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2018 年第 5 卷第 34 期2018 Vol.5 No.34
临床医药文献杂志
Journal of Clinical Medical
郑 熙，于 珊
（抚顺市药品检验检测中心生物室，辽宁 抚顺 113006）
【摘要】目的 探讨分析牛黄解毒片的微生物限度检验方法。方法 分别采用常规法、培养基稀释法、离心沉淀结合薄膜过滤法进行牛黄解毒片的微生物限度验证，比较三种方法的大肠埃希菌等五种试验菌株的回收率。结果 三次独立的平行实验中，三种验证方法的白念珠菌、黑曲霉菌以及大肠埃希菌的 回收率均高于70%，而离心沉淀结合薄膜过滤法的金黄葡萄球菌和枯草杆菌的回收率高于70%，要高于常规法、培养基稀释法。结论 离心沉淀结合薄膜过滤法能有效消除牛黄解毒片的抑菌活性，明显提高回收率，可作为牛黄解毒片的微生物限度检验方法。
【关键词】牛黄解毒片；微生物限度检验；验证方法
【中图分类号】R446 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-8242.2018.34.184.02
牛黄解毒片属于传统的中成药，具有清热解毒的功效。临床常用于火热内盛引起的咽喉肿痛、牙龈肿痛、目赤肿痛、口舌生疮等症状的[1]。牛黄解毒片主要是由牛黄、雄黄、大黄、黄岑、桔梗、石膏、甘草以及冰片等8味中药组成的，而其中牛黄、大黄和黄岑的3种中药均具有较强的抑菌作用，能抑制污染的微生物生长，所以在使用常规进行微生物限度检查时，结果往往受到影响而不能反映供试品的真实受污染程度[2]。因此，根据《中国药典》2010年版附录的规定，在微生物限度检查时当供试品具有抑菌活性时需要采用适当的方法消除其抑菌活性[3,4]。本次研究选取三个厂家的牛黄解毒片样品分别采用常规法、培养基稀释法、离心沉淀结合薄膜过滤法处理后加入大肠埃希菌、金黄葡萄球菌等五种试验菌株，以分析不同微生物限度验证方法的效果，现报告如下。
1 试验材料
1.1 仪器
中央排水系统
广州省医疗器械厂的LRH-150B 生化培养箱；杭州泰林科技有限公司的HTY-2000A 薄膜过滤器；江苏无锡电化教具厂的JLQ-SI 菌落计数器；天津医疗器械厂的离心机。1.2 试剂与培养基
中国药品生物制品检定所的营养琼脂培养基（080304）、改良马丁琼脂培养基（080707）、玫瑰红钠琼脂培养基（080803）、营养肉汤培养基（071008）。pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液（北京三药）、0.9%氯化钠溶液（沈阳市新化试剂厂）。
1.3 试验菌株与供试品
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中国药品生物制品检定所的大肠埃希菌[CMCC （B ）44102]、枯草芽孢杆菌[CMCC （B ）63501]、
金黄葡萄球菌[CMCC （B ）26003]、白念珠菌[CMCC （F ）98001]、黑曲霉[CMCC （F ）98003]。供试品为牛黄解毒片（河南康祺药业股份有限公司，Z41020541，编号1）、牛黄解毒片（吉林省鑫辉药业有限公司，Z22022872，编号2）、牛黄解毒片（吉林万通药业集团梅河药业股份有限公司，Z22022301，编号3）。该边
2 方法与结果
2.1 制备菌液
取金黄葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌分别接种至营养肉汤培养基中经35℃培养18～24小时，然后分别取培养物使用0.9%无菌氯化钠溶液进行稀释至50～100 cfu/mL 的菌悬液备用。取白念珠菌接种至改良马丁培养基中经25℃培养18～24小时，取适量培养物使用0.9%无菌氯化钠溶液进行稀释至50～100 cfu/mL 的菌悬液备用。取黑曲霉菌接种至改良马丁琼培养基经25℃培养5～7天，然后取适量培养物使用0.9%无菌氯化钠溶液洗脱孢子，吸取霉菌孢子悬液，再使用0.9%无菌氯化钠溶液倍量稀释至霉菌数50～100 cfu/mL 的孢子悬液备用。
2.2 制备供试液
分别取供试品10 g ，加入100 mL 的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液混匀制备成1:10的供试液备用。
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2.3 验证方法2.
3.1 试验组
家居智能系统①常规法。取1 mL 的1:10供试液分别和五种试验菌株50～100 cfu 加入平皿中，然后注入15～20 mL 的营养琼脂培养基，按照规定进行培养和菌落计数 验证。
②培养基稀释法。取1 mL 的1:10供试液分成五份
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