长链非编码RNA MIAT在不同分子亚型乳腺癌中的表达特点及与临床特征的关系研究 gps信号放大器吴艾冉;吴景;李晓洁;张兆璇;王悦;何杰
【摘 要】目的 探究长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)MIAT在乳腺癌不同分子亚型中的表达情况,并分析其表达水平与乳腺癌临床病理特征之间的关系.方法 收集2015年5月至2017年9月在我院确诊的212名乳腺癌患者的乳腺癌组织、癌旁组织与外周血,行实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-PCR)检测组织与血浆中lncRNA MIAT表达水平.比较lncRNA MIAT在癌与癌旁组织中的表达水平,并分析其与乳腺癌分子分型、TNM分期、肿瘤直径、腋窝淋巴转移数目等临床病理特征之间的关系.结果 lncRNAMIAT在乳腺癌组织中的表达水平(4.23±1.06)明显高于癌旁组织(2.14±0.63),且差异具有统计学意义(P<0.05).此外,癌组织与血浆中lncRNA MIAT表达水平与肿瘤分子分型、TNM分期、肿瘤直径、腋窝淋巴结转移数目等均显著相关(P<0.05),而与患者年龄、BMI、吸烟史、饮酒史、生育史、哺乳史等因素无关(P>0.05).结论 lncRNAMIAT表达水平与乳腺癌分子分型、TNM分期、肿瘤直径及腋窝淋巴结转移数等均显著相关,对患者的预后评估具有潜在价值.过滤网篮
【期刊名称】《标记免疫分析与临床》
【年(卷),期】2018(025)011
【总页数】5页(P1703-1706,1739)
【关键词】乳腺癌;长链非编码RNA;MIAT;分子分型;临床特征
【作 者】吴艾冉;吴景;李晓洁;张兆璇;王悦;何杰
【作者单位】安徽省肿瘤医院病理科,安徽 合肥230001;安徽省肿瘤医院病理科,安徽 合肥230001;安徽省肿瘤医院病理科,安徽 合肥230001;安徽省肿瘤医院病理科,安徽 合肥230001;安徽省肿瘤医院病理科,安徽 合肥230001;安徽省肿瘤医院病理科,安徽 合肥230001
汽车投影【正文语种】中 文
乳腺癌是当今危害女性健康的恶性肿瘤之一，2014年我国乳腺癌病死率达到9.90/10万［1］。近年来随着医疗水平的提高，乳腺癌的总体5年生存率有所提高，但某些分子类型乳腺癌的预后仍不尽如人意，尤其是基底细胞型乳腺癌［2］。近年来研究发现，长 链 非 编 码 RNAs（long noncoding RNA，lncRNAs）可通过表观遗传、转录及转录后翻译等多种途径参与乳腺癌的发生、发展及侵袭转移等过程，通过药物靶向作用于这些lncRNAs则可能成为乳腺癌新的途径［3-5］。lncRNA MIAT是位于22号染体长臂的lncRNA，已被证实与多种肿瘤如肺腺癌、慢性淋巴细胞白血病、卵巢癌等的发生相关，但目前尚无关于lncRNA MIAT与乳腺癌的相关报导［6-8］。本研究通过对212名乳腺癌患者的lncRNA MIAT表达水平与乳腺癌分子分型等临床病理特征进行分析，旨在为乳腺癌的靶向与预后评估提供新的思路。
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材料和方法
1 研究对象的纳入与基本资料采集
选取2015年5月至2017年9月在我院确诊的乳腺癌患者212例，其中Luminal A型53例、Luminal B型81例、人类表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor2，HER2）过表达型30例、基底细胞型48例，Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌114例、Ⅲ～Ⅳ乳腺癌98例。患者平均年龄45.2±3.2岁。乳腺癌分子分型的依据来自术中切除的肿瘤组织的免疫组化结果［9］。乳腺癌的分期参照美国肿瘤联合会（American Joint Committee on Cancer，AJC
C）第8版乳腺癌分期系统［10］。由研究人员记录患者的年龄、体重指数（body mass index，BMI）、吸烟史、饮酒史、生育史、哺乳史等基本信息。研究对象均排除血液系统疾病、急慢性感染、心血管疾病、其他的良恶性肿瘤及自身免疫性疾病等。本研究的开展经医院伦理委员会批准，所有纳入对象均签署了项目知情同意书。
2 lncRNA MIAT表达水平的检测
由专业医护人员收集患者的癌组织、癌旁组织并采集外周血。组织RNA的提取：取50mg癌/癌旁组织，放入研钵充分研磨后，加入1mL Trizol试剂（中国Takara公司）洗涤碎末，洗涤液吸入无酶EP管中，充分离心洗涤后得到组织总RNA；血浆RNA的提取：按照血浆RNA提取试剂盒（中国Bioteke公司）说明书步骤进行总血浆RNA提取。取上述提取的RNA，使用去除基因组逆转录试剂盒（中国Takara公司）逆转录为cDNA，进行实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，RT-PCR）。RT-PCR按照SYBR GREEN（中国康为世纪公司）说明书进行。MIAT和GAPDH引物序列见表1。采用2-ΔΔCt法计算lncRNA MIAT的相对表达量，△Ct值＝样本Ct值-GAPDH Ct值。
表1 MIAT和GAPDH引物序列RNA 引物序列MIAT上游TTTACTTTAACAGACCAGAA MIAT
下游 CTCCTTTGTTGAATCCAT GAPDH上游 AGAAGGCTGGGGCTCATTTG GAPDH下游GCAGGAGGCATTGCTGATGAT
3 统计学处理
本研究应用SPSS 20.0软件进行统计学分析。正态分布资料以均值±标准差（±s）表示。两组间和多组间均数比较时分别采用两组独立样本t检验和单因素方差分析。率的比较采用卡方检验。本次实验的检验水准为α＝0.05，P＜0.05为差异有统计学意义。
结 果
1 研究对象的基本临床信息
Luminal A型、Luminal B型、HER-2过表达型和基底细胞型患者的平均年龄分别为44.2±4.5、44.5±5.3、45.0±5.3、46.2±5.0岁；BMI分别为27.14±2.23、27.56±2.74、26.89±3.09、26.97±3.05kg/m2；有吸烟史分别为4、7、3、4例；有饮酒史分别为20、29、11、16例；有生育史分别为42、61、23、35例；有哺乳史分别为35、52、19、29例。各型乳腺癌患者的年龄、BMI、吸烟史、饮酒史、生育史及哺乳史等方面的差异均无
统计学意义（P＞0.05）。
2 乳腺癌及癌旁组织中lncRNA MIAT的表达水平
lncRNA MIAT在癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织（P＜0.05），分别为4.23±1.06与2.14±0.63。其中以基底细胞型乳腺癌的表达差异最为明显。lncRNA MIAT在四种分子亚型乳腺癌的癌组织与癌旁组织中的表达水平见表2。
表2 不同分子亚型乳腺癌的癌组织及癌旁组织中lncRNA MIAT的表达水平Luminal A型（n＝53） Luminal B型（n＝81） HER-2过表达型（n＝30分子分型） 基底细胞型（n＝48） 总计（n＝212）癌组织 癌旁组织 癌组织 癌旁组织 癌组织 癌旁组织 癌组织 癌旁组织 癌组织 癌旁组织lncRNA MIAT（-log） 3.10±1.54 2.10±0.79 4.45±1.11 2.20±0.78 3.97±1.05 2.22±0.98 5.26±1.24 2.03±0.76 4.23±1.06 2.14±0.63 t值 2.997 4.345 3.976 4.578 4.234 P值0.034 0.008 0.025 ＜0.001 0.013
3 乳腺癌患者癌组织及血浆中lncRNA MIAT表达水平与临床特征的相关性
如表3所示，212例乳腺癌患者分别依据年龄、BMI、吸烟史有无、饮酒史有无、生育史有
无、哺乳史有无、乳腺癌分子亚型、TNM分期、肿瘤直径大小与腋窝淋巴结转移数等临床特征进行分组。癌组织与血浆中的lncRNA MIAT表达水平与乳腺癌分子分型、TNM分期、肿瘤直径及腋窝淋巴结转移数等因素显著相关（P＜0.05），而与患者年龄、BMI、吸烟史、饮酒史、生育史、哺乳史等因素无关（P＞0.05）。
表3 乳腺癌患者癌组织及血浆中lncRNA MIAT表达水平与临床特征的关系临床特征 例（n＝212）癌组织lncRNA MIAT（-log ）血浆lncRNA MIAT（-log）images/BZ_16_1338_1429_1363_1480.png±s t值/F值 P值images/BZ_16_1338_1429_1363_1480.png±s t值/F值 P值-1.652 0.331 -0.203 0.125＜40 81 4.04±1.31 12.06±1.23≥40 131 4.35±1.42 13.06±1.17 BMI -2.308 0.243 -1.352 0.336＜28 83 4.13±1.28 12.88±1.30≥28 129 4.33±1.36 12.25±1.31吸烟史 2.807 0.129 1.448 0.351有18 4.33±1.12 12.72±2.13无194 4.20±1.23 12.32±1.12饮酒史 1.127 0.523 2.103 0.521有76 4.38±1.24 12.25±1.14无136 4.19±1.01 13.18±1.15生育史 -1.543 0.578 -2.002 0.245有161 4.28±0.87 12.76±1.03无51 4.34±1.13 12.88±1.32哺乳史 -2.034 0.754 -1.465 0.356有135 4.18±0.88 12.52±1.01无77 4.37±1.09 13.02±1.32分子分型 3.654 0.003 3.956 ＜0.001 Luminal A型 53 3.87±1.54 12.13±1.19 Luminal B型 81 4.45±1.11 12.59±1.
21 HER-2过表达型 30 3.97±1.05 11.32±1.25基底细胞型 48 5.26±1.24 17.88±1.34 TNM分期Ⅰ～Ⅱ期 114 3.64±0.67 -4.022 0.029 9.12±1.30 -3.746 ＜0.001Ⅲ～Ⅳ期 98 4.89±1.10 16.56±1.25肿瘤直径（cm）＜2 138 3.71±0.78 -3.843 ＜0.001 10.09±1.21 -4.079 0.002≥2 74 5.22±1.22 15.87±1.52腋窝淋巴结转移数（个） -2.998 0.026 -4.032 ＜0.001＜3 153 3.89±0.88 10.61±1.31≥3年龄（岁）59 4.86±1.27 15.73±1.26
讨 论
乳腺癌是一类在分子水平上具有高度异质性的疾病。根据雌激素受体（estrogen receptor，ER）、孕激素受体（progesterone receptor，PR）、HER-2和增殖细胞相关核抗原表达的不同，可将乳腺癌分为4种分子亚型：Luminal A型、Luminal B型、HER-2过表达型和基底细胞型［11］。乳腺癌的分子分型对其方案的选择及临床预后的评估具有重要意义［12］。Luminal A型、Luminal B型与HER-2过表达型均有相应的靶向化疗药物，而基底细胞型乳腺癌（三阴性乳腺癌）由于ER、PR与HER-2三种受体的表达均为阴性，目前尚无靶向方案，5年生存率不到80%［13］。针对该类预后较差的乳腺癌，寻新的靶点与预后评估指标是关注的重点问题。
合成塔
近年来，关于lncRNAs在肿瘤领域的相关功能学研究逐渐成为新的热点。在乳腺癌领域，已经发现了近10种lncRNAs与乳腺癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭等过程有关［14］。其中，GAS5在乳腺癌中的表达显著低于癌旁正常组织，其过表达能显著抑制乳腺癌细胞的增殖过程并促进细胞凋亡［15］。H19在乳腺癌中的表达显著高于正常组织，尤其是ER阳性乳腺癌细胞中表达较高，可能参与了雌激素-促进细胞增殖的过程［16］。HOTAIR可通过与抑癌基因BRCA1竞争性结合受体从而促进正常乳腺细胞向肿瘤细胞转化，其过表达与远处转移及不良预后相关［17］。CHEN等［18］在基底细胞型中发现一种新的lncRNA LINC00993，并发现其呈显著低表达，而在利用腺病毒载体在基底细胞型细胞中过表达LINC00993后，细胞的增殖活性、克隆形成能力均受到一定程度的抑制，细胞凋亡率增加，细胞周期表现为G0/G1期阻滞，提示LINC00993可抑制基底细胞型细胞的细胞生长，促进其凋亡，起到类似“抑癌基因”的作用。
lncRNA MIAT是位于22号染体长臂的lncRNA，近年来研究发现，lncRNA MIAT与肿瘤的发生、发展及预后密切相关［6-8］。郑灶松等［19］对40例肾透明细胞癌组织和40例癌旁组织中lncRNA MIAT的表达水平进行检测分析发现，MIAT表达水平与肾透明细胞癌的TNM分期有关，且高表达患者的总体生存时间显著低于低表达患者。ZHANG等［20］与L
AI等［21］的研究发现，抑制非小细胞肺癌细胞的lncRNA MIAT表达可使锌指E盒结合同源框1与基质金属蛋白酶-9的表达下调，并导致癌细胞的增殖和侵袭能力降低，提示靶向抑制lncRNA MIAT对肿瘤具有意义。此 外，研 究 发 现 lncRNA MIAT 还 可 通 过miR-141/DDX5通路、miR-29a-3p/HDAC4通路等促进肿瘤细胞耐药性的产生［22-24］。上述研究结果均表明，lncRNA MIAT可多途径促进肿瘤的发生与转移，而靶向抑制其表达对提高患者的临床预后具有重要价值。在本研究中，我们首次发现lncRNA MIAT在乳腺癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织。进一步分析后，发现不同分子分型患者癌组织中MIAT表达水平存在显著差异，且基底细胞型乳腺癌患者MIAT的表达差异最为明显。乳腺癌方式的选择及预后主要取决于肿瘤的TNM分期与分子分型。而具有不同分子亚型的乳腺癌细胞对放化疗的灵敏度有较大差异，这是导致不同亚型患者预后出现很大差异的重要原因。基底细胞型乳腺癌是乳腺癌中恶性程度最高的一个类型，通过进一步分析MIAT表达水平与乳腺癌患者的临床病理特征，发现癌组织与血浆中的lncRNA MIAT表达水平与乳腺癌的分子分型、TNM分期、肿瘤直径及淋巴结转移数等显著相关。这些研究结果与前期ZHANG等［20］与LAI等［21］的基础研究结果相一致，MIAT在乳腺癌细胞的侵袭与转移中发挥重要作用，高表达的MIAT更倾向于指向不良预后，而抑制lncRNA MIAT表达则可能
成为乳腺癌的新靶点。然而，本次研究仍有如下不足：①本次研究纳入的患者均来自于本院，这可能会对研究结果造成一定的偏倚影响，今后需要多中心的队列研究来进一步验证我们的结果；②本研究纳入212例乳腺癌患者，纳入的例数仍然是有限的，后期需要更大样本量的研究来证实lncRNA MIAT在我国乳腺癌患者中的临床价值。
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