眼观察到，更长的波长称为红外光。光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。检测单位用OD值表示，OD是optical density （光密度）的缩写, 表示被检测物吸收掉的光密度，OD=log(1/trans), 其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-lambert-beer法则，OD值与光强度成下述关系： OD=logI0/I，其中I0为在检测物之前的光强度，I为从被检测物出来的光强度。
OD值由下述公式计算：
E=OD=C×D×E
其中：C为检测物的浓度，D为检测光从被检测物穿过的光径，E为摩尔因子。
从上述公式中可以看到，对于同一物质在酶标孔中进行检测时，光径和摩尔因子都为常数，OD值与被检测物的浓度成正比。
在临床酶联免疫检测实验中，对于定量检测，需要作出一个标准曲线，根据被检测物的OD值与其浓度成某种数学关系，可以在标准曲线上得到被检测物的浓度；对于定性检测，通过相应的质控品计算出来临界OD值，将被检测物的OD值同临界值来比较，可以得到被检测物的阴阳性结果。
现在市场上国产和进口的酶标仪种类较多，但其基本功能不外乎是OD值测定，所不同的是测定波长范围、吸光度范围、光学系统、检测速度、温度控制、数据分析、结果打印、软件功能等方面的差异，下面分别做一简单介绍。 一、测定波长：
酶联免疫测定所使用的波长是400nm至750nm的可见光。每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长就会造成结果的不准确，因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行测量，称为测量波长。在临床实践中，各种试剂的操作多采用单波长测量。
但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为消除这种非特异吸收，我们还可
以选择一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测光吸收就是非特异性的光，检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收，也即为双波长测定。
图1：测定波长和参照波长示意图
一般酶标仪的测定波长在400nm-750nm之间，完全可以满足酶联免疫的显测定。目前国内常见的酶联免疫试剂盒中，使用TMB显系统，测量波长为450nm，使用OPD显系统，测定波长为492nm。参照波长多为620nm或630nm和405nm，每种酶标仪都具有以上4种波长的滤光片，并配有放置滤光片可自动转换的部件，更可同时装6－8个滤光片，其
年龄识别它波长滤光片可根据自己的需要选择。
抗生素制作方法低于400nm波长的光是紫外光，高于750nm波长的光是红外光，这两个波长范围内的光在酶联免疫实验中基本无用。酶标仪将检测波长的范围延伸至紫外光检测范围，它也只是将酶标仪应用到其它检测领域。目前在国际国内市场上还没有需紫外光或红外光检测的酶联免疫试剂盒。
因此，作为临床领域和疾病控制和防疫领域的实验室，选择400nm至750nm的检测波长范围基本可以满足检测要求。
二、测量的光学系统和读板速度
酶标仪检测使用的一般是卤钨灯，垂直光路单通道或多通道检测，多通道多为八或十二通道采用硅光管或光导纤维，除测定通道外，有的酶标仪还会有一个参比通道。
图2：酶标仪的光学系统示意图
单通道和多通道光学系统各有优劣。单通道由于对所有酶标孔的检测均使用同一光源进行测定，避免了因通道不同导致的数据差异，因此单通道酶标仪上也就没有所谓的通道差，使仪器的精确性和重复性更好。多通道由于使用了八个或者十二个检测光源通道，使得酶标仪的读数速度较快，但是多通道不可避免地存在通道差。
最初设计的单通道酶标仪读板速度长达2分钟以上，但现在随着工艺水平的提高，单通道酶标仪单波长的读板速度可以达到30秒以内，与多通道酶标仪已无显著差异；同时考虑到无通道差的优点，单通道酶标仪受到不少实验室的欢迎。
光学系统是酶标仪至关重要的组成部分，光源灯的稳定及寿命、光学系统功能如何，都直接影响仪器的吸光度范围、线性度、精密度和准确度，在这些性能指标方面进口设备要比国产设备好一些。
三、吸光度范围
目前国内几个主要诊断试剂制造商的艾滋病检测试剂盒中，参与临界值计算的阴性质控品的吸光度值都不大于0.1OD, 国外试剂盒的阴性质控品吸光度在0.25以下，这就是说，试剂盒的临界值一般都不超过0.5OD，因此，酶标仪的吸光度测定范围通常在0－3.0之间即可满足艾滋病检测工作中酶联免疫的测定要求。
一般地来讲，符合以下指标的仪器应该算是较精密的仪器了：在波长范围400～750nm,吸光度范围为0－2.5OD时，线性<±0.5％及0.005OD；在550nm、492nm、450nm、405nm下吸光度为1OD时，精密度<±1％及0.005OD。
四、读数方法
近年来，国际上的酶标仪制造行业对读数方法也有了改进。一般来讲，传统的读数方法是测定酶标孔时仅进行一次的测定，现在已经有厂家对这种方法进行了改进，使用所谓的扫描测定，也叫中心定位测定。这种测定方法是测定酶标孔时，沿着酶标孔的直径方向均匀地连续测定20－40次，然后取中心的几个测定值的均值作为此酶标孔的测定值。这种测定方法可以消除检测时因测定光不是从酶标孔中心位置穿过而造成的光径误差。
图3：中心定位示意图。（检测光从酶标孔不同位置穿过，产生的光径偏差d1和d2，因此会带来实验结果的误差）
五、温育功能
温育功能是指酶标仪本机能按要求自动精确地控制放置在仪器内酶标板的温度，使得酶联免疫测定中各孔板条的温育过程可在仪器内部完成，而现有的酶联免疫试剂盒均为终点法，在酶标仪测定之前由终止液来终止反应，因此温育功能只是在科学研究领域中进行动力学实验时才有用。
目前，只有少部分品牌酶标仪具有此功能。作为实验是否选择，则可根据自己实验室的条件及需要来决定。一般来讲，具有温育功能的酶标仪价格非常贵，而常规实验室一般都配备有温育设备，因此建议实验室在没有特殊要求时，不用考虑此项功能。
六、软件功能
考虑到目前和未来的实验室数据及资料的网络化管理，特别是对于具有较多管理功能的实验室来说，越来越多的实验室将酶标仪的软件功能作为选购酶标仪的重要考虑因素之一。软件功能的确是酶标仪的一个非常重要的功能。如果硬件方面区别不大，则软件就成为判定酶标仪优劣的重要指标。软件还可延展酶标仪的功能，弥补硬件本身性能的不足，对于用户来说，好的软件功能对实际工作会有较大的帮助比如艾滋病筛查实验室进行HIV的酶联免疫测定时，常会遇到实验有效性多重判定的问题。由于对HIV的检测非常严格，往往采用多个质控品（阴、阳性对照品），并且对控制品采用不合格品剔除的方法，这就需要有一功能强大的软件做支持。
软件的语言界面也是一个重要问题。进口酶标仪通常采用的是英文的人机对话的软件，这对于某些基层实验室可能会存在语言方面的困难，从而难以最大限度地发挥酶标仪的功能。
市场上目前较为流行的是全中文、易操作、Windows界面的控制软件，这类软件功能强大，并且考虑到国内用户的日常工作的各方面的需求。在实验室选择酶标仪的软件功能时，可以考虑软件是否具有以下方面的功能：
1.测量程序编辑是否全面：要包括：
1.1定性分析：可设置4个临界值。
1.2定量分析：可进行点到点、线性回归、三次方曲线、四参数回归等曲线拟和；线性坐标、半对数坐标、对数坐标均可使用。
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1.3同一批号试剂标准曲线可储存并重复使用。
1.4单板多项测试功能，同一酶标板最多可同时进行六种测试。
2.数据输出形式是否实用多样，最好具有以下的输出方式
2.1中文化验单打印，各种项目可任意组合。
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2.2矩阵式打印，可同时打印出样品编号、OD值、定性结果、浓度值等数据。
2.3列表式打印，便于实验记录的存储，无需手工誊写。
2.4其它特殊打印方式，如血站打印，自动判定血样质量，并列表打印。
3.室内质控及室间质评功能，常规的情况下包括：
3.1进行室内质控（“L－J法”和“即刻法”）
3.2编绘并打印室内质控报告和质控图
3.3编写并打印室间质评报告，进行批间变异、批内变异的计算
4.数据库管理是否强大：
如是否具有测量样品编号、病人姓名、住院号等对被测数据的管理，是内置软件还是外配电脑？是否能够对历史数据进行查询和打印等等。
5.统计功能
它是你实验室管理的强有力的帮手，同统计功能，你可以实现检验人员的工作量统计，不
同测量项目工作量统计，临床送检医师送检量统计等等。
6.实验有效性判定（艾滋病检测应用方案）
艾滋病的检测结果判断比其它项目要复杂。比如Organon的HIV检测试剂盒就是一个典型的代表，它在出具结果之前，需要进行以下的判断：所有的阴性质控品OD值应大于0.25，而且每个阴性质控品的OD值应处于均值的60％－140％之间，否则应当去除；剩余的阴性质控品数目应当大于2个，否则实验无效；1号和2号阳性质控品的OD均值应分别大于0.4，否则实验无效。如果没有软件的帮助，需要进行多个项目的循环计算和判定，容易出错，给检测结果判定带来了困难。
因此，针对艾滋病检测的客户解决方案的软件应当包括以下的功能
6.1 应当有4－6组的实验有效性判定公式。
6.2 计算公式内应当包含对质控品进行循环的均值计算、对比和舍弃的基本功能。
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