三、针对本课程涉及的各种食品安全危害因子，任选一种建立一种基于免疫学的快速检测方法。 答：高毒有机氯杀虫剂DDT是较早被大量使用的农药，其化学性质较稳定，虽然生产和使用已被禁止，但部分地区仍存在较高的该农药的残留。针对高毒有机氯杀虫剂DDT制作斑点金免疫层析试纸条，可检测食品中所含有的有机氯农药DDT残留。动员剂
DDT斑点金免疫层析试纸条制备方法：
因为DDT是小分子，无氨基、羧基和羟基，无法直接与大分子蛋白载体连接，所以首先需要制备得到DDT半抗原。通过化学方法，非苯环上的氯原子可以被取代、水解、氧化变成羧酸基团，经过萃取和干燥将半抗原从反应体系中分离出来，便可以得到DDT的半抗原产物。网络游戏防沉迷系统
（2）完全抗原的制备
取DDT半抗原产物，通过碳二亚胺（EDC）法，与牛血清蛋白（BSA）结合，牛血清蛋白过量，保证半抗原与载体蛋白充分结合，并经过透析纯化，去除未连接的DDT半抗原和牛血清蛋白，得到DDT-牛血清蛋白偶连物，低温保存。将其注射到小鼠体内，免疫一定时间，抽取血清，低温保存。通过相同方法，制备得到DDT半抗原与卵清蛋白（OV A）偶联物。
（3）DDT单克隆的制备
从血清中取出多种脾细胞，和肿瘤细胞融合，培养一段时间，分离获得含有肿瘤-脾细胞融合细胞，分开培养获得各种单克隆抗体。 将DDT-卵清蛋白偶连物吸附在载体上，加入血清，使得抗原与抗体结合，清洗去除未结合的抗体，加入酶标记的抗牛血清蛋白抗体，使之与抗原抗体结合，清洗去除未结合的酶标抗牛血清蛋白抗体。加酶作用底物，显。到对应的抗DDT单克隆抗体，低温保存。
（3）二抗抗体的制备
将DDT的单克隆抗体注射到兔子体内，一段时间后，抽取血清，分离获得二抗抗体（抗DDT-牛血清蛋白偶连物单克隆抗体的抗体），低温保存。
（4）将DDT单克隆抗体-胶体金标记物冻干到胶体金垫上 将DDT单克隆抗体-胶体金标记物加入到胶体金垫中，冷冻干燥，得到DDT单克隆抗体-胶体金标记物冻干的胶体金垫。在检测线T线上固定DDT-牛血清蛋白偶连物作为抗原，在质控线C线上固定DDT单克隆抗体的二抗抗体。
无压锅炉（5）检测准确性
向微孔中加入100μL 已知DDT浓度的溶液及对照组，混匀，室温下培育3min。吸取70μL 溶液滴至加样孔上，反应10min。质控线C线出现红或者浅红，说明试纸可用，测试线T线浅或不出现，则说明有对应抗原。根据示意图判定结果。
（6）样本检测限
在空白蔬菜、牛奶样本中分别添加DDT标准品至质量浓度为0、10、20、30μg / L ，用5 批试纸条进行检测，每个浓度重复3次，根据实验结果确定样本检测限。
（7）准确性
贝克曼梁法根据《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》（GB 2763-2019）中，规定蔬菜中总DDT残留量低于20μg/kg。农业部文件要求：以假阳性率和假阴性率表示胶体金免疫层析法的准确性。取经过仪器确证的50 份阴性蔬菜样品（质量浓度小于20μg/kg）与50 份阳性蔬菜样品（质量浓度大于20μg / kg ），用胶体金免疫快速检测试纸条检测DDT的残留量，计算假阳性率和假阴性率。按照规定：试纸条假阳性率应小于5%，假阴性率应为0。若该试纸达到以上要求，则说明该试纸条制备成功。
（8）试纸条的特异性
远程控制系统
防护套分别配制一定浓度的五氯硝基苯、等药物，用胶体金免疫快速检测试纸条进行检测，重复测定3次，判断试纸条的特异性。
（9）试纸条的稳定性
将试纸条保存于4℃下，每月检测试纸条的准确性，连续测定1年。根据实验结果判定试纸条的稳定性。
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